TNFR2的用途制造技术

本发明专利技术公开一种TNFR2激活剂在制备促进心脏干细胞活化、迁移和存活的药物中的用途，所述TNFR2激活剂具有促进心脏干细胞活化和心肌修复的作用，激活的TNFR2‑Bmx能增强Nkx2.5+/Gata4+的表达和活性，介导c‑Kit+内源性心脏干细胞(eCSCs)的激活、迁移和存活，此外，TNFR2激活增加了hESC/hiPSC来源的心肌细胞的分化。本发明专利技术所述TNFR2激活剂，通过特异性激活TNFR2使其有利于心肌梗死的修复，将为人类心脏疾病治疗提供一种新的策略。

【技术实现步骤摘要】
TNFR2的用途
本专利技术涉及TNFR2的用途，具体是TNFR2作为靶标的用途。
技术介绍
心血管疾病是世界范围内威胁人类生命的最主要疾病之一，其中急性心肌梗塞是冠心病中最严重的疾病，具有很高的发病率和死亡率。心肌梗死会造成不可逆性功能心肌细胞数量的减少，导致心肌收缩功能降低。目前心梗传统的治疗方法主要包括药物治疗、介入治疗和手术治疗，虽能改善心肌缺血症状，但都无法挽救已坏死的心肌细胞。干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，可以替代损伤的心肌细胞，构建新的血管，修复心脏泵血功能，为心梗的治疗提供了一种新的选择。越来越多的证据支持成年心脏干细胞(Cardiacstemcells,CSCs)的存在，并在缺血状态下被激活，在心脏功能修复中发挥重要作用。激活剂，英文名为activator，凡是能提高酶活性的物质都被称为激活剂，其中大部分是离子或简单的有机化合物。配体，同锚定蛋白结合的任何分子都称为配体，配体属于激活剂的一种。在受体介导的内吞中,配体与细胞质膜受体蛋白结合，最后被吞入细胞的即是配体。根据配体的性质以及被细胞内吞后的作用，将配体分为四大类:Ⅰ.营养物，如转铁蛋白、低密度脂蛋白(LDL)等；Ⅱ.有害物质，如某些细菌；Ⅲ.免疫物质，如免疫球蛋白、抗原等；Ⅳ.信号物质，如胰岛素等多种肽类激素等。TNF-α属Ⅱ型膜蛋白，主要由活化的单核巨噬细胞分泌产生，以三聚体形式发挥其作用。它具有可溶性TNF-α和膜相关TNF-α两种存在形式。TNF-α通过与受体TNFR结合来发挥其生物学功能。TNFR也有两种类型：TNFRl和TNFR2，均为I型膜蛋白。可溶性TNF-α在调节炎症反应和调节细胞生存或死亡方面起着重要作用。TNF-α与其受体结合后，首先招募细胞中的TRADD(TNFreceptor-associateddeathdomain)与TNF-α受体的胞内部分结合，然后再活化另外2个受体相关蛋白TRAF2(TNFreceptor-associatedfactor2)和FADD(fas-associateddeathdomain)，从而激活多条信号通路，如NF-κB、JNK、MAPK及细胞凋亡信号通路来实现TNF-α的调节功能。
技术实现思路
本申请人经过大量研究发现，TNFR2(tumornecrosisfactorreceptor-2)即肿瘤坏死因子受体2，其不同于TNFR1所介导的炎症和凋亡功能，TNFR2可通过-Bmx(bonemarrownon-receptortyrosinekinaseinX-chromosome)即X染色体上的骨髓非受体酪氨酸激酶来介导细胞存活、增殖和迁移。而且，TNFR2-Bmx信号通路可能对缺血性心肌中内源性CSCs活化和存活起重要作用。因此，本专利技术的目的在于提供TNFR2作为靶标的多种用途。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：TNFR2作为靶标在筛选或制备促进心脏干细胞活化、迁移和存活的药物中的用途。本专利技术提供了TNFR2作为靶标在筛选或制备促进心脏干细胞分化为心肌细胞或者促进心肌修复的药物中的用途。本专利技术提供了TNFR2作为靶标在筛选或制备治疗人类缺血性心脏病的药物中的用途。本专利技术提供了TNFR2激活剂在制备促进心脏干细胞活化、迁移和存活的药物中的用途。本专利技术提供了TNFR2激活剂在制备促进心脏干细胞分化为心肌细胞或者促进心肌修复的药物中的用途。本专利技术提供了TNFR2激活剂在制备治疗人类缺血性心脏病的药物中的用途。优选地，所述TNFR2激活剂包含TNFR2特异性配体。优选地，所述TNFR2特异性配体为R2-TNF。