本发明专利技术属药物制药领域，涉及肿瘤免疫调节制剂，具体涉及三氧化二砷(As2O3)在制备肿瘤免疫调节剂中的新用途。本发明专利技术从体内体外两方面进行了三氧化二砷针对实验小鼠脾脏内的MDSCs干预，结果显示。三氧化二砷在体外通过下调p-STAT3、p-AKT、p-MEK及p-ERK的水平抑制MDSCs的增殖、诱导凋亡和促进其向成熟表型分化；三氧化二砷在体内可降低MDSCs的比例，促进其向成熟型分化，并下调其免疫抑制的活性；结果有效的证实了三氧化二砷对肿瘤诱导的MDSCs具有杀伤作用，可用于制备肿瘤免疫调节剂，尤其是制备针对髓系来源的抑制性细胞MDSCs的免疫调节药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属药物制药领域，涉及肿瘤免疫调节制剂，具体涉及三氧化二砷（As203) 在制备肿瘤免疫调节剂中的新用途。
技术介绍
研究显示，髓系来源的抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)，是一群骨髓来源的具有强免疫抑制功能的细胞群，广泛存在与荷瘤小鼠的 脾脏、血液及肿瘤组织或肿瘤患者的外周血及肿瘤组织中。该群细胞来源于骨髓祖细胞和 未成熟髓细胞（immature myeloid cells, IMCs)，在正常情况下，可向成熟树突状细胞，巨 噬细胞和粒细胞分化，但在某些病理条件下，如肿瘤、感染、炎症和外伤等疾病，均可以检测 到MDSCs在体内的扩增，尤其在肿瘤生长的整个过程中，随着肿瘤的增大和恶性程度的提 高，MDSCs的数量和比例出现有大幅度的增加。 已知三氧化二砷是中药砒霜的重要有效成分，其化学结构式如下： 目前有关三氧化二砷的抗癌效应中免疫机制的研究报道较少，中国专利 201310154548公开了"三氧化二砷在制备治疗肾癌药物中的应用"和201310050897. 4公开 了 "三氧化二砷及其水溶物在制备治疗胰腺癌药物中的用途"。 然而迄今尚未见关于三氧化二砷用于制备肿瘤免疫调节剂，尤其是针对髓系来 源的抑制性细胞（MDSCs)的免疫调节药物用途的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供三氧化二砷的新的药物用途，具体涉及三氧化二砷（As203) 在制备肿瘤免疫调节剂中的新用途。尤其涉及三氧化二砷对免疫细胞尤其是针对髓系来源 的抑制性细胞（MDSCs)的药物用途。 本专利技术的三氧化二砷是中药砒霜的重要有效成分，其化学结构式如下： 本专利技术中进行了三氧化二砷对MDSCs作用的体外、体内实验，包括.三氧化二砷对 MDSCs增殖影响、对MDSCs凋亡的影响、对MDSCs分化的影响试验以及三氧化二砷对MDSCs 作用的体内实验，本专利技术的实施例中，采用三氧化二砷从体内体外两方面干预黑色素瘤B16 荷瘤小鼠脾脏内的MDSCs ; 实验结果显示，三氧化二砷在体外能抑制MDSCs的增殖、诱导凋亡和促进其向成 熟表型分化，并下调P-STAT3、p-AKT、p-MEK及p-ERK的水平；.三氧化二砷在体内能降低 MDSCs的比例，促进其向成熟型分化，并下调其免疫抑制活性，实验结果证实了三氧化二砷 具有对肿瘤诱导的MDSCs的杀伤作用。 本专利技术所述的三氧化二砷可用于制备肿瘤免疫调节剂。主要是制备对免疫细胞尤 其是针对髓系来源的抑制性细胞（MDSCs)的免疫调节药物。 本专利技术的的优点有： 本专利技术从体内体外两方面进行了三氧化二砷针对实验小鼠脾脏内的MDSCs干预 结果： 1、.三氧化二砷在体外通过下调p-STAT3、p-AKT、p-MEK及p-ERK的水平抑制 MDSCs的增殖、诱导凋亡和促进其向成熟表型分化； 2.三氧化二砷在体内可降低MDSCs的比例，促进其向成熟型分化，并下调其免疫 抑制的活性； 结果有效的证实了三氧化二砷对肿瘤诱导的MDSCs具有杀伤作用，可用于制备肿 瘤免疫调节剂。 为了便于理解，以下将通过具体的附图和实施例对本专利技术进行详细地描述。需要 特别指出的是，具体实例和附图仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文 说明，在本专利技术的范围内对本专利技术做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本 专利技术的范围内。