本发明专利技术表明miR‑22能靶向负性调控REDD1的表达，且miR‑22在膀胱癌组织中低表达。miR‑22能通过“REDD1‑自噬”调控轴影响膀胱癌细胞对紫杉醇化疗的敏感性。因此miR‑22可能做为膀胱癌化疗增敏治疗的潜在靶点。因此，miR‑22作为靶位点可以用于制备膀胱癌的化疗增敏治疗药物。尤其是miR‑22作为靶位点可以用于制备抑制自噬增加膀胱癌细胞对紫杉醇化疗敏感性的药物。所述膀胱癌是指BUC。
The application of sensitive drugs in treatment by miR 22 as target sites in the preparation of bladder cancer chemotherapy
The present invention shows that miR 22 can expression targeting negative regulation of REDD1, miR and 22 low expression in bladder cancer. MiR 22 through the sensitivity of REDD1 autophagy regulation axis effect of bladder cancer cells to paclitaxel chemotherapy. Therefore, miR 22 may be a potential target for sensitizing treatment for bladder cancer. Therefore, miR 22 as the target site can be used for the preparation of bladder cancer chemotherapy drugs. Especially miR 22 as the target site can be used for the preparation of bladder cancer cell inhibition of autophagy increased drug sensitivity to paclitaxel chemotherapy. The described bladder cancer refers to BUC.
【技术实现步骤摘要】
miR-22作为靶位点在制备膀胱癌的化疗增敏治疗药物中的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及miR-22作为靶位点在制备膀胱癌的化疗增敏治疗药物中的应用。
技术介绍
BUC是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤，具有高复发率和高进展率。手术切除是BUC的标准治疗方法，但50％的肌层浸润性BUC患者在术后复发和转移2年内死亡。联合化疗能降低膀胱癌的复发率，提高患者生存率。微管稳定剂paclitaxel已被证实对BUC具有良好疗效。近期三期临床实验发现在标准化疗方案cisplatinplusgemcitabine(GC)基础上添加paclitaxel的PCG方案能有效提高BUC的总体反应率及总体生存率。但紫杉醇耐药性的产生或患者对紫杉醇不敏感限制了其临床运用。因此如何增加BUC对紫杉醇的敏感性是亟待解决的临床问题。自噬的激活是化疗耐药产生的重要机制之一，它可协助肿瘤细胞拮抗紫杉醇等化疗药物带来的代谢应激，从而提高细胞的生存率。REDD1是应激相关蛋白，在缺氧、应激和多种DNA损害刺激下诱导表达。REDD1能通过抑制mTOR信号通路参与细胞增长、肿瘤形成、细胞衰老的调控。已有文献报道REDD1在卵巢癌、前列腺癌等肿瘤中起癌基因作用，在非小细胞肺癌、乳腺癌等肿瘤中起抑癌基因作用。但REDD1在BUC中的作用尚无相关报道。REDD1还可通过mTOR-EEF2K途径参与诱导自噬。研究报道REDD1诱导的自噬促进了骨髓瘤细胞、前列腺癌细胞化疗耐药性的产生。然而REDD1介导的自噬对紫杉醇治疗BUC耐药性的影响尚不清楚。而且调控REDD1的机理也并不清楚。
技术实现思路
本专利技术实验表明REDD1在BUC中起癌基因作用，其调控膀胱癌细胞的增殖、凋亡及自噬。抑制REDD1-EEF2K-自噬轴是增加膀胱癌细胞化疗敏感性的潜在治疗手段。研究报道REDD1的表达及生物学作用在不同肿瘤中具有组织特异性。但REDD1与BUC患者临床病理或预后的关系尚无相关报道，REDD1在BUC中的生物学作用更不清楚。本实验首次发现相对正常组织，REDD1在BUC组织表达显著增高。进一步的临床分析显示REDD1的高表达与BUC高侵袭、淋巴转移及预后差密切相关，且是BUC的独立预后因子。提示REDD1可能成为BUC预后评估的潜在指标。为了进一步探索REDD1在膀胱癌中的生物学功能，我们在高表达REDD1的T24细胞中抑制REDD1的表达，在低表达REDD1的RT4细胞中过表达REDD1。发现沉默REDD1表达后膀胱癌细胞增殖能力下降，凋亡增加，过表达REDD1后膀胱癌细胞增殖能力增加，凋亡减少。提示REDD1在膀胱癌细胞中起癌基因作用。我们的结果与REDD1在卵巢癌15,16及前列腺癌17中起癌基因作用的报道一致。