MALT1的切割活性与活化的B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤(ABC-DLBCL)的发病机制有关，所述ABC-DLBCL是耐化疗形式的DLBCL。我们开发了MALT1的活性检测方法并鉴定了化学多样性的MALT1的抑制剂。所选的先导化合物MI-2的特征在于直接结合MALT1并抑制其蛋白酶功能。MI-2在人ABC-DLBCL细胞内富集并不可逆地抑制对MALT1的底物的切割作用。上述作用伴随着NF-κB报告子活性的抑制、c-REL核定位的抑制和NF-κB靶基因标记物的下调。最值得注意的是，MI-2对小鼠是无毒的，并且在体外针对ABC-DLBCL细胞系、以及在体内针对异种移植的ABC-DLBCL肿瘤显示出有效的和特异性的活性。所述化合物在体外针对原代的人非GCB-DLBCL也是有效的。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】MALT1的小分子抑制剂 巧关申请的香叉引用 本专利技术要求2012年11月9日提交的美国临时专利申请号61/724, 650的优先权， 其全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
非霍奇金淋己瘤（NHL)是排名第屯的最常见癌症（(Siegeletal.，2012)。 弥漫性大B细胞淋己瘤值LBCL)是饥正最常见的亚型，占所有淋己瘤病例的约25 % (Swerdlow，2008)。基因表达谱能够将DLB化亚分类分成不同的分子亚型，包括：生发中 屯、B细胞样（GCB)DLB化、活化的B细胞样（ABC)DLB化和原发性纵隔B细胞淋己瘤（PMBL) (Alizadehetal.，2000;Rosenwaldetal.，2003)。运些亚型在其复发性体细胞突变谱、 对不同信号通路的依赖性和对目前标准疗法的应答上具有显著差异化enzetal.，2008b; Wri曲tetal.，2003)。患有GCB亚型的患者相较于患有ABC亚型的患者具有显著更优的 总存活率（Alizadehetal.，2000;Rosenwaldetal.，2002)。所有的DLB化均需要改进 的疗法，但是最耐雙化疗的ABC-DLB化的运种需要最为迫切。 ABC-DLB化的特征为其依赖于通过多种不同机制的NF-KB通路的致癌性活 化。运些大多设及参与B细胞受体度CR)下游通路的分子的体细胞突变，包括=CARMAl/ CA畑IULenzetal.，2008a)和CD79A/B值avisetal.，2010)的活化突变、TNFAIP3/A20 的 同源性缺失/失活突变（Compa即Oetal. , 2009;Honmaetal. , 2009)或Toll样受体下游 的MYD88 的活化突变（Ngoetal.，2011)。CARMAl形成CBM复合体（CARMA1-BCL10-MALT1) 的一部分并且介导了B细胞受体、T细胞受体（Ruefli-Brasseetal. , 2003;Rulandet al.，2003)和ITAM偶联的NK细胞受体（Grossetal.，2008)下游的NF-KB的激活。 MLTl亚基是所述CBM复合体的活性信号成分（Lucasetal.，2001)，并具有运样的蛋白 酶活性特征：其切割和灭活NF-KB信号通路的抑制因子，例如TNFAIP3/A20(Coornaedet al.，2008)、CYLD(Staaletal.，2011)和RELBOlailfingeretal.，2011)、或B化 10 蛋白 (Rebeaudetal. ,2008)，间接地激活NF-kB信号。在多至55%的MLT型淋己瘤患者中，检 测到了MALTl的易位（产生API2-MALT1 融合体的t(ll;18) (q21 ;q21)和导致IGH-MALT1 易位的t(14; 18) (q32;q21)HFarinhaandGascoyne, 2005)。此易位导致MALTl的过 表达，并且在所述API2-MALT1易位的情况下，导致所述通路的组成型活化值ierlammet al., 1999 ;Sanchez-Izquierdoetal., 2003;Streubeletal., 2003)。在小鼠中MALTl 的组成型表达诱导了类似于人的MLT淋己瘤的疾病并且在p53缺失的背景下诱导了ABC 样的DLB化(Vicente-Duenasetal.，2012)。MALTl尚未在DLB化中被发现突变或易位， 但随着B化2的升高而升高，并且此低拷贝数扩增与ABC-DLB化的表型相关值ierlammet al.，2008)。此外，已显示ABC-DLB化细胞系依赖于MALTl的催化活性（Ferchetal.，2009 ; Hailfingeretal. , 2009;Ngoetal. , 2006)。 