一种豆芽中非法添加药物的高效检测方法技术

本发明专利技术公开一种豆芽中非法添加药物的高效检测方法，包括如下步骤：（1）标准溶液配制；（2）待测样处理；（3）在线固相萃取；（4）高效液相色谱‑静电场轨道阱高分辨质谱测定。本发明专利技术采用高效、重复性好的在线固相萃取方法结合高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱测定豆芽中的非法添加药物，可实现对样品中非法添加药物的定性和定量测定，检测结果灵敏可靠；且采用本方法，对样品的前处理过程快速简便，提高工作效率；本方法中，根据豆芽中非法添加药物的特性，选择适当的萃取溶剂、清洗剂和洗脱剂以及适当的质谱检测参数，提高检测精度和可靠度；本方法的自动化程度高，有效避免人为操作带来的误差。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于检测
，涉及豆芽中非法添加药物的检测方法，具体涉及一种豆芽中非法添加药物的在线固相萃取-高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱测定方法。
技术介绍
豆芽中的非法添加药物包括：4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、赤霉素、萘乙酸、吲哚丁酸、6-苄基腺嘌呤、多菌灵和吲哚乙酸等。以上这些药物中，除了多菌灵属于农药外，其他药物均属于植物生长调节剂。这是一类用于调节植物生长发育的药物，可促进植物生长、提高农作物的质量和产量。4-氯苯氧乙酸是一种有机酸，又名防落素，防止落花、落果；其以4-氯苯氧乙酸钠的形式用于豆芽生产中，主要是抑制豆芽生根和催熟生长。2,4-二氯苯氧乙酸主要用于诱导细胞增殖，引起脱分化和未组织化的细胞生长，对豆芽生长具有很好的促进和调节作用。赤霉素是广泛存在的一类植物激素，可刺激叶和芽的生长，在植物幼苗生长过程中提高发芽率，用于豆芽生产可提高产量。吲哚乙酸和吲哚丁酸可促进插条生根，诱导细胞分裂和分化，促进插条不定根的形成。萘乙酸是一种植物激素生长素，可促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。多菌灵为一种广谱性杀菌剂，能够杀死豆芽中的霉菌、细菌。6-苄基腺嘌呤是细胞分裂素的一种，促进细胞分裂，诱导组织分化，用于豆芽生产中可促进芽的生长，抑制根的生长，缩短生长周期。近年来研究发现，植物生长调节剂虽然低毒，但会在农作物中残留，通过食物链进入人体。人体长时间吸收后会对其造成一定程度的伤害：轻则造成腹泻等疾病；重则造成人体免疫力下降，骨骼疏松，甚至致畸、致癌、致突变等后果。目前测定豆芽中的非法添加药物的前处理多是有机溶剂提取，使用大量的有机溶剂，操作繁琐同时对操作人员造成伤害；或是采用固相萃取，手动操作，耗费大量人力。仪器方法多采用液相色谱法或高效液相色谱串联三重四级杆质谱法，考虑到非法添加的药物品种较多，并且有可能是未知药物，因此采用高分辨质谱进行精确质量数筛查，不仅能检测已知可能添加的药物，也可以筛查出未知的添加物，对于豆芽品质监控有一定的现实意义。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简便、精准度高的豆芽中非法添加药物的在线固相萃取-高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱测定方法，该方法可同时实现样品的定性和定量检测且灵敏高、结果可靠。技术方案：本专利技术所述的豆芽中非法添加药物的高效检测方法，包括如下步骤：(1)标准溶液配制：将非法添加药物标准品用甲醇配制成浓度为150～300mg/L的标准溶液，2～6℃保存；再用甲醇逐级稀释成浓度为0.8～1.2mg/L的标准溶液；(2)待测样处理：豆芽样品预先切碎，搅匀，称取0.5～2g于50mL离心管，加入冰醋酸-乙腈溶液，涡旋，置于超声仪中超声15～30min；5000～10000rpm离心2～5min，取上清液，氮气吹干，然后用甲醇与水的混合溶液溶解并定容至1.0mL，过滤于进样小瓶；(3)在线固相萃取：采用HLB萃取柱，用甲醇和水分别活化，流速为4～6mL/min