本发明专利技术涉及生物医药领域，具体是一种抗融合蛋白CH的单克隆抗体3C1，产生该种抗体的杂交瘤细胞株，以及这种抗体的免疫检测用途。本发明专利技术还涉及单克隆抗体4E8和3C1在制备用于检测融合蛋白CH的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体4E8和3C1的试剂盒，以及应用此试剂盒在用于判断融合蛋白CH治疗CEA阳性肿瘤时的血清或体液浓度，应用单克隆抗体3C1检测CH融合基因修饰的免疫细胞、肿瘤细胞等哺乳动物细胞中的表达以及CEA阳性肿瘤的临床诊断。本发明专利技术所述单克隆抗体可与CH蛋白特异性结合，而与细胞内其他蛋白无交叉反应，具有CH蛋白免疫检测的特异性和可靠性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体地说，是一种抗融合蛋白CEA576-669HSP70L1(CH)的单克隆抗体3C1，产生该种抗体的杂交瘤细胞株，以及这种抗体的免疫检测用途。
技术介绍
热休克蛋白(Heatshockprotein,HSP)家族按照分子量可以分为四类：Hsp90家族、Hsp70家族、HSP60家族和小分子Hsp家族。HSP在细胞内发挥分子伴侣作用，在新生肽的正确折叠、转运以及对异常构象蛋白的降解中发挥重要作用(KültzD.2005.Molecularandevolutionarybasisofthecellularstressresponse.Annu.Rev.Physiol.67:225-257.)。此外，HSP蛋白及其相连的蛋白多肽在细胞处于应激的条件时，会以复合物的形式释放到细胞外。一些HSP，如GRP96,HSP70,HSP90，在细胞外具有免疫佐剂效应，能够刺激机体免疫细胞产生针对其结合的蛋白肽段的特异性免疫应答(Baker-LePainJ.C.,M.Sarzotti,andC.V.Nicchitta.2004.Glucose-regulatedprotein94/glycoprotein96elicitsbystanderactivationofCD4+TcellTh1cytokineproductioninvivo.J.Immunol.172:4195-4203.GongJ.,Y.Zhang,J.Durfee,D.Weng,C.Liu,S.Koido,B.Song,V.Apostolopoulos,andS.K.Calderwood.2010.Aheatshockprotein70-basedvaccinewithenhancedimmunogenicityforclinicaluse.J.Immunol.184:488-496.TanakaT.,K.Okuya,G.Kutomi,A.Takaya,T.Kajiwara,T.Kanaseki,T.Tsukahara,Y.Hirohashi,T.Torigoe,K.Hirata,Y.Okamoto,N.Sato,andY.Tamura.2015.Heatshockprotein90targetsachaperonedpeptidetothestaticearlyendosomeforefficientcross-presentationbyhumandendriticcells.CancerSci.106:18-24.)。HSP70L1是HSP70家族的一员，分子量约55kd。同HSP70类似，HSP70L1在细胞外也具有免疫佐剂效应，尤其是能够刺激一类抗原提呈细胞-树突状细胞(dendriticcell,DC)产生炎性反应以及获得抗原提呈功能的成熟(WanT.,X.Zhou,G.Chen,H.An,T.Chen,W.Zhang,S.Liu,Y.Jiang,F.Yang,Y.Wu,andX.Cao.2004.NovelheatshockproteinHsp70L1activatesdendriticcellsandactsasaTh1polarizingadjuvant.Blood.103:1747-1754.)。本室制备的融合蛋白，癌胚抗原(CEA)的576-669段(CEA576-669)融合至HSP70L1的N端的融合蛋白能够诱导机体产生针对CEA的特异性免疫应答反应。因此融合蛋白CH可用于针对CEA阳性的肿瘤治疗(WuY.,T.Wan,X.Zhou,B.Wang,F.Yang,N.Li,G.Chen,S.Dai,S.Liu,M.Zhang,andX.Cao.2005.Hsp70-likeprotein1fusionproteinenhancesinductionofcarcinoembryonicantigen-specificCD8+CTLresponsebydendriticcellvaccine.CancerRes.65:4947-4954.)