抗神经毡蛋白抗体及使用方法技术

本发明专利技术提供了抗NRP1抗体及其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抗神经毡蛋白抗体及其使用方法。
技术介绍
神经毡蛋白I(NRPl)是一种有助于神经和血管系统发育的多功能受体。NRPl最初描述为结合脑信号蛋白3A配体的受体，与丛蛋白共同受体一起起作用来调节轴突导向(He and Tessier-Lavigne, Cell (1997) 90:739-51)。后来显示了 NRPl 还结合血管内皮生长因子(VEGF)配体家族的成员来介导血管发育(Soker et al., Cell (1998)92:735-45; Kawasaki et al.，Development (1999) 126:4895-902)。另外，数项研究提出 NRPl 通过调节血管和/或肿瘤细胞功能在肿瘤生物学中的作用(Bielenberg et al.，Exp CellRes (2006)312:584-93)。Pan et al., J Biol Chem(2007) 282:24049-56 显示了一种结合 NRPl 的单克隆抗体在体外降低VEGF介导的内皮细胞迁移(还可参见PCT公开文本N0.W02007/056470)。在体内阻断VEGF与NRPl的相互作用降低血管发生和血管重构。该抗NRPl抗体作为单一药剂减缓肿瘤生长；提出这是由于抗NRPl抗体介导的对经由一种VEGF依赖性过程的血管萌芽的降低。该抗NRPl抗体增强用抗VEGF抗体进行的VEGF阻断的抗血管发生和抗肿瘤效果。数据提示通过用抗NRPl降低血管重构， 脉管有可能保留更加未成熟的表型。因为认为未成熟脉管是更加VEGF依赖性的，所以抗NRPl处理的肿瘤中的血管可变得对抗VEGF疗法更加易感，如此在组合这两种疗法时在肿瘤模型中导致组合功效(Pan et al.，CancerCell (2007) 11:53-67)。鉴于NRPl在血管发生中的作用，需要其它的检测NRPl的存在的工具。专利技术概述本专利技术提供抗NRPl抗体及其使用方法。在一个实施方案中，本专利技术提供一种结合神经毡蛋白-1(NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含:(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQID N0:3 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4 ;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQID N0:5。在某些实施方案中，该抗体，进一步包含:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:8 ;(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:9 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:10。还提供一种分离的结合神经毡蛋白-1(NRPl)的抗体，其中该抗体包含:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9 -M(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10。在另一个实施方案中，本专利技术提供一种结合神经毡蛋白-1(NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含:(a) VH序列，其与氨基酸序列SEQ ID NO: 2具有至少95%序列同一性；(b)VL序列，其与氨基酸序列SEQ ID N0:7具有至少95%序列同一性；或(c) (a)中的VH序列和(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该抗体包含VH序列SEQ ID N0:2。在某些实施方案中，该抗体包含VL序列SEQ ID NO: 7。还提供一种结合神经毡蛋白-1 (NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含VH序列SEQ ID NO: 2和VL序列SEQ ID NO: 7。在某些实施方案中，本专利技术的抗体为IgGl抗体。在一些实施方案中，该抗体为结合神经毡蛋白的抗体片段，例如缺少Fe部分的抗体、F(ab’)2、Fab、或Fv结构。另一方面，本专利技术提供包含任何本专利技术抗体的免疫偶联物。本专利技术还提供编码任何本专利技术抗NRPl抗体的分离的核酸。在一个实施方案中，提供包含该核酸的载体。在一个实施方案中，提供包含该载体或包含该核酸的宿主细胞。在一个实施方案中，该宿主细胞为真核的。在一个实施方案中，该宿主细胞为CHO细胞。在一个实施方案中，提供一种生成抗NRPl抗体的方法,其中该方法包括在适合于表达编码该抗体的核酸的条件下培养该宿主细胞从而生成抗体。在一些实施方案中，该方法进一步包括分离通过该方法生成的抗体。一方面，提供一种检测生物学样品中NRPl的存在的方法，该方法包括在允许抗体结合NRPl的条件下使生物学样品与本专利技术抗体接触并检测结合的抗体的存在，例如通过检测抗体和NRPl之间是否形成复合物来进行。如此，本文中提供本专利技术的抗体，其用于检测生物学样品中NRPl的存在。在一些实施方案中，检测NRPl的存在通过免疫组织化学来进行。附图简述附图说明图1A-D显示使用单克隆抗NRPl抗体7130进行的免疫组织化学的结果。(1A:经全长人NRPl转染的HEK-293细胞(阳性对照)；1B:经空载体转染的HEK-293细胞(阴性对照)；1C:来自肾的组织切片；1 D:来自胎盘的组织切片)。图2A-C显示使用单克隆抗NRPl抗体7130进行的免疫组织化学的结果。(2A:来自结肠直肠癌(CRC)患者的组织切片；2B:来自乳腺癌(BC)患者的组织切片；2C:来自非小细胞肺癌(NSCLC)患者的组织切片)。专利技术详述1.定义出于本文中的目的，“受体人框架”指包含自人免疫球蛋白框架或如下文定义的人共有框架衍生的轻链可变域(VL)框架或重链可变域(VH)框架的氨基酸序列的框架。自人免疫球蛋白框架或人共有框架“衍生”的受体人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目是10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少、或2或更少。在一些实施方案中，VL受体人框架与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列在序列上相同。“亲和力”指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有指示，如本文中使用的，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)来表述。亲和力可以通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的方法。下文描述了用于测量结合亲和力的具体的说明性和例示性的实施方案。“亲和力成熟的”抗体指在一个或多个高变区(HVR)中具有一处或多处改变的抗体，与不拥有此类改变的亲本抗体相比，此类改变导致该抗体对抗原的亲和力改善。术语“抗神经毡蛋白抗体”、“抗NRPl抗体”和“结合NRPl的抗体”指能够以足够亲和力结合NRP1，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向NRPl的抗体。在一个实施方案中，根据例如通过放射免疫测定法(RIA)的测量，抗NRPl抗体结合无关的、非NRPl的蛋白质的程度小于该抗体对NRPl的结合的约10%。在某些实施方案中，结合NRPl的抗体具有彡 ΙμΜ、彡 ΙΟΟηΜ、彡 ΙΟηΜ、彡 InM、彡 0.1nM、彡 0.0lnM、或彡 0.0OlnM(例如 1(Γ8Μ 或更少，例如10_8M到10_13M，例如10_9M到I(T13M)的解离常数(Kd本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.07.09 US 61/363,1211.一种结合神经毡蛋白-1 (NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含:(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:3 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4 -M (c)HVR_H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5。2.权利要求1的抗体，进一步包含:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:8 ；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:9 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10。3.一种分离的结合神经毡蛋白-1 (NRPl)的抗体，其中该抗体包含:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 ;(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9 -M (c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10。4.一种结合神经毡蛋白-1 (NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含:(a)VH序列，其与氨基酸序列SEQ ID NO:2具有至少95%序列同一性；(b) VL序列，其与氨基酸序列S...

【专利技术属性】
技术研发人员：M施米特，C卡拉汉，JAS宏戈，H科彭，RJ沃茨，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：
国别省市：