本发明专利技术属于检测分析领域，涉及提取、检测烟草特有亚硝胺的方法、试剂盒及用途，具体涉及一种提取烟草特有亚硝胺的方法，包括如下步骤：向含烟草特有亚硝胺的样品中加入抗坏血酸和提取溶剂进行浸提，分离得到提取液；所述提取溶剂选自水、缓冲盐水溶液和甲醇中的一种或多种。本发明专利技术还涉及检测烟草特有亚硝胺的方法以及试剂盒。本发明专利技术提取方法能有效提取出烟草特有亚硝胺。本发明专利技术检测方法能提高检测的灵敏度、降低检出限。本发明专利技术试剂盒可用于提取和/或检测烟草特有亚硝胺。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于检测分析领域，具体涉及一种提取烟草特有亚硝胺的方法，还涉及检测烟草特有亚硝胺的方法、试剂盒及用途。
技术介绍
烟草特有亚硝胺(TSNAs)是烟草中N-亚硝胺含量最丰富的一类亚硝胺物质，存在于烟草、烟草制品和卷烟烟气中。检测卷烟烟气中TSNAs的释放量对正确评价吸烟对健康的危害具有重要意义。国际癌症研究署(IARC)对加拿大政府名单中有害成分的毒性评价结果表明，4-(N-甲基-N-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-丁酮和N-亚硝基去甲基烟碱纯化学成分为可疑的人体致癌成分。为了减少烟草特有亚硝胺对吸烟者和被动吸烟者健康可能造成的危害，控制TSNAs在烟草及烟草制品中的含量，已成为一项重要的课题。目前，研究较为深入的烟草特有亚硝胺包括N-亚硝基去甲基烟碱(NNN)、N-亚硝基假木贼碱(NAB)、N-亚硝基新烟草碱(NAT)和4-(N-甲基-N-亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-丁酮(NNK)，它们的化学结构式如下：现有主流烟气中烟草特有亚硝胺的检测方法主要包括国家标准GB/T 23228-2008规定的气相色谱-热能检测器法(GC-TEA)和液相色谱串联三重四级杆质谱法(HPLC-MS/MS)。其中，气相色谱-热能检测器法(GC-TEA)的检测步骤主要包括：捕集二十支卷烟的主流烟气总粒相物，由二氯甲烷萃取三次，过活化的碱性氧化铝柱、浓缩，进行GC-TEA检测。该方法较成熟，但存在前处理纯化步骤多、分析时间长、溶剂耗费大、环境受污染、检测器专属性强及样品通量低的缺点。液相色谱串联三重四级杆质谱法(HPLC-MS/MS)，通常以乙酸铵溶液为萃取剂，振荡30min后，由HPLC-MS/MS联用仪分析检测样品中的TSNAs。虽然该方法缩短了分析时间，提高了效率，但实际上样品中的TSNAs含量较低，杂质干扰严重，特别是目前国内大力发展的低焦油烤烟型卷烟的主流烟气中TSNAs含量更低，使得HPLC-MS/MS方法的定量限往往不能满足检测要求。抗坏血酸又名维生素C，是含有6个碳原子的酸性多羟基化合物，化学结构式为：目前，尚需一种能提高灵敏度和降低检出限的提取或检测烟草特有亚硝胺的方法。
技术实现思路
本专利技术人获得了一种有效提取样品中烟草特有亚硝胺的方法。在此基础上，本专利技术人还获得了一种能提高灵敏度、降低检出限的检测烟草特有亚硝胺的方法；同时，还得到一种试剂盒，该试剂盒能用于提取和/或检测烟草特有亚硝胺。本专利技术第一方面涉及一种提取烟草特有亚硝胺的方法，包括如下步骤：向含烟草特有亚硝胺的样品中加入抗坏血酸和提取溶剂进行浸提，分离得到提取液；所述提取溶剂选自水、缓冲盐水溶液和甲醇中的一种或多种；优选地，提取溶剂为缓冲盐水溶液。本专利技术第一方面的任一实施方式中，向样品中同时加入提取溶剂和抗坏血酸。