本发明专利技术涉及用于预防或治疗包括人乳头瘤病毒变形体及免疫增强剂的宫颈癌的组合物。更具体地，融合蛋白通过诱导HPV16及18型抗原特异性免疫应答治疗由HPV引起的肿瘤，所述融合蛋白包括：融合多肽，该融合多肽被重组以使人乳头瘤病毒16及18型的抗原E6、E7的三维结构变形；信号肽，该信号肽用于分泌所述融合多肽；和免疫增强肽。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于预防或治疗宫颈癌的、包含人乳头瘤病毒ihumanpapillomavirus ; HPV)变形体及免疫增强剂的组合物。更具体地，融合蛋白通过诱导HPV16和18型抗原特异性免疫应答治疗由HPV引起的肿瘤。所述融合蛋白包括融合多肽 信号肽及免疫增强肽，所述融合多肽被重组，以使作为人乳头瘤病毒16和18型的抗原E6、E7的三维结构变形。
技术介绍
众所周知，宫颈癌{cervical cancer)是由于受人乳头瘤病毒16和18型等的高危型人乳头瘤病毒的感染而引起的疾病Hausen, H et al.Biochem Biophys Acta1996, 1288; F55-F78，Mark H et al.J Natl Cancer Inst 1993, 85;沒姑-沒份)。在HPV蛋白中E6、E7蛋白对宫颈癌的发病起主要作用，而且已确认在宫颈癌患者的肿瘤组织中表达99%,从而成为制备用于治疗和预防宫颈癌的疫苗的主要祀物质(ra/ Knebel Doeberitzet al.1nt.J.Cancer 1992, 51;与已知用作肿瘤抑制蛋白p53结合,通过促进P53的分解，用细胞凋亡^poptosis)途径阻止细胞周期的进行。E7与作为肿瘤抑制因子的视网膜母细胞瘤蛋白pRb {retinoblastoma /Troiei/ )结合,通过使之失活并促进其分解，诱导细胞周期进入 S 期{Cobrinik et al., Trends Biochem Sci 1992，17:312-5、。然而，为治疗宫颈癌，在使用通过同时表达HPV16的E6、E7蛋白的核酸序列的组合物的临床试验中，其疗效并不显著{Garcia F et al.0bstet Gynecol 2004, 103;317-326)。此结果表明，仅施用HPV抗原是无法发生足以治疗或抑制宫颈癌的抗原特异性免疫应答的。因此，为治疗子宫癌，需增强E6、E7的免疫原性(Jmmunogenicity),并且需消除所述蛋白的致癌能力。
技术实现思路
技术问题 本专利技术的目的在于，提供用于预防或治疗由HPV引起的疾病的新型融合蛋白及编码所述融合蛋白的多核苷酸所述融合蛋白可抑制HPV E6、E7蛋白的致癌能力并展现增强的免疫原性。本专利技术的另一个目的在于，提供表达所述融合蛋白的重组载体meter)、包含所述载体的宿主细胞以及用所述宿主细胞表达融合蛋白的方法。本专利技术的另一个目的在于，提供用所述融合蛋白的、用于预防或治疗由HPV引起的疾病的组合物。 本专利技术的另一个目的在于，提供用所述组合物的、用于预防或治疗由HPV引起的疾病的方法。技术方案 为达到上述目的，一方面，本专利技术提供融合蛋白，该融合蛋白包括:融合多肽，即三维结构变形的、源于人乳头瘤病毒16和18型并包含SEQ ID NO:1氨基酸序列的E6、E7 ;用于分泌所述融合多肽的信号肽；和免疫增强肽。另一方面，本专利技术提供多核苷酸，该多核苷酸用于编码本专利技术的融合蛋白。另一方面，本专利技术提供重组载体，该重组载体包括本专利技术的多核苷酸。另一方面，本专利技术提供宿主细胞，该宿主细胞由本专利技术的重组载体转化而成。 另一方面，本专利技术提供用于表达本专利技术的融合蛋白的方法，该方法是通过培养本专利技术的经转化的宿主细胞完成的。另一方面，本专利技术提供用于预防或治疗由人乳头瘤病毒引起的疾病的组合物，该组合物包括作为活性成分的、选自本专利技术的融合蛋白、由表达所述融合蛋白的重组载体转化而成的宿主细胞及其均衆(homogenate)中的一种或多种的物质。另一方面，本专利技术提供用于预防或治疗由人乳头瘤病毒引起的疾病的方法，该方法包括向需要者施用有效剂量的本专利技术的组合物的步骤。有益.效果 本专利技术所制备的融合蛋白通过诱导高的HPV16和18型抗原特异性免疫应答来治疗由HPV引起的肿瘤，所述融合蛋白包括为改变源于HPV16和18型E6、E7蛋白的三维结构而被重组的融合蛋白、用于向细胞外分泌该融合蛋白的信号肽及免疫增强肽。附图说明图1展示了对抗癌模型中的C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞株TC-1并经过本专利技术的GX-188E治疗后展示的HPV16的E6特异性⑶8+ T细胞应答的图。图2展示了对抗癌模型中的C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞株TC-1并经过本专利技术的GX-188E治疗后展示的HPV16的E7特异性⑶8+ T细胞应答的图。