本发明专利技术公开了以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点的药物在制备抑制新生内膜形成的药物中的应用，申请人发现Sema3E/PlexinD1信号通路可以作用于平滑肌细胞抑制其增殖迁移，一方面通过抑制内皮细胞血小板源性生长因子（PDGF）的生成，另一方面通过激活Sema3E/PlexinD1下游信号通路，双重作用显著抑制平滑肌细胞增殖迁移从而抑制新生内膜形成，为动脉粥样硬化、支架植入术后再狭窄等血管增生性疾病提供了新的思路。
The application of Sema3E/PlexinD1 signaling pathway drug in the preparation of drugs to inhibit neointimal formation
The invention discloses a Sema3E/PlexinD1 signal pathway for the application of drug and drug targets in the preparation of inhibition of neointima formation in the Sema3E/PlexinD1 signaling pathway, can inhibit the proliferation of smooth muscle cells to migrate, on the one hand, platelet derived growth factor by inhibiting endothelial cell of blood (PDGF) generation, on the other hand through the activation of Sema3E/PlexinD1 downstream signaling pathways, double action significantly inhibited the proliferation and migration of smooth muscle cell and inhibit neointima formation, atherosclerosis, restenosis after stent implantation and vascular proliferative disease provides a new way of thinking.
【技术实现步骤摘要】
Sema3E/PlexinD1信号通路靶点药物在制备抑制新生内膜形成药物中的应用
本专利技术属于医药
，更具体涉及以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点的药物在制备抑制新生内膜形成的药物中的应用。
技术介绍
动脉粥样硬化是造成缺血性心脏病(冠心病)、缺血性脑卒中的重要原因，动脉粥样硬化管腔狭窄或阻塞导致的缺血心脑血管成为危害中国人健康的第一杀手。经皮腔内血管成形术(PTA)采用球囊充盈将闭塞或狭窄的血管扩开，使供血恢复正常。其中皮腔内冠状动脉血管成形术(PTCA)已被广泛应用于治疗缺血性心脏病。数十年来，PTA技术已在成功率和降低急性并发症方面取得了很大进步。但是PTA术后3～6个月约有30％～50％得而患者扩张的冠状动脉会发生再狭窄。血管内支架能有效地控制PTA弹性回缩所导致的再狭窄，可显著降低介入治疗时急性或亚急性缺血并发症，但是PTA和支架的植入都会导致局部血管内膜的损伤，反而刺激局部新生内膜增厚而导致再狭窄。目前冠脉支架内再狭窄发生率为20％左右，而颅内血管支架内的再狭窄高达40％以上。因此，支架内再狭窄已成为影响PTA疗效的主要问题和致命弱点。新生内膜形成是动脉粥样硬化、支架植入术后再狭窄等血管增生性疾病共有的重要病理过程。血管平滑肌细胞表型转化是新生内膜形成最重要的过程之一。血管平滑肌细胞有两种不同的表型状态，即分化收缩型和去分化合成型，两种表型在一定条件下可以相互转化。正常生理状态下，动脉中膜VSMCs处于收缩表型，其主要功能是通过收缩/舒张调节血管张力和组织的血流供应。病理情况下，当血管壁特别是血管内膜受到球囊、支架损伤或其他损伤因子后，动脉中膜VSMCs表型发生改变(由静息/收缩状态转变为增殖/合成表型)，在多种细胞因子的作用下，VSMCs不断增殖并向内膜迁移，同时过度合成和分泌大量细胞外基质，导致血管新生内膜形成并引起再狭窄。如果能预防甚至逆转表型转化，抑制平滑肌细胞增殖迁移，即可在早期抑制血管增生性疾病的发生发展。目前认为平滑肌表型转化主要由多种生长因子(最重要的生长因子是血小板源性生长因子PDGF)和机械性刺激所诱发，并通过多种信号通路将刺激信号传导至细胞内，最终引起平滑肌细胞表型的改变。然而，表型转化的发生机制尚未完全明确，目前仍缺乏有效的干预措施。针对上述问题，申请人发现Sema3E/PlexinD1信号通路可以作用于平滑肌细胞抑制其增殖迁移，一方面通过抑制内皮细胞血小板源性生长因子(PDGF)的生成，另一方面通过激活Sema3E/PlexinD1下游信号通路，双重作用显著抑制平滑肌细胞增殖迁移从而抑制新生内膜形成，为动脉粥样硬化、支架植入术后再狭窄等血管增生性疾病提供了新的治疗方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供了以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点的药物在制备抑制新生内膜形成的药物中的应用，以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点，通过药物使Sema3E高表达或使Sema3E/PlexinD1持续激活，可抑制平滑肌的增殖迁移、抑制内皮细胞血小板源性生长因子(PDGF)的生成、进而抑制新生内膜形成，从而进一步为动脉粥样硬化、支架植入术后再狭窄等血管增生性疾病提供新的治疗措施。