抗ＲＳＶ　Ｇ蛋白抗体制造技术

能与ＲＳＶ?Ｇ蛋白的保守表位结合并且在给予人类对象时免疫原性很小的各种单克隆抗体和片段，可用于治疗ＲＳＶ感染。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及可与呼吸道合胞病毒(RSV)G蛋白所包含的具有重要功能的表位产生 免疫反应的抗体，当给予人类对象时其免疫原性很小。这些抗体可用于增强人类对象抗RSV 感染的耐受性以及降低已感染的个体体内的感染水平或减轻RSV感染所引起的症状。背景领域从全球来说，其中包括美国、欧洲、澳大利亚和日本，长期以来RSV感染都是一个 大问题。对于早产儿、幼儿和老年人来说，RSV感染尤其麻烦，对于那些免疫系统功能下降 的成年人来说也是如此。据估计，1岁以下的儿童中至少约有2/3，1-4岁的几乎所有儿童 都至少感染过一次RSV，其中大多数都会康复，无需继续医学观察。然而，5-10%的患者会 发生慢性严重感染，这个因素被认为可在后期诱发儿童出现喘鸣和哮喘样症状。RSV有两 个主要的表面糖蛋白，F和G。目前唯一上市的抗RSV单克隆抗体只被批准用于预防早产儿 感染RSV，是抗F蛋白的抗体。该抗体的名称是帕利珠单抗(Synagis , MedImmune制造)， 其作用广谱，因为不同病毒株之间的F蛋白的序列是保守的。但是，G蛋白是相当易变的， 除了中央“CX3C”区之外，该区在近100个测序的病毒株中几乎不发生变异。该区包含一 个已被证明可与CX3C趋化因子(fractalkine)受体相互作用的基序。这种相互作用被认 为是导致RSV感染病程延长的原因，其机制是通过抑制抗病毒的有效免疫反应Tripp，R. A 等，Nature Immunology (2001) 2 :732_738。研究证明，该区Toll-样受体4的拮抗剂，这被 认为也会抑制有效免疫反应:Polack 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2005) 102 8996-9001 ； Shingai 等，Int，1 Immunology (2008)电子版，7 月 8 日。人们起初试图通过疫苗免疫的方式预防RSV感染，结果适得其反。用甲醛灭活的 RSV或用RSV G糖蛋白作为疫苗免疫以后，疾病和肺嗜酸性粒细胞增多症症状加重，这是由 上面所提到的G蛋白上被称为CX3C区的保守序列引起的，该区可模拟趋化因子CX3C趋化 因子的作用。(Haynes，L. M等，J.Virol. (2003)77:9831-9844.)。利用抗G蛋白的抗体诱 导获得性免疫通常被认为不现实，因为该蛋白的序列在不同病毒株之间缺乏保守性后来同一研究小组证实，RSV感染或疫苗免疫引起的抗G蛋白抗体反应和G蛋白 与CX3C趋化因子CX3C受体的结合被抑制以及和RSV G蛋白介导的白细胞趋化作用的调节 有关(Harcourt, J. L等，J. I. D. (2004) 190 1936-1940)，这种结合被抑制后会对T细胞反 应产生不良影响(Harcourt, J. L 等，J. Immunol. (2006) 176:1600-1608)。最近研制的疫 苗研究已避免了甲醛固定疫苗相关疾病发生恶化的情况，但是研究发现新疫苗所产生的免 疫反应很快就会消退(数周到数月)，这与对天然RSV的免疫记忆能力差是一致的Yu等， J.Virol. (2008)82:2350-2357。这种病毒与其他病毒不同，通常会重复感染。G蛋白的免疫抑制特性可能是产生这种现象的原因。抗G蛋白的单克隆抗体已有20多年的历史。Anderson，L. J.等，J. Virol. (1988)62 :4232-4238描述了 F和G蛋白单克隆抗体(mAb)混合物以及单一mAb中和RSV的 能力。后来Sullender，W.，Virol. (1995)209 :70_79通过抗原性分析研究了结合G蛋白相 关的mAb，被称为131-2G。研究发现，这个抗体既可以结合A型RSV，也可以结合B型RSV， 这是RSV的两个主要病 毒株。另外，Mekseepralard,C.等，J. Gen. Virol. (2006)87 :1267_1273 总结了较早发 表的文章，结果发现给予抗F和G蛋白的抗体可在啮齿类动物模型中产生抗实验性感染的 获得性保护作用。这些文章包括 Routledge 等，J. Gen. Virol. (1988)69 293-303 ；Stott, E. J.等，J. Virol. (1986)60 :607_613 ；Taylor, G.等，Immunol. (1994)52 :137_142 ；以及 Walsh, Ε. Ε.等，Infect. Immun. (1984)43:756-758。在后续文章中，Mekse印ralard 等人发 现抗G蛋白的特异性单克隆抗体(1C2)需要糖基化才能在体外存在补体的情况下或者在用 于小鼠体内时中和病毒。作者注意到G蛋白的173-186位氨基酸是保守的，1C2就是抗这个 保守区的；但是制备无免疫原性抗体的方法，即将小鼠Fab嵌合到人Fc区，还是相当不成熟 的。另外，Corbeil，S.