本发明专利技术公开了阿司匹林抵抗相关的COX‑1基因多态性位点及应用。抗血小板药物（尤其是阿司匹林）在缺血性卒中的防治中起着至关重要的作用，但是目前的调查结果表明很多缺血性卒中患者即使服用了抗血小板药物，仍然反复再发卒中，这种现象称为抗血小板药物抵抗。申请人明确了一个与阿司匹林抵抗相关的COX‑1基因多态性位点：COX‑1（A842G），并针对该位点设计了检测该位点多态性的引物，该引物可用于制备筛选阿司匹林抵抗患者试剂盒，以为缺血性卒中患者选择抗血小板药物，降低阿司匹林抵抗及卒中复发率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学疾病治疗药物选择领域，具体涉及阿司匹林抵抗相关cox-ι基因 多态性位点及应用。 技术背景 随着我国人口老龄化，脑血管病发病率逐年攀升，最新调查结果表明从2010年起 脑血管病已成为超越肿瘤危害中国人健康的第一大杀手，每年我国新发病例200万，缺血 性脑血管病占70~80%，复发患者占27%，70%的患者留有神经功能缺损，脑血管病的高 致死率、致残率和复发率已造成了极大的社会负担和经济负担。抗血小板药物（尤其是阿 司匹林）在脑血管病的防治中起着至关重要的作用，但是目前的调查结果表明很多脑血管 病患者即使服用了抗血小板药物，仍然反复再发卒中，这种现象称为抗血小板药物抵抗。 抗血小板药物抵抗与诸多因素相关，如脑血管病相关危险因素（性别、糖尿病、吸 烟、代谢综合征、急性冠脉综合征、既往心血管事件、肝肾功能异常、血液系统疾病等），患者 依从性或药物剂量，药物相互作用及基因多态性等。其中基因多态性是目前研宄热点。阿 司匹林在体内主要是通过与内皮细胞环氧酶（cycl〇-〇xygen_ase，COX)的结合使其失活， 从而抑制血栓素 A2(TXA2)和前列环素（PGI2)的产生，达到抗血小板的作用。既往研宄发 现，在体内影响阿司匹林作用的多个环节的因子存在基因多态性，这种多态性直接影响其 功能，从而使得不同个体服用阿司匹林后对血小板的反应不同。据不完全统计，临床阿司匹 林抵抗的患者高达40%，但是因为影响阿司匹林作用的靶点众多，到目前为止，阿司匹林抵 抗相关的基因多态性还不确定。但是阿司匹林作为缺血性脑血管疾病二级预防的重要药 物，尽快明确阿司匹林抵抗相关基因多态性至关重要。 环氧酶COX，是前列腺素（PGs)合成所必须的酶，全称为环氧化物水解酶。COX有 两种同工酶C0X-1和COX-2。C0X-1主要存在于血管、胃、肾等组织中，它产生的PG参与机 体正常生理过程和保护功能。阿司匹林通过与环氧酶C0X-1活性部位多肽链530位丝氨 酸残基的羟基发生不可逆的乙酰化，导致C0X-1失活，继而阻断花生四烯酸转化为血栓素 A2(TXA2)的途径，抑制血小板聚集。基于申请人最近的研宄，申请人明确了一个与阿司匹林 抵抗相关的C0X-1基因多态性位点：COX-1 (A842G)，该位点可用于为缺血性卒中患者选择 抗血小板药物，降低阿司匹林抵抗及卒中复发率。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了阿司匹林抵抗相关的C0X-1基因多态性位点：A842G。该 位点位于人C0X-1基因全长的第842位，其碱基为A或G，携带有C0X-1突变体842G等位基 因的患者与野生型A842患者相比，更易出现阿司匹林抵抗。 本专利技术的另一个目的在于提供了检测阿司匹林抵抗相关cox-ι基因多态性位点 A842G的引物。 本专利技术最后一个目的在于提供了基于C0X-1基因多态性位点A842G的引物在制备 筛选阿司匹林抵抗患者试剂盒中的应用。该试剂盒可用于筛选阿司匹林抵抗患者，以便更 好的为缺血性卒中患者选择抗血小板药物，降低阿司匹林抵抗及卒中复发率。 为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术措施： 与阿司匹林抵抗相关的COX-I基因多态性位点，该位点是在人COX-I基因的842 位发生了 A -G的突变，经检测携带有C0X-1突变体842G的患者更容易发生阿司匹林抵抗。 基于C0X-1基因的A842G位点设计引物，然后对该位点进行检测。 