The present invention provides for the detection of low abundance human ortho antibody and nucleic acid probe connection kit and a preparation method thereof, the kit mainly through modification of four kinds of single stranded oligonucleotide in the antigen molecules, half antigen molecules modified two different oligonucleotide, the other half of the antigen molecules modified another two different oligonucleotide; adding analyte fluids, a modified reagent and analyte antigen antibody binding were incubated in body fluids, after a period of time, then add a chain bridge oligonucleotide fluorescent labeling reagent box pre zone, and then add the DNA link enzyme real-time fluorescent PCR reaction; after the reaction. Through the hinge these synthetic nucleotide chain, the formation of DNA antigen antibody complex; quantitative detection of antibody concentration measured by detecting the fluorescence intensity. The invention has the advantages that the reagent box of the invention does not use the antibody, the specificity is high, and the trace antibody in the body fluid can be detected, and the detection precision is high.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及用于检测人体内低丰度抗体的邻位连接核酸探针试剂盒及其制备方法,属于生物检测
技术介绍
抗原抗体反应是指,抗体能特异性地识别相应的抗原并与之结合。这种特异性结合在体外也能发生,这特特异性结合就是许多免疫检测方法的基础。在抗体分子的N端,不同的抗体分子的氨基酸组成和顺序都是不同的,此区为“多变区”(variableregion,V区),它是抗体分子与抗原决定簇的结合部位。每个抗体分子有两个多变区,可以特异识别结合两个抗原分子。邻位连接技术采用了核酸适体(aptamer)或单/多克隆抗体-核酸复合物作为邻位连接探针(proximityprobes)。当一对邻位探针同时识别同一个目标蛋白分子时,它们将在空间位置上相互临近,通过连接反应形成一段可扩增的DNA标签序列,该标签序列能够反映待测蛋白的种类及浓度。该技术将对蛋白质的检测转变为对DNA核酸序列的检测,实现了特殊蛋白质的定量检测。邻位连接技术检测的灵敏度可以达到酶联免疫吸附法的1000倍。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决上述的技术问题,提供一种用于检测人体内低丰度抗体的邻位连接核酸探试剂盒及其制备方法。本专利技术的目的通过以下技术方案来实现:用于检测人体内低丰度抗体的邻位连接核酸探针,包括5′端标记为巯基的DNA探针A,所述DNA探针A序列为CAGGTAGTAGTACGTCTGTTTCACGATGAGACTGGATGAA;5′端标记为磷酸基、3′端标记为巯基的探针B,所述探针B序列为TCACGGTAGCATAAGGTGCAAGATAATACTCTCGTAGCAC;5′端标记为巯基的 ...
【技术保护点】
用于检测人体内低丰度抗体的邻位连接核酸探针,其特征在于:包括3′端标记为巯基的探针A,所述DNA探针A序列为CAGGTAGTAGTACGTCTGTTTCACGATGAGACTGGATGAA;5′端标记为磷酸基、3′端标记为巯基的探针B,所述DNA探针B序列为TCACGGTAGCATAAGGTGCAAGATAATACTCTCGTAGCAC;3′端标记为巯基的探针D,所述DNA探针D序列为GGCCTCCTCCAATTAAAGAATCACGATGAGACTGGATGAA;5′端标记为磷酸基、3′端标记为巯基的探针E,所述DNA探针E序列为TCACGGTAFCATAAGGTGCAGTACCCAAATAACGGTTCAC 。
【技术特征摘要】
1.用于检测人体内低丰度抗体的邻位连接核酸探针,其特征在于:包括3′端标记为巯基的探针A,所述DNA探针A序列为CAGGTAGTAGTACGTCTGTTTCACGATGAGACTGGATGAA;5′端标记为磷酸基、3′端标记为巯基的探针B,所述DNA探针B序列为TCACGGTAGCATAAGGTGCAAGATAATACTCTCGTAGCAC;3′端标记为巯基的探针D,所述DNA探针D序列为GGCCTCCTCCAATTAAAGAATCACGATGAGACTGGATGAA;5′端标记为磷酸基、3′端标记为巯基的探针E,所述DNA探针E序列为TCACGGTAFCATAAGGTGCAGTACCCAAATAACGGTTCAC。2.一种包括如权利要求1所述的用于检测人体内低丰度抗体的邻位连接核酸探针试剂盒,其特征在于:包括3′端标记为巯基的DNA探针A、5′端标记为磷酸基、3′端标记为巯基的探针B、3′端标记为巯基的DNA探针D、5′端标记为磷酸基、3′端标记为巯基的探针E,用于溶解抗体的交联缓冲液、用于溶解抗原的孵育缓冲液、链接缓冲液。3.根据权利要求2所述的用于检测人体内低丰度抗体的邻位连接核酸探针试剂盒,其特征在于:所述交联缓冲液为55mmol/L磷酸钠,150mmol/L氯化钠,20mmol/LEDTA,且所述交联缓冲液的pH=7.2。4.根据权利要求2所述的所述的用于检测人体内低丰度抗体的邻位连接核酸探针,其特征在于:所述孵育缓冲液成分为2%BSA,0.2%Triton,X-100,8mmol/LEDTA,PBS。5.根据权利要求2所述的用于检测人体内低丰度抗体的邻位连接核酸探针试剂盒,其特征在于:所述链接缓冲液中包括具有荧光标记的寡核苷酸桥链,所述链接缓冲液成...
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