另外，本专利技术引用了公开文献，这些文献是为了更清楚地描述本专利技术，它们 的全文内容均纳入本文进行参考，就好像它们的全文已经在本文中重复叙述过一样。【附图说明】 图1 :三氧化二砷对MDSCs增殖的影响， 其中：As203为三氧化二砷缩写，As203浓度剂量为2 μΜ，检测方法为CCK8 ;实验 重复3遍以上。 图2 :三氧化二砷对MDSCs凋亡的影响， 其中显示了三氧化二砷对MDSCs有较强的诱导细胞凋亡作用。 图3 :三氧化二砷对MDSCs分化的影响， 其中，显示了三氧化二砷有效下调MDSCs (⑶I Ib+Gr-I+)的比例，尤其是 M-MDSC(⑶llb+Ly6C+)亚群；促进MDSCs向成熟树突状细胞（⑶Ilc +⑶40+)和巨噬细胞 (F4/80+)分化。 图4 :三氧化二砷对MDSCs相关蛋白表达的影响， 其中显示了三氧化二砷下调MDSCs内p-STAT3, p-AKT，p-MEK和p-ERK的水平。 图5 :为三氧化二砷治疗后，B16荷瘤小鼠脾脏免疫细胞的改变 其中，As203为三氧化二砷缩写，图5A为三氧化二砷治疗B16荷瘤小鼠后， 小鼠脾脏体积的缩小和重量的下降；图5B为三氧化二砷治疗B16荷瘤小鼠后，脾脏内 MDSCs(CDllb+Gr-I+)比例下调；图5C左为三氧化二砷治疗B16荷瘤小鼠后，小鼠脾脏内 MDSCs亚群G-MDSCs(CDllb+Ly6CLy6Ghlgh)和M-MDSCs (CDllb+Lyec+LyeGlciw)比例下调；图 5C 右为三氧化二砷治疗B16荷瘤小鼠后，小鼠脾脏内成熟树突状细胞比例上升。 图6 :为三氧化二砷治疗后，H22荷瘤小鼠脾脏免疫细胞的改变， 其中：As203为三氧化二砷缩写，图6A为三氧化二砷治疗H22荷瘤小鼠后， 小鼠脾脏体积的缩小和重量的下降；图6B为三氧化二砷治疗H22荷瘤小鼠后，脾脏内 MDSCs(CDllb+Gr-I+)比例下调；图6C左为三氧化二砷治疗H22荷瘤小鼠后，小鼠脾脏内 MDSCs亚群G-MDSCs (CDllb+Ly6C Ly6Ghlgh)比例下调和M-MDSC ;图6C右为三氧化二砷治疗 H22荷瘤小鼠后，小鼠脾脏内成熟树突状细胞比例上升。【具体实施方式】 实施例1 :三氧化二砷对MDSCs作用的体外实验 建立细胞株和荷瘤小鼠模型： 小鼠黑色素瘤细胞株（B16)，购自中国科学院上海细胞库； 上述细胞株用含有10%胎牛血清的DMEM培养基在37°C、体积分数为5% C02、完 全饱和湿度条件下常规培养，48h更换培养基，细胞生长达饱合状态时，用0. 25%胰蛋白酶 +0. 02% EDTA消化传代，2~3d传代1次，实验选用对数生长期细胞；C57BL/6J小鼠，雌性， 8周龄，分笼饲养，每笼4只；B16荷瘤小鼠12只，雌性；饲养环境室温20°C~25°C，相对 湿度为50 %~70 %，光暗周期为12h，在无菌条件下收集B16肿瘤细胞，调整肿瘤细胞悬液 浓度为2*105/ml瘤细胞，对C57BL/6小鼠进行右侧腋下皮下注射细胞悬液0. 2ml，饲养于 SPF级环境，室温25°C左右，给予动物部提供的饲料和水，接种10天左右，可以触及皮下直 径约8-10mm肿块； 分选脾脏MDSCs的：常规处理小鼠后，无菌获取脾脏，5ml预冷PBS溶液冲洗，将脾 脏置于200目过滤网上，收集得到的细胞悬液；将悬液移入离心管，1500rpm离心10分钟后 去上清，加入5ml新鲜配制的红细胞裂解液，冰上裂解5分钟。20mlPBS终止裂解，1500rpm 离心10分钟，弃上清，加入分选专用PBS缓冲液3ml，细胞计数，每IO7细胞中加入IOul ⑶Ilb免疫磁珠，轻轻混匀后放入4°C冰箱孵育15-30分钟，结束后用10-20ml分选专用PBS 缓冲液洗涤一次，1本文档来自技高网...
【技术保护点】
三氧化二砷在制备肿瘤免疫调节剂中的用途。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：梁晓华，高清敏，蒋京伟，林浩，季笑宇，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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