包含颗粒状脱细胞组织的混合凝胶制造技术

本发明专利技术提供：一种混合凝胶，其中包含颗粒状脱细胞组织(将来自动物的生物组织进行脱细胞处理所得的脱细胞生物组织粉碎而获得)、纤维蛋白原和凝血酶；包含该混合凝胶的细胞培养基材；该混合凝胶的制作方法；以及包含颗粒状脱细胞组织和生物组织粘合剂的试剂盒。本发明专利技术的混合凝胶具有促进干细胞的分化和功能获取的效果、以及对各种疾病的治疗效果。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及再生医疗
，具体而言，涉及包含：将使来自动物的生物组织进行脱细胞所得的组织(脱细胞生物组织)粉碎而获得的颗粒状脱细胞组织、纤维蛋白原和凝血酶的混合凝胶及其利用方法。
技术介绍
将来自他人的生物组织的移植片进行移植时，接受移植者侧组织对移植片的排斥反应成为问题。作为这种问题的解决方法，期待着开发人工组织。作为原材料，尝试了各种高分子，但由于这些原材料与生物组织的相容性低，因此有时会发生移植片与生物组织的接合部位的脱落或发生感染。因此，为了提高与生物组织的相容性，开发了如下技术：使用从生物组织中除去细胞而残留的支持组织即脱细胞生物组织作为移植片的技术；使用将这样的脱细胞生物组织粉碎而获得的组织(颗粒状脱细胞组织)的技术。其中，CryoLife公司开发了可最初商业利用的进行了脱细胞的来自人的心瓣膜，AutoTissue公司为了治疗人的心脏疾病开发了进行了脱细胞的来自猪的心瓣膜。关于脱细胞组织、颗粒状脱细胞组织有以下的报道。非专利文献1(SasakiS.等人,Mol.Vis.,2009,15,2022-2028)、非专利文献2(HashimotoY等人,Biomaterials,2010,31,3941-3948)报道了：将通过高静水压处理进行了脱细胞的猪角膜移植到兔眼中时发挥功能。专利文献1(日本特开2013-42677号公报)公开了一种适合角膜的脱细胞处理的处理液。非专利文献3(FunamotoS.等人,Biomaterials,2010,31,3590-3595)报道了：通过高静水压处理将来自猪的大动脉脱细胞，对所得的脱细胞组织的力学特性或体内能力进行评价的结果，力学特性没有受到高静水压处理的不良影响，炎症反应得到抑制，该组织可以耐受动脉血压，而且在管腔表面没有形成血栓，还报道了：在移植该血管后4周发生细胞浸润到血管壁的现象。非专利文献4(NegishiJ.等人,J.Artif.Organs,2011,14,223-231)报道了：在胶原蛋白变性得到了抑制的条件下将来自大鼠的颈动脉脱细胞，再将该脱细胞的颈动脉移植到大鼠体内时，动脉闭塞得到抑制。非专利文献5(SingelynJ.M.等人,Biomaterials,2009,30,5409-5416)报道了：利用表面活性剂将猪的心肌脱细胞，之后经过冷冻干燥、粉碎和胃蛋白酶消化，所得的心肌基质自身缔合，形成多孔性纤维状水凝胶；以及内皮细胞、平滑肌细胞渗入到该水凝胶中，使小血管的形成增加。非专利文献6(Seif-NaraghiS.等人,J.Vis.Exp.,2010,46,e2109)是将该水凝胶应用于左室自由壁后研究宿主反应。非专利文献7(SingelynJ.M.等人,J.Am.Coll.Cardiol.,2012,59,751-763)报道了：将该水凝胶应用于心肌梗塞模型大鼠时，使内源性的心肌细胞增加，保持了心脏功能，而没有引起心律不齐。非专利文献8(SonyaB.等人,Sci.Transl.Med.,2013,5,173ra25)报道了：将该水凝胶应用于猪的心肌梗塞模型时，心脏功能、心室容积、心脏壁的整体运动有所改善，另外，该水凝胶与大鼠具有生物相容性。非专利文献9(WolfM.T.