本发明专利技术涉及由TGF-β1、TGF-β2或TGF-β3的核酸序列的选定区域的10-20核苷酸组成的寡核苷酸，其包含修饰的核苷酸，如LNA、ENA、聚环氧烷、2'-氟、2'-O-甲氧基和/或2'-O-甲基修饰的核苷酸。所述选定区域优选SEQ ID NO.1的TGF-β2核酸序列的第1380-1510位、第1660-1680位、第2390-2410位或第2740-2810位核酸区域，SEQ ID NO.149的TGF-β1核酸序列的特定区域，或SEQ ID NO.267的TGF-β3核酸序列的特定区域。本发明专利技术还涉及包含这类寡核苷酸的药物组合物，所述组合物或所述寡核苷酸用于预防和/或治疗恶性和/或良性肿瘤、免疫疾病、纤维化、青光眼等。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】修饰的TGF-β寡核苷酸 本专利技术涉及由TGF-β 2核酸序列的选定区域或TGF-β 1或TGF-β 3核酸序列的 选定区域的10-20个核苷酸组成的寡核苷酸，其包含修饰的核苷酸，如LNA、ENA、聚环氧烷、 2' -氟、2' -0-甲氧基和/或2' -0-甲基修饰的核苷酸。 技术背景 转化生长因子MTGF-β)是一种在大多数细胞中控制增殖、细胞分化和其他功 能的蛋白质。它是一种类型的细胞因子，其在免疫、癌症、心脏病、糖尿病、马凡综合征、洛伊 斯-迪茨综合征、帕金森病和AIDS等中起作用。 TGF-β是一种分泌的蛋白，其以至少三种同种型的形式存在（TGF-β 1、TGF-β 2 和TGF-β 3)，由不同基因编码，但共有强序列和结构同源性。TGF-β在正常上皮细胞和 癌发生的早期以抗增殖因子的形式起作用。然而，在肿瘤发展的晚期，TGF-β通过包括 诱导上皮至间质瘤转变（EMT)的机制促进肿瘤，该转变是一种被认为参与肿瘤进展、侵染 和转移的过程（参见"Glycoproteomic analysis of two mouse mammary cell lines during transforming growth factor (TGF)-beta induced epithelial to mesenchymal transiti〇n(转化生长因子（TGF)-P诱导的上皮至间质瘤转变期间两种小鼠乳腺细胞系 的糖蛋白质组学分析）" 7th space, com. 2009-01-08.恢复：2009-01-29)。 在正常（上皮）细胞中，TGF- β在GI期停止细胞周期（并停止细胞增殖）、诱导 分化或促进凋亡。当细胞转化为癌细胞时，TGF-β不再抑制细胞增殖，其通常是信号转导 途径中突变的结果，且癌细胞增殖。间质成纤维细胞的增殖也由TGF-β诱导。两种细胞都 提高其TGF-β生产。该TGF-β作用于周围间质细胞、免疫细胞、内皮、平滑肌细胞和肿瘤 微环境（参见 Pickupet 等，"The roles of TGF6 in the tumour microenvironment (肿 瘤微环境中 TGF6 的作用）"，Nature Reviews Cancer (2013)，13:788-799)。因而，其促进 血管生成，并通过抑制增殖和免疫细胞的激活导致免疫抑制。 TGF- β 1缺陷型小鼠死于心、肺和胃炎症，暗示TGF- β在抑制炎性细胞激活和增 殖方面至关重要。Smad3是TGF-β依赖性下游信号通路中的关键元件之一。Smad3缺陷 型小鼠由于T细胞激活和粘膜免疫受损而发生慢性粘膜感染，暗示TGF-β在这些过程中 的关键作用。对于癌症，某些癌细胞产生和分泌的TGF-β抑制浸润性免疫细胞的活性， 从而帮助肿瘤逃脱宿主免疫监控。该免疫抑制作用可以是另一种重要机制，TGF-β通过 该机制刺激晚期肿瘤的生长（参加 Blobe GC等，2000年5月，"Role of transforming growth factor beta in human disease(人疾病中转化生长因子 β 的作用）"，N.Engl. J. Med. 342 (18)，1350-1358)。TGF-β还将正常情况下使用炎性（免疫）反应攻击癌症的效 应T细胞转化为关闭炎性反应的调节性（抑制）T细胞。 此外，TGF-β是胞外基质产生和沉积的最有力调控因子之一。其通过两种主要 机制刺激胞外基质的产生并影响其粘附性质。