。我们新发现，编码融合蛋白(CH)的融合基因修饰的DC细胞也具有成熟DC的特征，可以作为DC疫苗，诱导机体产生针对CEA的特异性免疫应答反应，因此也可以作为CEA阳性肿瘤的治疗性疫苗(中国专利申请201010108973.9携带融合蛋白基因的重组腺病毒及其制备方法和应用)。令人感兴趣的是，CH融合基因修饰的一些肿瘤细胞，能够上调表达MHC-I分子，这暗示利用携带融合基因的表达载体，如重组腺病毒载体，进行基因治疗，一方面通过转染CH基因进入体内的抗原提呈细胞，如DC，诱导机体产生针对CEA的特异性免疫应答；另一方面，通过转染CH基因进入肿瘤细胞，可以提升肿瘤细胞表达MHC-I分子的水平增加被CTL识别的可能性，也可以在不表达CEA的肿瘤细胞中引入CEA分子，从而使肿瘤细胞产生MHC-CEA来源表位肽，使其能够被CEA特异性的CTL识别，从而被杀伤清除，实现肿瘤免疫治疗的目的。因此，无论将来使用融合蛋白CH进行免疫治疗、还是融合基因修饰的免疫细胞进行细胞治疗、以及携带融合基因的重组载体的基因治疗、都需要对血清、体液或者细胞中的融合蛋白CH进行免疫检测，因此，研制出一种结合特异性高的抗CH的单克隆抗体具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种能够具有高亲和力、特异性结合融合蛋白CEA576-669HSP70L1(CH)的单克隆抗体，及其在制备用于检测融合蛋白CH的免疫检测工具中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术的第一方面，提供了一种特异性结合融合蛋白CH的单克隆抗体4E8，是由保藏编号为CCTCCNO:C201612的杂交瘤细胞株分泌产生。还提供了一种特异性结合融合蛋白CH的单克隆抗体3C1，是由保藏编号为CCTCCNO:C201626的杂交瘤细胞株分泌产生。本专利技术的第二方面，提供了2株杂交瘤细胞株CH-4E8和CH-3C1，保藏于中国典型培养物保藏中心(简称为CCTCC)，保藏日期为2016年1月28日，保藏编号分别为CCTCCNO:C201612和CCTCCNO:C201626。本专利技术所述单克隆抗体的制备方法如下：单抗的筛选与制备：采用融合蛋白CH(SEQIDNO:1)免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞进行融合，有限稀释法获得单克隆，ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，获得能分泌抗CH特异性抗体的杂交瘤细胞，30株。其中2株(其一为4E8克隆株)的上清灵敏度达到0.1ng/孔(1ng/m本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种特异性结合融合蛋白CH的单克隆抗体3C1，是由保藏编号为CCTCC NO:C201626的杂交瘤细胞株分泌产生。
【技术特征摘要】
1.一种特异性结合融合蛋白CH的单克隆抗体3C1，是由保藏编号为
CCTCCNO:C201626的杂交瘤细胞株分泌产生。
2.一种如权利要求1所述的单克隆抗体3C1在制备检测细胞内融合蛋白
CH表达的试剂或试剂盒中的应用。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体3C1在制备检测细胞内融合蛋白CH
表达的试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的单克隆抗体3C1与单克隆
抗体4E8合用，所述的单克隆抗体4E8，是由保藏编号为CCTCCNO:C201612
的杂交瘤细胞株分泌产生。
4.一种如权利要求1所述的单克隆抗体3C1在制备检测细胞内HSP70L1
表达的试剂或试剂盒中的应用。
5.一种杂交瘤细胞株，其保...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘书逊，曹雪涛，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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