；然后上样，上样量为0.3～0.8ml，上样溶剂为水，体积0.3～1.0mL；清洗溶剂为水；洗脱溶剂为甲醇；(4)高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱测定：采用加热的电喷雾离子源(HESI-Ⅱ)；毛细管温度为300～400℃，鞘气流速40～60L/min，辅助气流速4～8L/min，吹扫气流速2～6L/min；喷雾电压为3KV，透镜电压为50V；采用正负离子切换模式同时采集数据；进样前将色谱柱平衡15～30min，在柱温为25～35℃下重复进同一浓度的标准溶液，当峰面积变化在±10％以内，保留时间在±5％以内，开始正式进样；进样系列标准溶液浓度为5～150ng/mL，以标准溶液峰面积为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中药物的响应值在仪器测定的线性范围内。本专利技术中，所述的非法添加药物包括4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、赤霉素、萘乙酸、吲哚丁酸、6-苄基腺嘌呤、多菌灵和吲哚乙酸。优选地，步骤(3)中活化剂为1mL甲醇和1mL水。优选地，步骤(3)中清洗溶剂为1mL的水，流速为5mL/min；洗脱溶剂为0.5mL的甲醇，流速为0.15mL/min。优选地，步骤(4)中采用的色谱柱为Agilent Polaris C-18，长度为100mm，内径
为2.1mm，填料粒径为5μm。优选地，步骤(4)中采用梯度洗脱程序，流动相为醋酸铵与甲醇的混合液。优选地，所述的梯度洗脱程序具体如下：时刻0min：采用95wt％的醋酸铵和5wt％的甲醇混合液做流动相，流速为0.3mL/min；时刻2min：采用95wt％的醋酸铵和5wt％的甲醇混合液做流动相，流速为0.3mL/min；时刻4min：采用5wt％的醋酸铵和95wt％的甲醇混合液做流动相，流速为0.3mL/min；时刻9min：采用5wt％的醋酸铵和95wt％的甲醇混合液做流动相，流速为0.3mL/min；时刻10min：采用95wt％的醋酸铵和5wt％的甲醇混合液做流动相，流速为0.3mL/min；时刻12min：采用95wt％的醋酸铵和5wt％的甲醇混合液做流动相，流速为0.3mL/min。优选地，步骤(4)中所述的鞘气、辅助气和吹扫气均为N2。优选地，步骤(4)中采集数据的扫描范围为100-600m/z，一级全扫描的分辨率R＝70000。有益效果：(1)本专利技术采用高效、重复性好的在线固相萃取方法结合高效液相色谱串联静电场轨道阱高分辨质谱测定豆芽中的非法添加药物，可实现对样品中非法添加药物的定性和定量测定，检测结果灵敏可靠；且采用本方法，对样品的前处理过程快速简便，提高工作效率；(2)本方法中，根据豆芽中非法添加药物的特性，选择适当的萃取溶剂、清洗剂和洗脱剂以及适当的质谱检测参数，提高检测精度和可靠度；(3)本方法的自动化程度高，有效避免人为操作带来的误差。附图说明图1为豆芽中各类非法添加物标准溶液色谱图；(其中：1.4-氯苯氧乙酸、2.2,4-二氯苯氧乙酸、3.赤霉素、4.萘乙酸、5.吲哚丁酸、6.6-苄基腺嘌呤、7.多菌灵、8.吲哚乙酸)。图2为采用本方法检测含有非法添加药物的阴性豆芽样品得到的色谱图，(其中：1.4-氯苯氧乙酸、2.2,4-二氯苯氧乙酸、3.赤霉素、4.萘乙酸、5.吲哚丁酸、6.6-苄基腺嘌呤、7.多菌灵、8.吲哚乙酸)。具体实施方式下面通过附图对本专利技术技术方案进行详细说明，但是本专利技术的保护范围不局限于所述实施例。本专利技术所述的实例使用的质谱仪为Thermo Fisher公司的Q-Exactive型高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱仪，数据处理系统为美国Thermo Fisher公司的Xcalibur数据处理系统；试剂均为常规市售。