一种冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法，采用切向流超滤的方法对获取的刺突蛋白进行浓缩，并采用层析纯化的方法对浓缩后的所述刺突蛋白进行纯化；利用纯化的所述刺突蛋白受体结合域对小鼠进行免疫，并对免疫完成后的小鼠脾细胞悬液与骨髓瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞；将所述刺突蛋白受体结合域包被至酶标板中，然后对所述杂交瘤细胞进行间接ELISA筛选，得到阳性克隆；对所述阳性克隆进行亚克隆，并采用无血清发酵培养筛选出的杂交瘤稳定细胞株，纯化后得到刺突蛋白单克隆抗体，能够提高对冠状病毒的治愈率。

【技术实现步骤摘要】
一种冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法
本专利技术涉及单克隆抗体制备
，尤其涉及一种冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法。
技术介绍
基于目前的流行病学调查，目前流形的病毒的潜伏期一般为3-7天，最长不超过14天。此次疫情临床表现以发热、乏力、干咳为主要表现。少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状。部分患者仅表现为低热、轻微乏力等，无肺炎表现，多在1周后恢复。世界卫生组织将本次引起病毒性肺炎病例的病原体命名为2019新型冠状病毒，即为SARS-CoV-2病毒，刺突蛋白是SARS-CoV-2的表面膜蛋白，包含两个亚基，S1和S2，S1主要包含一个受体结合域，负责识别细胞表面受体，S2包含膜融合所需的基本元素。现阶段出现的SARS-CoV-2病毒感染能力极强，且未出现有效的药物，能够将SARSCoV-2病毒进行消除，使得患者仅能凭借自身抵抗力治愈，大大降低了SARS-CoV-2病毒的治愈率。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法，提高对SARS-CoV-2病毒的治愈率。...

【技术保护点】
1.一种冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n采用切向流超滤的方法对获取的刺突蛋白进行浓缩，并采用层析纯化的方法对浓缩后的所述刺突蛋白进行纯化；/n利用纯化的所述刺突蛋白受体结合域对小鼠进行免疫，并对免疫完成后的小鼠脾细胞悬液与骨髓瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞；/n将所述刺突蛋白受体结合域包被至酶标板中，然后对所述杂交瘤细胞进行间接ELISA筛选，得到阳性克隆；/n对所述阳性克隆进行亚克隆，并采用无血清发酵培养筛选出的杂交瘤稳定细胞株，纯化后得到刺突蛋白单克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
采用切向流超滤的方法对获取的刺突蛋白进行浓缩，并采用层析纯化的方法对浓缩后的所述刺突蛋白进行纯化；
利用纯化的所述刺突蛋白受体结合域对小鼠进行免疫，并对免疫完成后的小鼠脾细胞悬液与骨髓瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞；
将所述刺突蛋白受体结合域包被至酶标板中，然后对所述杂交瘤细胞进行间接ELISA筛选，得到阳性克隆；
对所述阳性克隆进行亚克隆，并采用无血清发酵培养筛选出的杂交瘤稳定细胞株，纯化后得到刺突蛋白单克隆抗体。


2.如权利要求1所述的冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，采用切向流超滤的方法对获取的刺突蛋白进行浓缩，并采用层析纯化的方法对浓缩后的所述刺突蛋白进行纯化，包括：
获取制备所需的刺突蛋白，并将所述刺突蛋白在真空泵压力为0.1MPa，回流压力为0.05MPa的环境下，反复被50kDa超滤膜截留收集于收样杯中，直至浓缩体积至20mL；
采用琼脂糖凝胶过滤层析柱对浓缩后的所述刺突蛋白进行多次纯化，收集洗脱液。


3.如权利要求1所述的冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，利用纯化的所述刺突蛋白受体结合域对小鼠进行免疫，并对免疫完成后的小鼠脾细胞悬液与骨髓瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞，包括：
利用纯化后的所述刺突蛋白受体结合域对小鼠进行多次免疫，同时，每次免疫时间间隔两周；
将免疫完成设定时间长度后的小鼠脾细胞与获取的小鼠骨髓瘤细胞以体积比1:1的比例进行混合；...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡云龙，
申请(专利权)人：南京川博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32