等，Vaccine (1996) 14 :521_525证明，补体系统参与用小鼠单克 隆抗体18A2B2被动免疫小鼠再感染RSV之后产生的保护作用，尽管这种抗体在体外没有显 示出中和能力。PCT出版物WO 00/43040描述了抗P物质抗体在减轻RSV感染相关的呼吸道炎症 中的应用。P物质是一种已知的促炎症反应介导因子，给予RSV的G蛋白可提高其产生量， 无G蛋白或中央保守区带有功能缺陷点突变的RSV突变株缺乏P物质的产生=Haynes等，J Virol(2003)77 :9831_9844。美国专利出版物2006/0018925描述了能够阻断G蛋白CX3C区与其受体相互作用 的抗体和小肽，并要求了二者的权利。这些组合物被认为可用于调节RSV感染和诱导免疫。 尽管该专利也建议利用人源化的小鼠抗体来证明这些抗体的治疗和预防价值，但是实际上 这种人源化形式的抗体还未被制备和描述出来。PCT出版物W02007/101441描述了一种用于治疗RSV感染的重组多克隆抗体，被称 为Symphogen。重组多克隆抗体由分离自人血清的不同单克隆抗体组成。该出版物的表5描 述了据说可与位于A亚型RSV G蛋白的164-176位氨基酸位置上的“保守区”结合的12种 单克隆抗体。根据检测结果，其中5种抗体与G蛋白有亲和性，亲和性的大小在100-500pM 范围内。这些抗体中有两个抗体经蚀斑减少中和试验(PRNT)检测发现具有中和能力；其中 一个的EC5tl值约为2. 5 μ g/ml，另一个根本没有显示出中和特性。
技术实现思路
从最近感染过RSV的人类供者中已经鉴定出了可与RSV G蛋白而不是F蛋白发生 特异性免疫反应的抗体，其中包括与A型和B型病毒株都发生免疫反应的那些抗体。另外， 最初由Anderson等，J.Virol. (1988)62 :4232_4238描述的小鼠抗G蛋白抗体经过改造后 可使其在给予人类对象时产生免疫排斥的几率达到最低。本专利技术的抗体可用于治疗药物， 也可用于提高人类对象对RSV的耐受性。更特殊的是，抗A亚型G蛋白160-176位内保守基序的抗体是有治疗效果的，可将已感染的对象体内的病毒清除，并且能够减轻RSV感染所导致的呼吸道炎症，以及可用于预防。因本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的单克隆抗体（ｍＡｂ）或其免疫反应性片段，所述抗体或片段：（ａ）能结合呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）Ａ２病毒株Ｇ蛋白１６０－１７６位残基之内的表位，（ｂ）当给予人类对象时其免疫原性很小，以及（ｃ）经蚀斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）试验检测，其中和作用的ＥＣ↓［５０］小于５００ｎｇ／ｍｌ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-10-25 61/000,469;US 2008-8-15 61/089,401一种分离的单克隆抗体(mAb)或其免疫反应性片段，所述抗体或片段(a)能结合呼吸道合胞病毒(RSV)A2病毒株G蛋白160-176位残基之内的表位，(b)当给予人类对象时其免疫原性很小，以及(c)经蚀斑减少中和试验(PRNT)试验检测，其中和作用的EC50小于500ng/ml。2.如权利要求1所述的mAb或片段，其与RSVA2的G蛋白的亲和力为至少InM。3.如权利要求1或2所述的mAb或片段，其还能结合RSVB型病毒株G蛋白上的相应表位。4.如权利要求1所述mAb，其为完整抗体的形式。5.如权利要求1-3中任一项所述的mAb或片段，其为人源化131-2G或其免疫特异性片 段，或者是 1F12、3G12、1A5、3D3、1G1、2B11、5D8、2D10、3F9、1D4、1G8、6A12 或 10C6 或其免疫 特异性片段。6.如权利要求5所述的mAb，其为完整抗体。7.—种药物组合物，该组合物包含作为唯一活性成分的如权利要求1所述的分离的单 克隆抗体或片段以及药学上可接受的赋形剂。8.—种药物组合物，该组合物包含作为唯一活性剂的如权利要求1所述的单克隆抗体 或片段和与RSV B型病毒株G蛋白有免疫反应性的另一种单克隆抗体或片段以及药学上可 接受的赋形剂。9.一种药物组合物，该组合物包含作为唯一活性剂的如权利要求1所述的单克隆抗体 或片段和与RSV有免疫反应性的抗体之外的其他药物以及药学上可接受的赋形剂。10.如权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述其他药物是抗RSV药。11.一种药物组合物，该组合物包含作为唯一活性剂的如权利要求1所述的单克隆抗 体或片段和与RSV B型病毒株G蛋白有免疫反应性的另一种单克隆抗体或其片段以及与 RSV有免疫反应性的抗体之外的其他化合物以及药学上可接受的赋形剂。12.如权利要求11所述的组合物，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：LM高瓦，EJ科拉瑞尼，B基特，O福德，
申请(专利权)人：特雷利斯生物科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]