等人,Biomaterials,2012,33,7028-7038)公开了：将来自猪的真皮或来自猪的膀胱经过脱细胞处理、冷冻干燥和胃蛋白酶处理而得到的细胞外基质水凝胶应用于大鼠腹壁缺损部位时，与来自真皮的凝胶相比，来自膀胱的凝胶被更快地分解，肌肉形成量更多。但是，该水凝胶在临床上并没有充分应用于靶部位的方法，因此设想其从应用部位剥落或者添加的基质流失而从目标部位消失。颗粒状脱细胞组织根据其种类期待着其通过自凝胶化而留置在应用部位，但凝胶化无法瞬间完成，而且与靶部位的亲和性也不充分。特别是在心脏这样的动态组织中，该水凝胶难以留置在应用部位，其结果，暗示无法获得充分的效果。专利文献2(日本特表2002-518319号公报)报道了：将对人皮肤的脱细胞组织基质AlloDerm(LifeCell公司制造)进行低温破坏而获得的粒状无细胞组织基质应用于大鼠或猪时，没有发现严重的急性炎症性应答的征兆。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2013-42677号公报；专利文献2：日本特表2002-518319号公报；专利文献3：日本专利第4092397号公报；专利文献4：日本再公表2008-111530号公报；专利文献5：日本特开2009-50297号公报；专利文献6：日本特开2010-227246号公报；专利文献7：日本专利第4189484号公报；非专利文献非专利文献1：SasakiS.等人,Mol.Vis.,2009,15,2022-2028；非专利文献2：HashimotoY.等人,Biomaterials,2010,31,3941-3948；非专利文献3：FunamotoS.等人,Biomaterials,2010,31,3590-3595；非专利文献4：NegishiJ.等人,J.Artif.Organs,2011,14,223-231；非专利文献5：SingelynJ.M.等人,Biomaterials,2009,30,5409-5416；非专利文献6：Seif-NaraghiS.等人,J.Vis.Exp.,2010,46,e2109；非专利文献7：SingelynJ.M.等人,J.Am.Coll.Cardiol.,2012,59,751-763；非专利文献8：SonyaB.等人,Sci.Transl.Med.,2013,5,173ra25；非专利文献9：WolfM.T.等人,Biomaterials,2012,33,7028-7038；非专利文献10：OttH.C.等人,NatureMedicine,2008,14,213-221；非专利文献11：BarakatO.等人,J.Surg.Res.,2012,173,e11-e25；非专利文献12：ParkK.M.等人,Transplant.Proc.,2012,44,1151-1154；非专利文献13：OttH.C.等人,NatureMedicine,2010,16,927-933；非专利文献14：YangB.等人,TissueEng.PartCMethods,2010,16,1201-1211；非专利文献15：DeQuachJ.A.等人,TissueEng.PartA,2011,17,2583-2592。
技术实现思路
专利技术所要解决的课题如上所述，显示出颗粒状脱细胞组织没有对移植片的排斥反应，且对疾病部位的再生、治愈有效，但更理想的颗粒状脱细胞组织希望具备以下几点。即，一种支架，在该支架处参与再生、治愈的来自患者的细胞或导入的细胞在靶部位聚集，或者靶部位的成熟细胞脱分化，这些细胞的增殖、分化、再分化的进程快速地进行；或者由颗粒状脱细胞组织重构本文档来自技高网...