图3展示了对抗癌模型中的C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞株TC-1并经过本专利技术的GX-188E治疗后展示的HPV18的E6特异性⑶8+ T细胞应答的图。图4展示了对抗癌模型中的C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞株TC-1并经过本专利技术的GX-188E治疗后展示的HPV18的E7特异性⑶8+ T细胞应答的图。图5展示了对抗癌模型中的C57BL/6小鼠皮下注射肿瘤细胞株TC-1并经过本专利技术的GX-188E治疗后展示的抗癌效果的图。具体实施例方式下面将详细地说明本专利技术的内容。本专利技术涉及融合蛋白，该融合蛋白包括:源于人乳头瘤病毒16及18型并包含SEQID NO:1氨基酸序列的三维结构变形的E6、E7融合多肽；用于分泌所述融合多肽的信号肽；和免疫增强肽。本专利技术的融合蛋白包括融合多肽，该融合多肽被重组以使源于人乳头瘤病毒16及18型的E6、E7的三维结构变形。更具体地，所述融合多肽由源于人乳头瘤病毒16型的E6蛋白的第I 85位的氨基酸、E7蛋白的第I 65位的氨基酸、E6蛋白的第70 158位的氨基酸、E7蛋白的第5(Γ98位的氨基酸和源于人乳头瘤病毒18型的Ε6蛋白的第1 85位的氨基酸、Ε7蛋白的第广65位氨基酸、Ε6蛋白的第7(Γ158位的氨基酸、Ε7蛋白的第5(Tl05位的氨基酸组成。最为具体地，融合多肽可包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。此外，所述信号肽指包括约2(Γ30个氨基酸的肽，所述肽能将在细胞内表达的蛋白，尤其将包含Ε6、Ε7融合多肽的蛋白分泌至细胞外。而且，用于编码所述肽的核酸序列被称为“分泌信号序列”。由于本专利技术的Ε6、Ε7融合多肽是在受病毒感染的细胞的核内表达的蛋白/TTOtei/7)，其免疫力弱。因此，由分泌信号序列表达的信号肽诱导三维结构变形的E6、E7分泌至细胞外,从而增强抗原特异性体液免疫应答GtoffioraTr immune,(95/70/75(9)及细胞免疫应答(ceBw/ar immune response ) 所述信号肽可使用包括哺乳动物等的高等真核细胞内的信号肽，如tPA(组织型纤溶酶原激活物)、HSV gDs，或可使用生长激素等的分泌信号序列。优选地，可使用tPA。更优选地，可包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。此外，免疫增强肽指激活与免疫应答相关的细胞(如，树突状细胞等)以增强免疫应答的妝。 所述免疫增强肽可使用⑶40配体、Flt3配体(fms样酪氨酸激酶3配体)、鞭毛蛋白或0X40等。优选地，可使用Flt3配体。所述Flt3配体是能够诱导树突状细胞(dendriticcell, DC)的增殖与成熟的因子，经抗原可增强免疫应答，而且在与肿瘤抗原融合时具有能非常有效地减少肿瘤的效果。更优选地，所述Flt3配体包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列。另一方面，本专利技术涉及用于编本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种融合蛋白，其特征在于，该融合蛋白包括:源于人乳头瘤病毒16及18型并包含SEQ ID NO:1氨基酸序列的三维结构变形的E6、E7融合多肽；用于分泌所述融合多肽的信号肽；和免疫增强肽。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，信号肽为选自组织型纤溶酶原激活物tPa、HSV gDs及生长激素的分泌信号肽中的一种或多种的融合蛋白。3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，信号肽为包含SEQID N0:2氨基酸的融合蛋白。4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，免疫增强肽为选自CD40配体、fms样酪氨酸激酶3 (Flt3)配体、鞭毛蛋白及0X40中的一种或多种的融合蛋白。5.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，免疫增强肽为包含SEQID N0:3氨基酸的融合蛋白。6.多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸编码权利要求1所述的融合蛋白。7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸能编码人乳头瘤病毒的E6、E7融合多肽并包含SEQ ID NO:3碱基序列。8.根据权利要求6所述的多核苷酸，其特征在于，该多核苷酸能编码信号肽并包含SEQ...
【专利技术属性】
技术研发人员：成英哲，徐尚焕，徐有石，
申请(专利权)人：株式会社吉耐森，株式会社拜德，
类型：
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。