为了达到上述目的，本专利技术采取以下技术措施：以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点的药物在制备抑制新生内膜形成的药物中的应用，包括利用该药物制备抑制新生内膜形成的药物，或是利用该药物制备抑制平滑肌的增值的药剂，或是利用该药物制备抑制平滑肌的细胞周期的药物，或是利用该药物制备抑制平滑肌的迁移的药物。所述的以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点的药物包括：Sema3E的重组蛋白，Sema3E类似物、Sema3E/PlexinD1信号通路激活剂，表达或过表达上述Sema3E的重组细菌或病毒。本专利技术与现有技术相比，具体以下优点和效果：本申请首次发现以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点设计的药物可以一方面通过调控其下游信号分子作用于平滑肌细胞抑制平滑肌增殖迁移，另一方面抑制内皮细胞血小板源性生长因子(PDGF)的生成，通过双重作用显著抑制平滑肌细胞增殖迁移从而抑制新生内膜形成，为动脉粥样硬化、支架植入术后再狭窄等血管增生性疾病提供了新的治疗方法。附图说明图1为Sema3E重组蛋白呈浓度依赖的抑制平滑肌细胞的增殖示意图。图2为Sema3E重组蛋白抑制平滑肌细胞从G0/G1期进入S期示意图。图3为Sema3E重组蛋白呈浓度依赖抑制平滑肌细胞纵向迁移示意图；其中，图3中的上图显示Transwell实验证实Sema3E重组蛋白呈浓度依赖抑制平滑肌细胞纵向迁移示意图，图3中的下图为分析图。图4为Sema3E重组蛋白抑制平滑肌细胞横向迁移示意图；其中，图4的左图划痕实验证实Sema3E重组蛋白抑制平滑肌细胞横向迁移，图4中的右图为分析图。图5为Sema3E重组蛋白和rmPlexinD1对内皮细胞PDGF蛋白的影响；其中，图5中A表明，WesternBlot证实Sema3E重组蛋白浓度依赖的抑制内皮细胞PDGF蛋白，且抑制作用能被其受体PlexinD1的重组蛋白阻断；图5中B为RT-PCR证实Sema3E重组蛋白浓度依赖的抑制内皮细胞PDGF的mRNA水平，且抑制作用能被其受体PlexinD1的重组蛋白阻断。图6为过表达Sema3E显著抑制血管损伤后新生内膜增生；其中图6中A表明采用慢病毒转染过表达Sema3E显著抑制血管损伤后新生内膜增生，图6中B为免疫组化实验发现过表达Sema3E减少了血管损伤后ki67阳性平滑肌细胞数。具体实施方式为了更好地理解本专利技术的内容，下面结合具体实施方法对本
技术实现思路
作进一步说明，但本专利技术的保护内容不局限于以下实施例。本专利技术所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案；所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。实施例1：以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点的药物(本实施例以Sema3E重组蛋白为例)抑制平滑肌细胞增殖：(1)原代主动脉血管平滑肌细胞提取：8周龄雄性C57BL/6小鼠5只，腹腔注射(30-50mg/kg)戊巴比妥钠麻醉，分离小鼠胸主动脉，将小鼠胸主动脉浸泡于Ⅱ型胶原酶中消化30min，然后在解剖显微镜下剥离外膜，10％胎牛血清将血管培养过夜，第二天用弹力蛋白酶、DNA酶、胶原酶再次消化1-1.5小时，将消化得到的细胞离心收集培养，3-6代的原代主动脉血管平滑肌胞用于后续实验。(2)用10％胎牛血清接种平滑肌于24孔细胞培养板中，置于37℃、5％CO2培养箱中培养培养过夜，换用无血清的DMEM饥饿24h后，添加以下不同的试剂进行刺激，分组具体如下(每组样本数及重复≥5)：a.什么都不添加(即空白对照)；b.20ng/ml的PDGF-BB重组蛋白；c.1ng/ml的Sema3E重组蛋白+20ng/ml的PDGF-BB重组蛋白；d.10ng/ml的Sema3E重组蛋白+20ng/ml的PDGF-BB重组蛋白；e.100ng/ml的Sema3E重组蛋白+20ng/ml的PDGF-BB重组蛋白；f.500ng/ml的Sema3E重组蛋白+20ng/ml的PDGF-BB重组蛋白；以上各组刺激24h之后，细胞本文档来自技高网...
【技术保护点】
以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点的药物在制备抑制新生内膜形成的药物中的应用，所述的以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点的药物包括：Sema3E的重组蛋白，Sema3E类似物、Sema3E/PlexinD1信号通路激活剂，表达或过表达Sema3E的重组细菌或病毒。
【技术特征摘要】
1.以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点的药物在制备抑制新生内膜形成的药物中的应用，所述的以Sema3E/PlexinD1信号通路为靶点的药物包括：Sema3E的重组蛋白，Sema3E类似物、Sema3E/PlexinD1信号通路激活剂，表达或过表达Sema3E的重组细菌或病毒。2.Sema3E重组蛋白或过表达Sema3E的重组细菌或病...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡波，李亚男，吴介洪，
申请(专利权)人：武汉欧瑞康安生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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