本专利技术的保护内容还包括检测阿司匹林抵抗相关C0X-1基因多态性位点A842G的 引物，该引物只要是基于C0X-1基因的A842G位点设计的引物，并能成功扩增出包括C0X-1 基因的A842G的DNA片段的，均为本专利技术的保护内容。 优选的，根据上述C0X-1基因多态性位点A842G设计的引物为： 正义链：5 '-AAGCCTTATTAGAGGGTA-3' 反义链：5 '-TACTTTGACGCCGGTGGG-3' ； 或 正义链：5 '-TCTCCCATATTGTAACTT-3' 反义链：5 '-GTAGGAATAGACGTAGAC-3' ； 或 正义链：5 '-TGTAACTTACTACTCCGG-3' ； 反义链：5 '-ACGTAGACACACGAGCAT-3'。 基于C0X-1基因多态性位点A842G的引物在制备筛选阿司匹林抵抗患者试剂盒中 的应用，包括利用COX-I (A842G)位点引物对缺血性卒中患者的DNA进行检测，若检测到携 带有C0X-1突变体842G的患者，则该患者有更易产生阿司匹林抵抗的趋势，检测方法包括 但不限于目前已有的针对SNP位点的检测技术。 包括利用本专利技术提供的COX-1 (A842G)位点引物，与其他阿司匹林抵抗相关的多 态性位点引物结合组成的试剂盒，对患者的DNA进行检测，来筛选更易产生阿司匹林抵抗 的患者。所述的其他与阿司匹林抵抗相关的多态性位点为：人GP I a基因多态性位点 (C807T)，引物：正义链：5 '-TTCCTTAACTGTTACTTC-3'，反义链：5 '-CTGTGCCATCTCCTATT 1'-3'；人6卩1118基因多态性位点仏1166〇引物：正义链：5'161^^6六〇六0^〇六(：11^-3'， 反义链：5 '-GGATAATCCTAGGAAAAT-3' ；和人P2Y1基因多态性位点（A745G)引物：正义链： 5 ' -CACGGGTGGCCATGTCGC-3 '，反义链：5 ' -TACCAGGTAAATCGATTT-3 '。 与现有技术相比，本专利技术具有以下特点： 1)本专利技术提供的C0X-1基因多态性位点（A842G)与阿司匹林抵抗相关，意在为缺 血性卒中患者更好的选择抗血小板药物，降低卒中复发率。 2)本专利技术提供的针对检测C0X-1基因多态性位点A842G的引物，意在制备筛选阿 司匹林抵抗的患者的试剂盒。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。本专利技术所述技术方案，如未特别说 明，均为本领域的常规方案。 实施例1 : 与阿司匹林抵抗相关的COX-I基因多态性位点（A842G)的发掘： 从卒中数据库中调取2010~2014年卒中患者数据，根据缺血性卒中诊断标准，筛 选确诊为缺血性卒中患者，并且进一步选取明确服用阿司匹林作为二级预防（二级预防是 针对已经有脑卒中症状或已发生卒中后的患者而言，这些人需要预防再次发生脑卒中）的 患者为研宄对象作为总样本（共5033人）。 1.明确总样本中卒中复发的人数，探讨总样本中COX-1 (A842G)基因的多态性与 卒中复发的关系（表2); 2.总样本中，来院复查患者（包括已复发的和未复发的患者，共3429人），采集患 者外周血，采用VerifyNow仪器检测阿司匹林反应单元（ARU)，确定ARU彡550的人数，探讨 COX-1 (A842G)基因的多态性与ARU彡550的关系（表1)。 本专利技术实施例中，以下两种情况任意一种发生均视为发生阿司匹林抵抗： 1.若患者服用阿司匹林期间，仍然发生卒中，则定义为阿司匹林抵抗； 2.采用VerifyNow仪器检测阿司匹林反应单元（ARU)，如果ARU彡550,则定义为 血小板高反应性，表明这个患者存在阿司匹林抵抗。 结果表明，服用本文档来自技高网...
【技术保护点】
针对人COX‑1基因的842位设计的引物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：胡波，毛玲，夏远鹏，贺权威，靳慧娟，李亚男，
申请(专利权)人：武汉欧瑞康安生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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