首先，TGF-β刺激成纤维细胞和其他细胞 产生胞外基质蛋白和细胞粘附蛋白，包括胶原、纤连蛋白和整联蛋白。其次，TGF-β减少 降解胞外基质的酶（包括胶原酶、肝素酶和间质溶解素）的产生，并增加抑制降解胞外基 质的酶的蛋白质（1型纤溶酶原激活物抑制剂和金属蛋白酶的组织抑制剂）的产生。这些 变化的净作用是增加胞外基质蛋白的产生并以细胞特异性方式提高或降低细胞的粘附性 质。TGF-β产生在许多癌细胞中增加，其通过提高细胞的蛋白水解活性和促进其结合细胞 粘连分子来提高细胞的侵染性（参见Blobe GC等，2000年5月，〃Role of transforming growth factor beta in human disease(人疾病中转化生长因子 β 的作用）〃，N.Engl. J. Med. 342(18)，1350-1358)。 因此，能够分别影响TGF-β表达和活性的治疗剂至关重要，特别是用于预防和/ 或治疗TGF-β相关疾病时。例如，EP 1008649和EP 0695354公开了与TGF-βΙ和/或 TGF-β 2的mRNA杂交的寡核苷酸，且其适用于制造例如用于预防和/或治疗癌症的药物组 合物。这些寡核苷酸无一包含诸如LNA、ENA等的修饰。 例如，WO 2003/85110、WO 2005/061710 和 WO 2008/138904 涉及可用于治疗癌症 的包含核苷酸修饰的寡核苷酸，其分别涉及抑制HIF-1A、Bcl-2和HER3。 寡核苷酸选择的标准主要是寡核苷酸的长度、GC百分比、形成发夹结构的趋势、二 聚化和解链温度（Tm)。通常，优选高Tm(解链温度）。此外，这些寡核苷酸必须特异性针对 靶mRNA且不与非靶mRNA杂交以降低潜在的脱靶作用。 因此，科学和医疗上非常需要降低或抑制TGF-β表达和/或活性的治疗剂。具体 而言，持续需要诸如反义寡核苷酸的寡核苷酸，其与TGF- β UTGF- β 2和/或TGF- β 3特异 性相互作用并因此降低或抑制其表达，或者特异性抑制TGF-β 1和TGF-β 2、或TGF-β 1和 TGF- β 3、或TGF- β 2和TGF- β 3的表达，而不导致任何（严重的）副作用。
技术实现思路
本专利技术涉及的寡核苷酸由SEQ ID Ν0.1的TGF-02核酸序列（参见图2)或 SEQ ID NO. 335 的 TGF- β 1 核酸序列（参见图 12)或 SEQ ID NO. 336 的 TGF- β 3 核酸 序列（参见图25)的10-20个（优选12-18个）核苷酸组成，该寡核苷酸中的一个或 多个核苷酸是经修饰的。本专利技术的一些寡核苷酸对应于TGF-β 1、TGF-β 2和TGF-β 3， 或 TGF-β 1 和 TGF-β 2 或 TGF-β 1 和 TGF-β 3 或 TGF-β 2 和 TGF-β 3。优选的寡核苷 酸包含 SEQ ID NO. 2-149 (TGF-β 2)之一、SEQ ID No. 150-334 (TGF-β?)之一或 SEQ ID No. 337-402 (TGF- β 3)之一或由其组成，其示于表1。 具体而言，本专利技术的寡核苷酸包含SEQ ID NO. 1的第1380-1510位核酸区域的 10-20个（优选12-18个）核苷酸或由其组成，该寡核苷酸中的一个或多个核苷酸是经修 饰的。这些寡核苷酸分别在降低和抑制TGF-β 2表达和活性方面高度有效。优选的寡核 苷酸包含或由以下序列组成：SEQ ID NO. 2 (如 ASPH36: GACCAGATGCAGGA)、SEQ ID NO. 3 (如 ASPH80:GCG本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种由SEQ ID NO.1的TGF‑β2核酸序列的12‑18个核苷酸组成的寡核苷酸，所述寡核苷酸中一个或多个核苷酸是LNA修饰的，修饰的核苷酸是LNA和/或ENA，聚环氧烷、2'‑氟、2'‑O‑甲氧基和/或2'‑O‑甲基修饰的核苷酸。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：F·贾辛斯基，M·简尼考特，E·乌尔曼，
申请(专利权)人：伊萨纳治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE
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