【技术保护点】
混合凝胶，其包含：将使来自动物的生物组织进行脱细胞所得的组织即脱细胞生物组织粉碎而获得的颗粒状脱细胞组织、纤维蛋白原和凝血酶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.05.07 JP 2013-0973991.混合凝胶，其包含：将使来自动物的生物组织进行脱细胞所得的组织即脱细胞生物组织粉碎而获得的颗粒状脱细胞组织、纤维蛋白原和凝血酶。
2.权利要求1所述的混合凝胶，其中，动物为人以外的动物。
3.权利要求1或2所述的混合凝胶，其中，待被脱细胞的生物组织为具有基质结构的生物组织。
4.权利要求1～3中任一项所述的混合凝胶，其中，待被脱细胞的生物组织为选自心脏、肝脏、肾脏、肺、脑和脊髓的一种以上的生物组织。
5.权利要求1～4中任一项所述的混合凝胶，其中，脱细胞生物组织为对生物组织进行高静水压处理而获得的脱细胞生物组织。
6.权利要求1～5中任一项所述的混合凝胶，其中，凝血酶为0.8U/mL以上的浓度。
7.疾病治疗药，其包含权利要求1～6中任一项所述的混合凝胶。
8.权利要求7所述的治疗药，其中，疾病治疗药为选自心肌梗塞治疗药、神经损伤疾病治疗药和皮肤冻伤治疗药的治疗药。
9.细胞移植辅剂，其包含权利要求1～6中任一项所述的混合凝胶。
10.权利要求9所述的细胞移植辅剂，其中，细胞为来自心脏的细胞、神经前体细胞、或来自组织干细胞的细胞。
11.细胞培养基材，其包含权利要求1～6中任一项所述的混合凝胶。
12.权利要求11所述的细胞培养基材，其中，细胞为来自心脏的细胞、神经前体细胞、或来自组织干细胞的细胞。
13.混合凝胶的制作方法，该方法包括下述步骤：将来自动物的生物组织脱细胞以获得脱细胞生物组织的步骤；粉碎所述脱细胞生物组织以获得颗粒状脱细胞组织的步骤；以及混合所述颗粒状脱细胞组织、纤维蛋白原和凝血酶的步骤。
14.权利要求13所述的制作方法，其中，动物为人以外的动物。
15.权利要求13或14所述的制作方法，其中，待被脱细胞的生物组织为具有基质结构的生物组织。
16.权利要求13～15中任一项所述的制作方法，其中，待被脱细胞的生物组织为选自心脏、肝脏、肾脏、肺、脑和脊髓的一种以上的生物组织。
17.权利要求13～16中任一项所述的制作方法，其中，获得脱细胞生物组织的步骤包括：将来自动物的生物组织脱细胞的步骤；以及微波照射并清洗的步骤。
18.权利要求13～17中任一项所述的制作方法，其中，脱细胞为对生物组织进行高静水压处理来进行的。
19.权利要求13～18中任一项所述的制作方法，其中，粉碎脱细胞生物组织的步骤包括：切碎脱细胞生物组织的步骤；将切碎了的脱细胞生物组织冷冻干燥或冻结的步骤；以及将冷冻干燥或冻结了的脱细胞生物组织粉碎的步骤。
20.权利要求19所述的制作方法，该方法还包括：将粉碎了的脱细胞生物组织根据颗粒大小进行筛分的步骤。
21.权利要求13～20中任一项所述的制作方法，其中，凝血酶为0.8U/mL以上的浓度。
22.组织再生疗法，该疗法包括：将使来自动物的生物组织进行脱细胞所得的组织即脱细胞生物组织粉碎而获得的颗粒状脱细胞组织和纤维蛋白胶应用于动物组织。
23.权利要求22所述的组织再生疗法，其中，成为脱细胞生物组织来源的动物为人以外的动物。
24.权利要求22或23所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：松田纯一，宫柱澄香，原野里美，岸田晶夫，木村刚，根岸淳，樋上哲哉，舩本诚一，日渡谦一郎，田崎晃子，
申请(专利权)人：一般财团法人化学及血清疗法研究所，国立大学法人东京医科齿科大学，北海道公立大学法人札幌医科大学，株式会社艾迪科，
类型：发明
国别省市：日本;JP