抗磷酸化Ｔａｕ蛋白抗体及其在ＡＤ症异常磷酸化Ｔａｕ蛋白水平测定上的用途。抗体为分别抗Ｔｈｒ１８１，Ｔｈｒ２０５，Ｔｈｒ２３１，Ｓｅｒ２６２，Ｓｅｒ３９６，Ｓｅｒ４０４位点磷酸化修饰Ｔａｕ蛋白的兔多克隆抗体。Ｔａｕ蛋白包括来自人、大鼠、小鼠物种中的Ｔａｕ蛋白。抗磷酸化Ｔａｕ蛋白抗体在ＡＤ症异常磷酸化Ｔａｕ蛋白水平测定上的用途，步骤是：通过建立ＡＤ症大鼠模型制备各组脑组织石蜡切片；采用分别抗各位点磷酸化修饰Ｔａｕ蛋白的抗体做一抗；检测各组大鼠脑组织神经细胞中磷酸化Ｔａｕ蛋白，结果检测到各个位点磷酸化Ｔａｕ蛋白。这六种抗体可开发为试剂盒，用于人类和相关动物模型阿尔茨海默氏疾病诊断和评估。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫生物学和医学诊断范畴，具体涉及一种分别抗Thrl81， Thr205， Thr231， Ser262， Ser396， Ser404位点氨基酸磷酸化Tau蛋白的抗体及 其在AD症(阿尔茨海默氏疾病)异常磷酸化Tau蛋白水平测定上的用途。
技术介绍
Tau蛋白是一种广泛存在于神经元内的含磷糖蛋白，在脑内主要集中在神 经细胞轴突之中(与轴突的结合力比与胞体或树突的结合力强)。通过与神 经轴突内的微管结合，起到促进微管聚合、防止解聚和维持微管功能等效应。 健康成年人脑中分离的tau蛋白质至少有5 6种异构体，均是由位于人类第17 号染色体长臂上的同一单基因编码而成。该基因全长约100kb,包含16个外显 子，由于其转录mRNA产物在转录后拼接上的差异(对tau外显子2、 3、 10 选择性拼接)而产生了不同的蛋白异构体。最小的tau蛋白异构体352个氨基 酸，最大的441个氨基酸，其余四种为381、 383、 410、 412个氨基酸残基组成， 它们之间的区别在于C末端有3或4个由31 32个氨基酸残基组成的微管结合 区以及N末端有0、 l或2个由29个氨基酸残基构成的插入序列。胎儿期脑组织 中仅有一种最短的tau蛋白异构体(352个氨基酸)，其C末端含3个串联重复 顺序，N端无插入序列，且此时tau蛋白是处于高度磷酸化状态的(7moles pi/ 分子)。随着发育过程的进展磷酸化程度逐渐降低，正常成熟脑内tau蛋白磷 酸化位点很少，平均只有2 3个，此时tau蛋白与微管蛋白结合，结构稳定不易被磷酸化。老年性痴呆，又称为阿尔茨海默氏疾病(Alzheimer disease, AD)是一种老 年人神经系统进行性、退变性疾病，临床上主要有记忆、理解、判断及定向 等认知功能障碍，精神行为异常，智力降低及生活能力减退等表现。自从 1907年Alois Alzheimer本人发表第l例临床病理报告以来，已有一百年的研 究历史，但发病机制至今仍不完全清楚。 一般认为，该疾病是多因素共同作 用时所致，其发病与遗传、环境、代谢诸因素有关。来自流行病学调查的资 料显示，阿尔茨海默氏病的发病率与年龄老化程度有明显相关性65~74岁 发病率为3%~6% 、 75 85岁18.7% , >85岁47%。我国的发病情况与西方国 家大致相同，估计现有病人360万左右，而且随着人口预期寿命的增高，社会 老龄化的到来，其患病人数还会逐渐增多。从病理学上来看，AD症表现为两大特征①老年斑(Senile Plaques , SP): 又称轴索斑，由 一种4皮称为类淀粉样前体蛋白(Amyloid Precussor Protein ， APP)(分子量4KD，属(3片层状结构蛋白，故又称PA4蛋白)为核心，周围由 已变性的轴索、树突、类淀粉样纤维和胶质细胞及其突起等环绕而成。那些 周围环绕的神经突起常常是营养不良性的，含双股螺旋纤丝(PairedHelical Filaments ，PHFs),而PHFs又是由大量高度异常磷酸化的tau蛋白组成。②神 经元纤维缠结(Neurofibrillary Tangles ， NFTs):它是由异常细胞骨架组成的神 经元内含体，其形态随不同种类细胞而异。NFTs的结构也是由PHFs组成。通 过蛋白抗体标记物显示证明PHFs的主要成分是高度异常磷酸化的tau蛋白， 正是这些高度异常磷酸化的Tau蛋白形成丝状样沉积物沉积于神经元内最终 导致神经元的损害。