实施例：一种豆芽中非法添加药物的检测方法，包括如下步骤：(1)标准溶液配制：将非法添加药物标准品用甲醇配制成浓度为200mg/L的标准溶液，4℃保存；再用甲醇逐级稀释成浓度为1mg/L的标准溶液；(2)待测样处理：豆芽样品预先切碎，搅匀，称取1g于50mL离心管，加入0.1％冰醋酸-乙腈溶液，涡旋，置于超声仪中超声20min；8000rpm离心3min本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种豆芽中非法添加药物的高效检测方法，其特征在于包括如下步骤：(1)标准溶液配制：将非法添加药物标准品用甲醇配制成浓度为150～300mg/L的标准溶液，2～6℃保存；再用甲醇逐级稀释成浓度为0.8～1.2mg/L的标准溶液；(2)待测样处理：豆芽样品预先切碎，搅匀，称取0.5～2g于50mL离心管，加入冰醋酸‑乙腈溶液，涡旋，置于超声仪中超声15～30min；5000～10000rpm离心2～5min，取上清液，氮气吹干，然后用甲醇与水的混合溶液溶解并定容至1.0mL，过滤于进样小瓶；(3)在线固相萃取：采用HLB萃取柱，用甲醇和水分别活化，流速为4～6mL/min；然后进样，上样量为0.3～0.8ml，上样溶剂为水，体积0.3～1.0mL，流速为0.4～0.6mL/min；清洗溶剂为水；洗脱溶剂为甲醇；(4)高效液相色谱‑静电场轨道阱高分辨质谱测定：采用加热的电喷雾离子源(HESI‑Ⅱ)；毛细管温度为300～400℃，鞘气流速40～60L/min，辅助气流速4～8L/min，吹扫气流速2～6L/min；喷雾电压为3KV，透镜电压为50V；采用正负离子切换模式同时采集数据；进样前将色谱柱平衡15～30min，在柱温为25～35℃下重复进同一浓度的标准溶液，当峰面积变化在±10％以内，保留时间在±5％以内，开始正式进样；进样系列标准溶液浓度为5～150ng/mL，以标准溶液峰面积为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中药物的响应值在仪器测定的线性范围内。...

【技术特征摘要】
1.一种豆芽中非法添加药物的高效检测方法，其特征在于包括如下步骤：(1)标准溶液配制：将非法添加药物标准品用甲醇配制成浓度为150～300mg/L的标准溶液，2～6℃保存；再用甲醇逐级稀释成浓度为0.8～1.2mg/L的标准溶液；(2)待测样处理：豆芽样品预先切碎，搅匀，称取0.5～2g于50mL离心管，加入冰醋酸-乙腈溶液，涡旋，置于超声仪中超声15～30min；5000～10000rpm离心2～5min，取上清液，氮气吹干，然后用甲醇与水的混合溶液溶解并定容至1.0mL，过滤于进样小瓶；(3)在线固相萃取：采用HLB萃取柱，用甲醇和水分别活化，流速为4～6mL/min；然后进样，上样量为0.3～0.8ml，上样溶剂为水，体积0.3～1.0mL，流速为0.4～0.6mL/min；清洗溶剂为水；洗脱溶剂为甲醇；(4)高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱测定：采用加热的电喷雾离子源(HESI-Ⅱ)；毛细管温度为300～400℃，鞘气流速40～60L/min，辅助气流速4～8L/min，吹扫气流速2～6L/min；喷雾电压为3KV，透镜电压为50V；采用正负离子切换模式同时采集数据；进样前将色谱柱平衡15～30min，在柱温为25～35℃下重复进同一浓度的标准溶液，当峰面积变化在±10％以内，保留时间在±5％以内，开始正式进样；进样系列标准溶液浓度为5～150ng/mL，以标准溶液峰面积为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中药物的响应值在仪器测定的线性范围内。2.根据权利要求1所述的豆芽中非法添加药物的高效检测方法，其特征在于：所述的非法添加药物包括4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、赤霉素、萘乙酸、吲哚丁酸、6-苄基腺嘌呤、多菌灵和吲哚乙酸。3.根据权利要求1所述的豆芽中非法添加药物的高效检测方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳菡，张睿，赵增运，沈伟健，丁涛，吴斌，沈崇钰，
申请(专利权)人：江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32