预防减蛋综合征(EDS)的疫苗制造技术

本发明专利技术的问题在于提供能够有效预防减蛋综合征(EDS)，且可以稳定供应的EDS疫苗。解决该问题的EDS疫苗以融合蛋白为有效成分，该融合蛋白是将具有卷曲螺旋形成单元的多肽和EDS病毒(EDSV)的纤维蛋白中的knob区域结合而成的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及预防鸡EDS的疫苗。更具体而言，该疫苗以重组蛋白和/或其多聚体为有效成分，上述重组蛋白由EDS的病因即EDS病毒(EDSV)的纤维蛋白中的“顶端球(knob)区域”和“具有卷曲螺旋形成单元的多肽”融合而成。通过给鸡接种该融合蛋白和/或其多聚体，可以诱导高血凝抑制(HI)抗体，从而预防EDS发病。
技术介绍
EDS作为一种鸡疾病，其主要症状为EDSV感染鸡的产蛋下降及产下畸形蛋(非专利文献1及非专利文献2)。EDSV归类为禽III群腺病毒，其特征在于，具有血凝活性，在鸡输卵管增殖。EDS无临床症状，或可见轻微程度腹泻，多发生于产卵高峰期的30～40周龄，会引起被感染鸡群持续3～8周产下蛋壳畸形蛋或产蛋量下降，因此，经济损失巨大。疫苗对预防非常有效(非专利文献3)，因此，灭活疫苗广泛用于蛋鸡的疫苗接种计划。EDS灭活疫苗以对发育鸭蛋中增殖的病毒灭活后与佐剂混合而成的疫苗为主。虽然EDSV在发育鸭蛋中可以良好地增殖(非专利文献4及非专利文献5)，但是，可能由于禽流感等传染病的发生，导致发育鸭蛋供应困难，因此，需要不依赖鸭蛋的疫苗抗原供应手段。EDSV具有约33kb的双链基因组DNA(非专利文献6)，血清型单一，菌株之间几乎不存在抗原性差异(非专利文献7)。病毒颗粒由结构蛋白构成(非专利文献1及非专利文献6)，该结构蛋白包括核心蛋白、构成衣壳的六邻体、以纤维状突起从衣壳突出的三聚体纤维及作为其基部的五邻体基座等。其中，六邻体(非专利文献8)、纤维及五邻体基座(非专利文献9)存在中和表位，其中的纤维与入侵宿主细胞有关(非专利文献10)，因此关于其的研究较多(非专利文献11)。纤维蛋白根据功能被分为三个区域(非专利文献12)。参与与五邻体基座连接的(非专利文献13)N端侧称为尾(Tail)，中间区域称为柄(Shaft)。根据报道，存在于C端的Knob具有血凝活性，参与与细胞受体的结合(非专利文献11)。根据报道，就人腺病毒5型而言，在纤维蛋白的三个区域中，knob存在中和表位，但立体结构对于发挥功能非常重要，通过与相邻柄区域的一部分共同表达而显示与受体的结合活性(非专利文献14)。构成纤维蛋白柄的柄区域具有重复结构(非专利文献12及非专利文献15)，且三个分子组装形成三重β螺旋结构(非专利文献15及非专利文献16)，其中，该重复结构由多个包含间隔有脯氨酸或甘氨酸的疏水区域的β螺旋结构(一个重复)连接而成。邻接柄的knob同样采取三聚体结构(非专利文献17)。通常，柄的一个重复由15个氨基酸构成(非专利文献12)，但EDSV几乎所有的重复均由更多的氨基酸构成(非专利文献6)。根据报道，在人腺病毒中，如剪短柄长，则与受体的结合性及对培养细胞的感染性降低(非专利文献18)。根据报道，在大肠杆菌中表达EDSV与knob相邻的柄区域的C端部位的34个氨基酸，并作为油性疫苗给鸡接种，在接种后的鸡中，中和抗体得到诱导(非专利文献19～20、专利文献1)。现有技术文献专利文献专利文献1：国际公开第2004/078977号非专利文献非专利文献1：Adair,B.M.&Fitzgerald,S.D.:Egg Drop Syndrome.In Diseases of Poultry,12th ed.(Saif,YM et al.ed.),p266-276,Blackwell Publishing,Ames.2008非专利文献2：山口成夫：産卵低下症候群.「鳥の病気第7版」(鶏病研究会編)，p50-53，鶏病研究会，東京，2010(山口成夫：减蛋综合征.“鸟类疾病第7版”(鸡病研究会编著)，p50-53，鸡病研究会，东京，2010)非专利文献3：Baxendale,W.,Lutticken,D.,Hein,R.&McPherson,I.:The results of field trials conducted with an inactivated vaccine against the egg drop syndrome 76(EDS 76).Avian Pathol.,9:77-91,1980非专利文献4：野中富士男，松尾和夫，山田進二：産卵低下症候群-1976(EDS-76)ウイルスの培養細胞および発育鶏卵での増殖性ならびに病原性.日本獣医師会雜誌，37：510-515，1984(野中富士男、松尾和夫、山田进二：减蛋综合征-1976(EDS-76)病毒的培养细胞及发育鸡蛋中的增殖性以及病原性.日本兽医协会杂志，37：510-515，1984)非专利文献5：東原稔，高井伸二，日高温子，宝達勉，蛭间正巳，渡辺義計，松本稔：産卵低下症候群1976(EDS-76)ウイルスの分離.日本獸醫學雜誌，45：603-612，1983(东原稔、高井伸二、日高温子、宝达勉、蛭间正巳、渡边义计、松本稔：减蛋综合征1976(EDS-76)病毒的分类.日本兽医学杂志，45：603-612，1983)非专利文献6：Hess,M.,Blocker,H.&Brandt,P.:The complete nucleotide sequence of egg drop syndrome virus:an intermediate between mastadenoviruses and aviadenoviruses.Virology,238:145-156,1997非专利文献7：Tsukamoto,K.,Kuwabara,M.,Kaneko,M.,Mase,M.&Imai,K.:No evidence for adaptation of current egg drop syndrome 1976 viruses to chickens.Avian Dis.,48:220-223,2004非专利文献8：Toogood,C.I.,Crompton,J.&Hay,R.T.:Antipeptide antisera define neutralizing epitopes on the adenovirus hexon.J.Gen.Virol.,73:1429-1435,1992非专利文献9：Gahery-Segard,H.,Farace,F.,Godfrin,D.,Gaston,J.,Lengagne,R.,Tursz,T.,Boulanger,P.&Guillet,J.G.:Immune response to recombinant capsid proteins of adenovirus in humans:antifiber and anti-penton base antibodies have a synergistic effect on neutralizing activity.J.Virol.,72:2388-2397,1998非专利文献10：Louis,N.,Fender,P.,Barge,A.,Kitts,P.&Chroboczek,J.:Cell-binding domain of adenovirus serotype 2fiber.J.Virol本文档来自技高网...