迄今为止，人们发现涉及tau蛋白异常磷酸化修饰的位点大约有31个，其中至少有10个是脯氨酸指导的，即这些磷酸化位点与脯氨酸指导的蛋白激 酶(Proline Directed Protein Kinase, PDPK)有关。另有15个位点于46、 198、 199、 202、 208、 210、 235、 262、 396、 400、 404、 409、 412、 413及422位 丝氨酸残基上；其他6个位点在181、 205、 212、 217、 231及403位苏氨酸 残基上。用不同生化分离技术可将AD症脑中的tau蛋白分成3个组分①胞 浆非异常修饰的tau蛋白(c-tau);②异常修饰易溶型蛋白(AD P - tau)和③异 常修饰并聚集的tau蛋白(PHF - tau)。根据PHF - tau在2%的十二烷基硫酸 钠中的溶解性质差异，又可将其分为PHFI - tau和PHFII - tau蛋白两种。tau 蛋白结构中最显著的特征是主体结构呈Pro - Gly - Gly - Gly的"重复串联" 出现，tau蛋白借助"重复串联"区与双螺旋细丝(PHF)结合，促进了 PHF发生 不可逆的聚合，导致NFT的形成及神经元发生变性。Cambridge等在1988 年经免疫细胞化学及生化研究揭示高度磷酸化的tau蛋白是PHF的主要亚 单位。AD患者脑tau的异常磷酸化作用有如下特点①不仅是PHF中的所 有异形tau均以异常磷酸化形式存在，胞浆中游离的tau也被磷酸化；②不 仅在tau的氨基末端，而且在其分子内的多部位出现异常磷酸化；(D虽然每 克分子蛋白含的磷酸是正常tau分子的4倍，但AD患者脑匀浆中的磷酸蛋 白磷酸的总水平与正常者相比无显著改变。AD脑中的tau蛋白异常磷酸化 修饰可进一步促进其发生糖基化，糖化，消旋化，泛素化等翻译后错误纟务饰， 这些过程整合在一起大大加速了 PHF/NFTs的形成。目前临床上有采用酶联免疫吸附法测定AD症患者血浆、脑脊液(CSF) 中Tau蛋白水平，结果发现AD症患者CSF中Tau蛋白水平比同龄正常及非神 经疾病患者组均显著增高，以此用于AD诊断及疗效观察，其敏感性为82%, 特异性达为70%。若同时也检出(3-AP42水平降低，对老年性痴呆诊断的特异性可达70% 90 % 。故国际上许多公司和研究才几构，都在积极开展这方面 的研究，但目前基于磷酸化位点特异性Tau蛋白抗体的免疫组织化学检测和 相关诊断方法比较少，大部分是停留于研究范畴。所以本专利技术提供的这一 类六种分别抗Thr181， Thr205， Thr231, Ser262， Ser396， Ser404位点氨基酸磷 酸化Tau蛋白的抗体及其在AD症异常磷酸化Tau蛋白水平测定上的用途具 有重要的应用价值。 参考文献1. Binder L， Frankfurter A， Rebhun L (1985). The distribution of tau in the mammalian central nervous system. J. Cell. Biol. 101(4):1371-82. Andreadis A. (2005) Tau gene alternative splicing: expression patterns, regulation and modulation of function in normal brain and neurodegenerative diseases. Biochim Biophys Acta. 1739(2-3》91-103. Review.3. Andreadis A， B本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗磷酸化Ｔａｕ蛋白的抗体，其特征在于， 所述抗体是针对同一Ｔａｕ蛋白的磷酸化位点特异性抗体，包括六种分别抗Ｔｈｒ１８１，Ｔｈｒ２０５，Ｔｈｒ２３１，Ｓｅｒ２６２，Ｓｅｒ３９６，Ｓｅｒ４０４位点磷酸化修饰Ｔａｕ蛋白的兔多克隆抗体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：林世康，夏树开，孙钵清，胡云龙，黄文华，李保仝，
申请(专利权)人：南京川博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]
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