本专利技术第一方面的任一实施方式中，所述抗坏血酸和样品的重量比为(0.4-10)：1；优选为(0.4-3)：1、(0.5-4)：1、(1-8)：1、(2-9)：1、(2-7)：1、(2-5)：1或者(2-4)：1；更优选为0.4:1、0.5:1、3:1、2:1、4:1或者5:1。本专利技术第一方面的任一实施方式中，所述提取方法包括如下A至H中的任意一项或者多项：A.所述样品选自烟草、烟草制品和卷烟烟气粒相物中的一种或多种；优选地，所述样品为卷烟烟气粒相物，更优选为卷烟主流烟气粒相物；B.所述烟草特有亚硝胺选自NNN、NAB、NAT和NNK中的一种或多种；C.所述缓冲盐水溶液的pH值为6.5-7.5，优选为7；D.所述缓冲盐水溶液为乙酸铵水溶液；优选地，乙酸铵水溶液的浓度为0.05-1mol/L，更优选为0.08-0.5mol/L，进一步优选为0.1mol/L；E.所述提取溶剂的添加量为0.04-3mL/(mg样品)，优选为0.1-2mL/(mg样品)，更优选为0.3mL/(mg样品)；F.所述浸提在超声条件下进行；优选地，超声时间为20-60分钟，更优选为30分钟；G.所述分离的方式为过滤处理，优选采用0.22μm的滤膜过滤；H.还包括，在分离前进行静置的步骤；优选地，静置3-10分钟，更优选静置5分钟。本专利技术第二方面涉及一种检测烟草特有亚硝胺的方法，包括按照本专利技术第一方面任一所述方法提取得到提取液的步骤；优选地，还包括用液相色谱串联质谱检测提取液的步骤。不拘于理论的限制，抗坏血酸能提高烟草特有亚硝胺的离子化效率，抑制烟草特有亚硝胺的氧化分解，从而提高了烟草特有亚硝胺的灵敏度，降低了检出限。并且，抗坏血酸有助于从样品中更加有效地提取出烟草特有亚硝胺。本专利技术第二方面的任一实施方式中，所述检测为定量检测，优选以内标法定量检测；更优选地，内标物为烟草特有亚硝胺的氘代物；进一步优选地，所述烟草特有亚硝胺的氘代物含4个氘原子。本专利技术第二方面的任一实施方式中，液相色谱操作条件选自如下a至e中的任意一项或者多项：a.液相色谱柱为C18液相色谱柱；优选为菲罗门C18液相色谱柱；b.液相色谱柱的规格为100mm×2.1mm i.d.，1.7μm粒径；c.色谱柱温度为20-70℃，优选为30-60℃，更优选为40℃；d.进样量3-10μL，优选为4-8μL，更优选为5μL；e.流动相包括流动相A和流动相B；优选地，流动相A为甲醇，流动相B为0.2％(V/V)乙酸水溶液；更优选地，流动相的洗脱程序如下表：本专利技术第二方面的任一实施方式中，质谱操作条件或检测参数选自如下(1)至(13)中的任意一项或者多项：(1)离子源为电喷雾电离源；(2)扫描方式为正离子扫描；(3)电喷雾电压为4500-6000V，优选为5500V；(4)离子源温度为550-700℃，优选为650℃；(5)辅助气压力为50psi-60psi，优选为50psi或60psi；(6)NAB的定性离子对为192.1/133.1；(7)NAB的定量离子对为192.1/162.2；(8)NAT的定性离子对为190.2/106.1；(9)NAT的定量离子对为190.2/160.2；(10)NNK的定性离子对为208.2/148.1；(11)NNK的定量离子对为208.2/122.2；(12)NNN的定性离子对为178.2/120.1；(13)NNN的定量离子对为178.2/148.2。本专利技术的一个实施方案中，质谱检测参数还包括如下任意一项或者多项：(1)NAB-d4的定性离子对为196.2/137.2；(2)NAB-d4的定量离子对为196.2/166.2；(3)NAT-d4的定性离子对为194.1/110.1；(4)NAT-d4的定量离子对为194.1/164.2；(5)NNK-d4的定性离子对为212.2/110.1；(6)NNK-d4的定量离子对为212.2/126.1；(7)NNN-d4的定性离子对为182.1/124.1；(8)NNN-d4的定量离子对为182.1/152.2。