【技术保护点】
融合蛋白，其是由具有卷曲螺旋形成单元的多肽与减蛋综合征(EDS)病毒(EDSV)的纤维蛋白中的顶端球区域(Knob)结合而成的。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.21 JP 2014-0876201.融合蛋白，其是由具有卷曲螺旋形成单元的多肽与减蛋综合征(EDS)病毒(EDSV)的纤维蛋白中的顶端球区域(Knob)结合而成的。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其包括所述多肽和Knob之间的连接物序列和/或标签序列。3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中，所述卷曲螺旋形成单元来自天然多聚体形成蛋白。4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其中，所述天然多聚体形成蛋白为GCN4或软骨基质蛋白(CMP)。5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中，GCN4或CMP结合于Knob的C端侧。6.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中，GCN4结合于Knob的C端侧。7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白包括由序列编号13所示氨基酸序列构成的多肽，或由序列编号13所示氨基酸序列删除、取代或者添加1个或者多个氨基酸而成的氨基酸序列构成的多肽。8.根据权利要求5所述的融合蛋白，其中，CMP结合于Knob的C端侧。9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白包括由序列编号23所示氨基酸序列构成的多肽，或由序列编号23所示氨基酸序列删除，取代或者添加1个或者多个氨基酸而成的氨基酸序列构成的多肽。10.根据权利要求4所述的融合蛋白，其中，GCN4或CMP结合于Knob的N端侧。11.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中，GCN4结合于Knob的N端侧。12.根据权利要求11所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白包括由序列编号21所示氨基酸序列构成的多肽，或由序列编号21所示氨基酸序列删除、取代或者添加1个或者多个氨基酸而成的氨基酸序列构成的多肽。13.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中，CMP结合于Knob的N端侧。14.根据权利要求13所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白包括由序列编号25所示氨基酸序列构成的多肽，或由序列编号25所示氨基酸序列删除、取代或者添加1个或者多个氨基酸而成的氨基酸序列构成的多肽...

【专利技术属性】
技术研发人员：山崎宪一，安藤清彦，坂元隆一，末永清刚，新川武，上藤洋敬，原国哲也，宮田健，
申请(专利权)人：一般财团法人化学及血清疗法研究所，佳特泰斯创新株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP