调节剂制造技术

提供了调节胰岛素受体信号转导的抗体。

【技术实现步骤摘要】
分案说明本申请是最早优先权日为2009年9月25日，国际申请日为2010年9月25日，国际申请号为PCT/US2010/050313，进入中国国家阶段日期为2012年5月24日，国家申请号为201080053159.X，专利技术名称为“新型调节剂”的专利技术专利申请的分案申请。相关引用的交叉申请本申请要求2009年9月25日提交的美国临时专利申请No.61/246,067、2010年2月19日提交的美国临时申请61/306,321和2010年6月25日提交的美国临时申请No.61/358,749的优先权利益，每个临时申请以引用方式整体并入。
本专利技术涉及胰岛素-胰岛素受体信号转导复合体的新型调节剂和/或激动剂和筛选这种调节剂和/或激动剂的方法。这种调节剂和/或激动剂可(例如)用于治疗患有2型糖尿病、肥胖、高血糖症、高胰岛素血症、胰岛素过量、慢性肾病、1型糖尿病、胰岛素抵抗和特征在于胰岛素抵抗的疾病状态和病状的哺乳动物受试者或预防其在危险受试者中出现。
技术介绍
本专利技术涉及胰岛素-胰岛素受体信号转导复合体的新型调节剂和/或激动剂，筛选这种调节剂和/或激动剂的方法和这种调节剂和/或激动剂在治疗或预防特征在于胰岛素的异常生成和/或利用的疾病状态和病状中的用途。肽类激素胰岛素是葡萄糖稳态和细胞生长的主要调控剂。胰岛素作用中的第一步是激素与胰岛素受体(INSR)的结合，胰岛素受体是一种完整的膜糖蛋白，也称为CD220或HHF5。INSR属于酪氨酸激酶生长因子受体超家族并且由2个结合胰岛素的细胞外α亚基和2个具有内在酪氨酸激酶活性的跨膜β亚基。US 4,761,371中描述了INSR的氨基酸序列并且如NCBI参考序列NP_000199.2所述。INSR表达为2种同种型INSR-A和INSR-B。已使用X射线结晶学阐明了人INSR的完整同型二聚体胞外域片段的三维结构(WO07/147213)。INSR同种型还形成异型二聚体INSR-A/INSR-B和杂交INSR/IGF-1R受体，其在生理学上的作用和疾病仍未完全了解(Belfiore等，Endocrine Rev.,30(6):586-623,2009)。当胰岛素结合INSR时，通过酪氨酸自体磷酸化激活受体并且INSR酪氨酸激酶磷酸化包括胰岛素受体底物-1(IRS-1)在内的各种效应分子，从而导致激素作用(Ullrich等，Nature 313:756-761,1985；Goldfine等，Endocrine Reviews 8:235-255,1987；White和Kahn，Journal Biol.Chem.269:1-4,1994)。IRS-1结合和磷酸化最终导致胰岛素-反应组织(包括肌细胞)和脂肪组织外膜上的高亲和力葡萄糖转运子(Glut4)分子增多，并且因此导致葡萄糖从血液至这些组织中的摄取增多。Glut4从细胞囊泡转运至细胞表面，然后Glut4可在此介导葡萄糖向细胞内的转运。INSR信号转导减少导致细胞对葡萄糖的摄取减少、高血糖症(循环葡萄糖增多)和由此引起的所有后遗症。葡萄糖摄取减少可引起胰岛素抵抗，这描述了胰岛素的生理量不足以由细胞或组织产生正常胰岛素反应的病状。严重的胰岛素抵抗与糖尿病相关，而较低严重性的胰岛素抵抗也与约30-40％非糖尿病个体的许多疾病状态和病状相关(Woods等，End,Metab&Immune Disorders–Drug Targets 9:187-198,2009中有评论)。目前对糖尿病和胰岛素抵抗的治疗旨在增加胰岛素分泌，减少葡萄糖生成和增强胰岛素作用。当前，有治疗2型糖尿病的各种药理学方法(Scheen等，Diabetes Care,22(9):1568-1577,1999；Zangeneh等，Mayo Clin.Proc.78:471-479,2003；Mohler等，Med Res Rev 29(1):125-195,2009)。它们通过不同作用方式起作用：1)磺酰脲(例如，格列美脲、格列生脲、磺酰脲、AY31637)主要刺激胰岛素分泌；2)双胍(例如，二甲双胍)通过促进葡萄糖利用，减少肝葡萄糖生成并减少肠葡萄糖排出作用；3)α葡糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖、米格列醇)减缓碳水化合物消化并因此减缓从肠道的吸收和减轻餐后高血糖症；4)噻唑烷二酮(例如，曲格列酮、吡格列酮、罗格列酮、格列吡嗪、巴格列酮、利格列酮、萘格列酮、曲格列酮、恩格列酮、AD 5075、T 174、YM 268、R 102380、NC 2100、NIP 223、NIP 221、MK 0767、环格列酮、adaglitazone、CLX 0921、达格列酮、CP 92768、BM 152054)增强胰岛素作用，从而促进外周组织中葡萄糖利用；5)胰高糖素样肽和激动剂(例如毒蜥外泌肽)或其稳定剂(例如DPP4抑制剂(例如西他列汀))加强葡萄糖刺激的胰岛素分泌和6)胰岛素或其类似物(例如)刺激组织葡萄糖利用并抑制肝葡萄糖排出。以上提及的药理学方法可单独利用或在组合疗法中利用。然而，每种方法均有其局限性和不良作用。随时间推移，很大比例的2型糖尿病受试者失去他们对这些试剂的反应。63％的2型糖尿病患者不能达到如美国糖尿病协会建议的<7％的整体HbA1c水平，并因此处于发展并发症的高危险中。而且，患者几乎总是进展通过降低胰腺功能的阶段。通常将胰岛素治疗制定在饮食、运动之后，并且口服药物未能充分控制血糖。胰岛素治疗的缺点是需要药物注射、低血糖症的可能和增重。因此仍急切需要新型抗糖尿病试剂。Soos等，Biochem.J.235:199-208,1986；Taylor等，Biochem.J.242:123-129,1987；Prigent等，J.Biol.Chem.265(17):9970-9977,1990；Brindle等，Biochem.J.268:615-620,1990；Steele-Perkins和Roth,J.Biol.Chem.265(16):9458-9463,1990；McKern等，Nature 443(14):218-221；Boado等，Biotech and BioEng.96(2):381-391；WO04/050016；Roth等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 79:7312-7316,1982；Morgan等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83:328-332,1986；Lebrun等，J.Bl.Chem.268(15):11272-11277,1993；Forsayeth等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:3448-3451,1987；Forsayeth等，J.Biol.Chem.262(9):4134-4140,Goodman等，J.Receptor Res.14(6-8),381-398,1994；Ganderton等，Biochem J.288:195-205,1992；Spasov等，Bull.of Exp.Biol.and Med.144(1):46-48,2007；EP 2 036 574A1中已经报道了结合人I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种变构激动剂抗体，所述抗体以10‑5、10‑6、10‑7、10‑8、10‑9、10‑10、10‑11M或更低的亲和力结合胰岛素受体并且(a)当在pAKT检测中测量时表现出为胰岛素最高激动剂活性的20％‑80％的最高激动剂活性，(b)当存在时改变胰岛素对INSR的EC50不超过2倍，并且(c)当存在时改变胰岛素对INSR的KD不超过2倍。