本专利技术第三方面涉及一种试剂盒，包含乙酸铵水溶液和抗坏血酸；优选地，乙酸铵水溶液的浓度为0.05-1mol/L，更优选为0.05-0.6mol/L、0.08-0.5mol/L、0.07-0.7mol/L、0.08-0.8mol/L、0.09-0.9mol\本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种提取烟草特有亚硝胺的方法，包括如下步骤：向含烟草特有亚硝胺的样品中加入抗坏血酸和提取溶剂进行浸提，分离得到提取液；所述提取溶剂选自水、缓冲盐水溶液和甲醇中的一种或多种；优选地，抗坏血酸和提取溶剂同时加入；优选地，提取溶剂为缓冲盐水溶液。
【技术特征摘要】
1.一种提取烟草特有亚硝胺的方法，包括如下步骤：向含烟草特有亚硝胺的样品中加入抗坏血酸和提取溶剂进行浸提，分离得到提取液；所述提取溶剂选自水、缓冲盐水溶液和甲醇中的一种或多种；优选地，抗坏血酸和提取溶剂同时加入；优选地，提取溶剂为缓冲盐水溶液。2.根据权利要求1所述的提取方法，其中，所述抗坏血酸和样品的重量比为(0.4-10):1；优选为(1-8):1；更优选为3:1。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于如下A至H中的任意一项或者多项：A.所述样品选自烟草、烟草制品和卷烟烟气粒相物中的一种或多种；优选地，所述样品为卷烟烟气粒相物，更优选为卷烟主流烟气粒相物；B.所述烟草特有亚硝胺选自NNN、NAB、NAT和NNK中的一种或多种；C.所述缓冲盐水溶液的pH值为6.5-7.5，优选为7；D.所述缓冲盐水溶液为乙酸铵水溶液；优选地，乙酸铵水溶液的浓度为0.05-1mol/L，更优选为0.08-0.5mol/L，进一步优选为0.1mol/L；E.所述提取溶剂的添加量为0.04-3mL/(mg样品)，优选为0.1-2mL/(mg样品)，更优选为0.3mL/(mg样品)；F.所述浸提在超声条件下进行；优选地，超声时间为20-60分钟，更优选为30分钟；G.所述分离的方式为过滤处理，优选采用0.22μm的滤膜过滤；H.还包括，在分离前进行静置的步骤；优选地，静置3-10分钟，更优选静置5分钟。4.一种检测烟草特有亚硝胺的方法，包括按照权利要求1至3中任一项所述方法提取得到提取液的步骤；优选地，还包括用液相色谱串联质谱检测提取液的步骤。5.根据权利要求4所述的检测方法，其中，所述检测为定量检测，优选以内标法定量检测；更优选地，内标物为烟草特有亚硝胺的氘代物；进一步优选地，所述烟草特有亚硝胺的氘代物含4个氘原子。6.根据权利要求4或5所述的检测方法，其中，液相色谱操作条件选自如下a至e中的任意一项或者多项：a.液相色谱柱为C18液相色谱柱；优选为菲罗门C18液相色谱柱；b.液相色谱柱的规格为100mm×2.1mm i.d...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓其馨，黄延俊，黄朝章，张建平，黄华发，叶仲力，刘泽春，许寒春，谢卫，
申请(专利权)人：福建中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：福建;35
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