阳0化]MALTl是类半脫天冬酶（paracaspase)，与半脫天冬酶（半脫氨酸-天冬氨酸蛋 白酶）家族的蛋白酶相关，但其在精氨酸或赖氨酸残基之后而非在天冬氨酸之后进行切割 (Rebeaudetal.，2008)。MLTl缺失的动物显示出B和T细胞功能的缺陷，但在其它方面 是健康的（Ruefli-Brasseetal.，2003;Rulandetal.，2003)，并且MALTl是人类基因组 中仅有的paracaspase。运些因素表明，MALTl祀向治疗将有可能是耐受良好的，并具有很 少的或可控的毒性。因此，MLTl代表了ABC-DLB化和MLT淋己瘤的潜在重要的治疗祀点。 发巧概沐 MLTl是独特的paracaspase蛋白，其转导成在ABC-DLB化中异常的致癌信号。本 专利技术人在本文中公开了对组成型活化形式的MLTl的开发，所述组成型活化形式的MLTl 使得筛选小分子抑制剂成为可能；并要求保护MLTl抑制性化合物及其在治疗医学疾病 (如B细胞淋己瘤）中的用途。化合物MI-2(MALT1蛋白酶的不可逆抑制剂）被鉴定为在基 于细胞的测定中具有纳摩尔级活性并且针对ABC-DLB化具有选择性活性的先导化合物。重 要的是，我们证明了MLTl抑制剂在体外和体内杀死ABC-DLB化、是对动物无毒的、并且还 抑制原代人非GCB-DLB化标本。因此，我们证实了MALTl是真实的治疗祀点，并提供了作为 新一类B细胞淋己瘤治疗剂的基础的先导化合物。 在多种实施方式中，本专利技术提供了一种调节MLTl的方法，所述方法包括使MLTl 接触有效量或浓度的式（I)化合物 其中 虚线键表明键是可存在或不存在的； 阳01引 当Y郝Y2之间存在双键时，Y1是N或CR,Y2是C，且存在Ar1;当Y郝Y2之间存在 单键时，Yi是CR2,Y2是0或S，且不存在Ar1，化及各自被独立地选择的R是H或（C1-C6)烧 基； Ri是烷基、烧氧烷基、或芳烷基，其中任何烷基、烧氧烷基、或芳烷基，可W被面素 或（C1-C6)烷氧基单一地或多个独立地取代，条件是当所述氧原子和所述包含y3的环之间 存在双键时，不存在Ri且存在Ar3,而当所述氧原子和所述环之间存在单键时，存在Ri, 和 带有所述氧原子的所述碳原子之间存在双键，且不存在Ar3; Ar堪被1-3个J堪团取代的苯基J堪面素或（C1-C6)烷氧基；[001引 Ar2是被1-3个J2基团取代的苯基J2是W式-N佩C(0)-R2表示的组且R2是烧 基、芳基或芳基氨基，其中任何烷基、芳基或芳基氨基被0-2个面素、硝基、或（C1-C6)烧氧 基取代； Ar堪被1-3个J堪团取代的苯基J堪面素或（C1-C6)烷氧基； 或其任何盐、水合物、互变异构体、或立体异构体。 在多种实施方式中，本专利技术进一步提供了治疗或预防癌症的方法，该方法包括将 有效剂量的上述式（I)化合物施用给患者。更具体的，所述癌症可W是淋己瘤，例如弥漫性 大B细胞淋己瘤值LB化）。 在多种实施方式中，本专利技术另外提供了一种鉴定MLTl的小分子调节物的方法， 所述方法包括使融合有亮氨酸拉链二聚化基序化Z-MALT1)的重组形式的MALTl(340-789) 与候选的调节化合物接触，使用与所述巧光发生素AMC(7-氨基-4-甲基香豆素）连接的所 述MLTl的底物肤LRSR，从而本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种调节MALT1的方法，所述方法包括使MALT1接触有效剂量或浓度的式(I)化合物其中虚线键表明键是可存在或不存在的；当Y1和Y2之间存在双键时，Y1是N或CR，Y2是C，且存在Ar1；当Y1和Y2之间存在单键时，Y1是CR2，Y2是O或S，且不存在Ar1，以及各自被独立地选择的R是H或(C1‑C6)烷基；R1是烷基、烷氧烷基、或芳烷基，其中任何烷基、烷氧烷基、或芳烷基，可以被卤素或(C1‑C6)烷氧基单一地或多个独立地取代，条件是当所述氧原子和所述包含Y3的环之间存在双键时，不存在R1且存在Ar3，而当所述氧原子和所述环之间存在单键时，存在R1，Y3和带有所述氧原子的所述碳原子之间存在双键，且不存在Ar3；Ar1是被1‑3个J1基团取代的苯基；J1是卤素或(C1‑C6)烷氧基；Ar2是被1‑3个J2基团取代的苯基；J2是以式‑N(R)C(O)‑R2表示的组且R2是烷基、芳基或芳基氨基，其中任何烷基、芳基或芳基氨基被0‑2个卤素、硝基、或(C1‑C6)烷氧基取代；Ar3是被1‑3个J3基团取代的苯基；J3是卤素或(C1‑C6)烷氧基；或其任何盐、水合物、互变异构体、或立体异构体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·梅尔尼克，H·吴，
申请(专利权)人：康奈尔大学，
类型：发明
国别省市：美国;US
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