感染VSV的动物体内M蛋白抗体的ELISA检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术提供了一种感染VSV动物体内M蛋白抗体的ELISA检测试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括重组蛋白抗原、多孔酶联板、包被缓冲液、封闭缓冲液、洗涤缓冲液、样品稀释液、酶标二抗、终止液、TMB底物溶液、阴性对照血清和阳性对照血清；所述检测方法包括以下步骤：包被重组蛋白；将待测血清倍比稀释后孵育；加入酶标二抗；显色；加入终止液终止反应；检测OD值，以P/N值＞2.1作为阳性标准，以出现阳性反应的最高稀释度作为样品的抗体滴度。本发明专利技术可对大量样品同时进行检测，操作方便，能够快速稳定检测感染VSV的动物体内M蛋白抗体，适用于感染VSV动物的快速诊断，有利于及时监测入境动物的VSV感染情况。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ー种抗体检测试剂盒及其检测方法，具体地，涉及ー种感染VSV的动物体内M蛋白抗体的ELISA检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
水泡性ロ炎(Vesicular stomatitis, VS)是由水泡性口炎病毒(Vesicularstomatitis virus, VSV)引起的ー种急性高度接触性传染病，马、牛、猪等动物较易感。临床上以舌、唇、口腔黏膜、乳头和蹄冠等处上皮发生水泡病变为主要特征。VS在临床症状上很难与ロ蹄疫(FMD)、猪水疱病(SV)、猪水疱性疹(VES)区别开来。据国际兽医局(OIE)报道，南美、中美几乎所有的国家和地区以及北美的美国等国家在1996-2002年暴发了大面积的VS流行，造成严重的经济损失。VS常呈季节性暴发，多在夏秋季(7 8月)发生，秋末趋于平息。节肢动物可能在病毒的传播中起到一定的作用，许多病例还表现为地方流行性及易感动物间的直接传播，水泡性ロ炎被OIE列为A类疾病，在我国其为外来动物传染病，还未有大規模爆发的报道，国家进出境动物检疫对象中将VSV列为ニ类疫病。VSV分为两个血清型，一是印地安那型(VSVind)，另ー是新泽西型(VS本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种感染VSV的动物体内M蛋白抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括重组M蛋白抗原、多孔酶联板、包被缓冲液、封闭缓冲液、洗涤缓冲液、样品稀释液、HRP标记的羊抗鼠IgG、终止液、TMB底物溶液、阴性对照血清和阳性对照血清。

【技术特征摘要】
1.一种感染VSV的动物体内M蛋白抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括重组M蛋白抗原、多孔酶联板、包被缓冲液、封闭缓冲液、洗涤缓冲液、样品稀释液、HRP标记的羊抗鼠IgG、终止液、TMB底物溶液、阴性对照血清和阳性对照血清。2.按权利要求1所述的感染VSV的动物体内M蛋白抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述重组M蛋白抗原为TrxA-M重组蛋白抗原或含GST标签的重组M蛋白抗原。3.按权利要求2所述的感染VSV的动物体内M蛋白抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述TrxA-M重组蛋白抗原通过包括以下步骤的方法制备而得: 步骤一，根据VSV基因组序列设计引物对VSV M基因进行PCR扩增； 步骤ニ，将质粒pET32a(+)和PCR扩增得到的所述M基因分别用BamHI与HindIII双酶切并分别回收，用T4连接酶连接，连接产物转化DH5 a感受态大肠杆菌菌株，37°C培养过夜后，挑取菌落进行培养后抽提质粒DNA，进行BamHI与HindIII双酶切鉴定和DNA测序鉴定，获得pET32a-M质粒； 步骤三，将所述pET32a-M质粒转化大肠杆菌BL21表达宿主菌，以终浓度为ImM的IPTG诱导TrxA-M重组蛋白的表达； 步骤四，超声破碎所述宿主菌，12000rpm离心30min,对破碎菌体上清及沉淀分别采用12%的SDS-PAGE检测目的蛋白； 步骤五，采用N1-NTA Resin纯化所述重组蛋白，采用12%的SDS-PAGE胶鉴定纯化产物，并用VSV小鼠康复血清及His单克隆抗体进行Western-blotting鉴定M蛋白。4.按权利要求1所述的感染VSV的动物体内M蛋白抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述包被缓冲液为PH9.6的0.05M碳酸盐缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙涛，方心葵，张世宽，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：