【技术特征摘要】
2009.09.25 US 61/246,067;2010.02.19 US 61/306,321;1.一种变构激动剂抗体，所述抗体以10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10、10-11M或更低的亲和力结合胰岛素受体并且(a)当在pAKT检测中测量时表现出为胰岛素最高激动剂活性的20％-80％的最高激动剂活性，(b)当存在时改变胰岛素对INSR的EC50不超过2倍，并且(c)当存在时改变胰岛素对INSR的KD不超过2倍。2.根据权利要求1所述的抗体，任选地在磷酸化AKT检测中，所述抗体通过至少10％的胰岛素最大信号激活胰岛素受体。3.根据权利要求1所述的抗体，任选地在磷酸化AKT检测中，所述抗体通过低于10％的胰岛素最大信号激活胰岛素受体。4.根据权利要求2至3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含选自SEQ ID NO:281、278、277、209、275、223、284、276和236的重链可变区和选自SEQ ID NO:141、138、137、35、135、57、144、136和98的轻链可变区。5.根据权利要求2至4中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含(a)任何Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、Ab011、Ab001、Ab012、Ab010、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085的或SEQ ID NO:291、196、239、267和271中所列的所述重链可变区和任何Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、Ab011、Ab001、Ab012、Ab010、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085的或SEQ ID NO:76、80、101、128和132中所列的所述轻链可变区，或(b)任何Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、Ab011、Ab001、Ab012、Ab010、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085的或SEQ ID NO:291、196、239、267和271中所列的1、2或3个重链CDR和/或Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、Ab011、Ab001、Ab012、Ab010、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085的或SEQ ID NO:76、80、101、128和132中所列的1、2或3个轻链CDR，任选地在这种重链或轻链CDR的任何1、2或3个中包括1或2个突变，例如保守性或非保守性取代；或(c)任何Ab006、Ab030、Ab004、Ab013、Ab009、Ab007、Ab011、Ab001、Ab012、Ab010、Ab003、Ab008、Ab002、Ab005、Ab076、Ab077、Ab079、Ab080、Ab083、Ab059、Ab078、Ab085的或SEQ ID NO:76、80、101、128、132、291、196、239、267和271中所列的所有6个CDR。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，所述抗体与选自Ab079、Ab076、Ab083、Ab080、Ab062和Ab020、Ab019、Ab088和Ab089的任何1、2、3个或所有抗体表现出高于或等于70％的竞争，并且任选地与选自Ab086、Ab064、Ab001和Ab018的任何1、2、3个或所有抗体表现出高于或等于30％的竞争。7.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，所述抗体与选自Ab040、Ab062、Ab030、Ab001和Ab018的任何1、2、3个或所有抗体表现出高于或等于70％的竞争，并且任选地与选自Ab037、Ab078、Ab083、Ab080和Ab085的任何1、2、3个或所有抗体表现出高于或等于30％的竞争。8.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含选自SEQ ID NO:195、220、303、197、208、243、245和251的重链可变区和选自SEQ ID NO:77、50、90、84、34、104、106和112的轻链可变区。9.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含(a)任何Ab021、Ab029、Ab022、Ab017、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064、Ab066、Ab067、Ab068、Ab086、Ab069、Ab071、Ab073、Ab075、Ab082、Ab084的或SEQ ID NO:252、253、263、265和269中所列的所述重链可变区和任何Ab021、Ab029、Ab022、Ab017、Ab023、Ab024、Ab025、Ab026、Ab031、Ab035、Ab027、Ab036、Ab037、Ab028、Ab038、Ab039、Ab040、Ab041、Ab042、Ab032、Ab043、Ab044、Ab045、Ab046、Ab047、Ab018、Ab033、Ab048、Ab014、Ab015、Ab049、Ab034、Ab051、Ab053、Ab054、Ab056、Ab058、Ab062、Ab064...

【专利技术属性】
技术研发人员：约翰·科尔宾，马克·莱斯利·怀特，苏珊·R·沃森，维纳伊·巴斯卡尔，
申请(专利权)人：佐马美国有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US