REDD1作为应激相关蛋白，可被缺氧、营养缺乏、能量压力等应激条件激发。肿瘤细胞，尤其是进展期肿瘤细胞存于上述各类应激反应中，因此肿瘤细胞上调REDD1的表达可能是逃避凋亡的一种自我保护机制。REDD1作为RAS、HIF-1α等癌基因的中间调控环节，可能通过激活了抗凋亡程序进而抑制凋亡并促进肿瘤进展。研究发现REDD1促进细胞存活的机制可能和激活AKT信号通路及抑制mTOR信号通路有关。mTOR信号通路可以调节ULK1蛋白激活复合物的活性进而抑制自噬。EEF2K是calcium/calmodulin-dependentenzyme,其表达上调可触发自噬。研究发现mTOR信号通路还可通过磷酸化EEF2K的Ser78/Ser366位点促进EEF2K的降解，进而下调自噬水平。而REDD1是MTOR抑制剂，可通过MTOR-EEF2K途径稳定EEF2K的表达，促进自噬20。因此REDD1-EEF2K-自噬调控轴存在。本实验中REDD1过表达后细胞EEF2K表达上升，自噬水平上调，而敲出REDD1抑制EEF2K表达及自噬水平，首次在膀胱癌细胞中进一步证实了上述调控轴。REDD1介导的自噬促进了细胞的存活。因此REDD1促进的自噬可能是REDD1在膀胱癌中起癌基因作用的机制之一。适当的激活自噬能促使细胞适应应激并促进生存。肿瘤细胞自噬增加是化疗耐受或不敏感的原因之一，因此选择性抑制自噬关键调控分子能有效增加化疗敏感性10,33。我们发现在T24细胞中沉默REDD1下调自噬后，细胞对紫杉醇的敏感性增加；在RT4细胞中上调REDD1激活自噬后，细胞对紫杉醇的敏感性下降。先前研究也报道抑制REDD1-自噬轴可促进骨髓瘤细胞、前列腺癌细胞对化疗药物的敏感性。在本实验中IC25剂量的紫杉醇对T24及RT4细胞自噬水平及REDD1的表达无明显影响(数据未呈现)。紫杉醇被报道能促进卵巢癌、肺癌细胞等的自噬，但抑制MCF-7、SK-BR-3乳腺癌细胞的自噬。提示紫杉醇在不同肿瘤细胞中对自噬的作用不同，可能与肿瘤细胞的状态及紫杉醇触发自噬的阈值不同有关。另外，本专利技术表明miR-22能靶向负性调控REDD1的表达，且miR-22在膀胱癌组织中低表达。miR-22能通过“REDD1-自噬“调控轴影响膀胱癌细胞对紫杉醇化疗的敏感性。因此miR-22可能做为膀胱癌化疗增敏治疗的潜在靶点。因此，miR-22作为靶位点可以用于制备膀胱癌的化疗增敏治疗药物。尤其是miR-22作为靶位点可以用于制备抑制自噬增加膀胱癌细胞对紫杉醇化疗敏感性的药物。所述膀胱癌是指BUC。附图说明图1：REDD1高表达的患者预后差。(A)免疫组化分析REDD1在112例膀胱癌组织及32例正常膀胱组织石蜡标本中的表达。(B)将112例BUC患者分为REDD1高表达组、REDD1低表达组，Kaplan-Meiercurves法分析两组患者的生存时间差异.用log-ranktest计算P值.(C)BUC组织及正常组织中REDD1的免疫组化代表图。图2：REDD1调控BUC细胞的增殖、凋亡及自噬水平。(A)WB检测膀胱癌细胞系BIU87、5637、T24、EJ及RT4中REDD1的表达。(B)不同shRNA-REDD1(sh-1、sh-2、sh-3)转染T24细胞，REDD1过表达质粒转染RT4细胞。用CCK-8法检测细胞增殖能力。(C)对细胞内LC3B进行荧光标记，用流式细胞仪检测细胞内LC3B表达水平。(D)用流式细胞仪检测细胞的凋亡。(E)用流式细胞仪检测细胞的细胞周期。(F)干预REDD1表达后，WB检测Caspase3、c-PARP、LC3-I/II、EEF2K的表达。****P<0.0001，**P<0.01，*P<0.05；图3：REDD1影响膀胱癌对紫杉醇的敏感性。(A)CCK-8检测细胞增殖能力。(B)WB检测Caspase3、c-PARP、LC3-I/II、REDD1的表达。图4：MiR-22靶向调控REDD1的表达。(A)microRNA.org软件预测miR-22与REDD1存在两个潜在结合位点。(B)QRT-PCR检测BIU87、5637、T24、EJ及RT4中miR-22的表达。(C)miR-22mimics转染T24细胞、anti-miR-22转染RT4细胞后QRT-PCR检测miR-22的表达。(D)干预miR-22表达后，WB检测REDD1的表达。(E)29本文档来自技高网...
【技术保护点】
miR‑22作为靶位点在制备膀胱癌的化疗增敏治疗药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.miR-22作为靶位点在制备膀胱癌的化疗增敏治疗药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是指miR-22作为靶位点可以用于制备抑制自噬增加膀...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹科，曾庆海，朱煜星，何东，刘建业，龚恋，
申请(专利权)人：中南大学湘雅三医院，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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