本专利技术提供了TNFR2抑制剂或者TNFR2拮抗剂在制备抑制心肌细胞分化的试剂中的用途。本专利技术的有益效果在于：本专利技术所述TNFR2激活剂激活了TNFR2-Bmx，从而增强Nkx2.5+/Gata4+的表达和活性，介导c-Kit+内源性心脏干细胞(eCSCs)的激活、迁移和存活的作用，并且激活了的TNFR2，增加hESC/hiPSC来源的心肌细胞的分化，有利于心肌梗死的修复，为人类心脏疾病治疗提供一种新的策略；本专利技术所述TNFR2抑制剂或者TNFR2拮抗剂能够抑制心肌细胞的过度分化。附图说明图1为TNF受体分子和下游效应分子在人正常心脏和缺血心脏的表达分布图；A为切片免疫荧光染色，分别为TNFR1/α-SA，TNFR2/α-SA和Bmx/α-SA三组(CM-心肌细胞，VEC-血管内皮细胞，IC-间质细胞)；B为正常心脏组织和缺血心脏组织westernblot检测相应蛋白表达情况；C-D为磷酸化组蛋白3(pH3s10)与α-SA免疫荧光染色；D为pH3阳性细胞统计图，纵坐标表示高倍视野pH3阳性细胞数，横坐标表示三组细胞(CM-心肌细胞，VEC-血管内皮细胞，IC-间质细胞)，**，p<0.01。n＝5张切片；E组织切片免疫荧光染色，显示pH3s10与TNFR2存在共定位，其中比例尺为50μm；图2为人正常心脏和缺血性心脏中心脏前体细胞分布情况；A为人正常心脏和缺血心脏组织切片中Gata4，NKx2.5和α-SA免疫荧光染色，箭头指出Gata4在心肌细胞细胞核表达；B为Gata4+和NKx2.5+细胞统计，纵坐标表示高倍视野阳性细胞数，横坐标表示c-Kit、Gata4和NKx2.5染色组别，**p<0.01，n＝5张切片；C为人正常心脏和缺血心脏中的心脏前体细胞，用NKx2.5，Gata4和TNFR2进行标记，箭头指向双阳性的细胞，图片放大倍数为40，比例尺为50μm；图3为本专利技术实施例4所述利用TNFR2-KO和Bmx-KO小鼠来检测TNFR2-Bmx信号在心肌损伤模型中对CSCs的激活和生存中的作用的技术路线图；图4为本专利技术所述:小鼠心肌梗死模型，将野生型和TNFR2-KO小鼠进行心肌梗死模型造模；A为梗死大小的测量图；B为野生型小鼠在心肌梗死后的3-28天的缺血情况；C为心肌梗死后AIP1-KO能够增强心肌修复和功能，野生型和AIP1-KO小鼠进行心肌梗死造模，利用超声心电图在第7、14、21、28天测量心脏的功能，分别在0天(手术前)、7天以及28天展示缩短的百分比，纵坐标表示左室射血分数缩短率(LVFS)，横坐标表示手术前后时间，N＝10，*p<0.05；D为野生型和AIP1-KO小鼠在心肌梗死21天后的缺血情况，褐色箭头表示新生成的心肌细胞。比例尺：50μm；图5为本专利技术所述在缺血小鼠心脏中诱导心脏干细胞。野生型和AIP1-KO小鼠进行3-28天的心肌梗死造模；A-B为在第21天对心脏部分进行c-kit+以及cKit+/TNFR2+细胞免疫染色，B图为量化图，*,p<0.05AIP1-KOvsWT.N＝6只小鼠(比例尺：50μm)；纵坐标表示高倍视野c-Kit和TNFR2共同阳性表达细胞数，横坐标表示心脏不同区域(remotezone-远区，borderzone-交界区，ischemiczone-缺血区)，C为将TNFR2和Gata4进行共染色；D为Gata4以及α-SA进行共染色；图6为本专利技术实施例5所述利用内/外源心脏干细胞(小鼠TNFR2+eCSCs和hESC/hiPSC来源的CSC)探讨TNFR2-Bmx信本文档来自技高网...

【技术保护点】
TNFR2作为靶标在筛选或制备促进心脏干细胞活化、迁移和存活的药物中的用途。

【技术特征摘要】
2016.08.10 CN 20161065399651.TNFR2作为靶标在筛选或制备促进心脏干细胞活化、迁移和存活的药物中的用途。2.TNFR2作为靶标在筛选或制备促进心脏干细胞分化为心肌细胞或者促进心肌修复的药物中的用途。3.TNFR2作为靶标在筛选或制备治疗人类缺血性心脏病的药物中的用途。4.TNFR2激活剂在制备促进心脏干细胞活化、迁移和存活的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：王敏，纪卫东，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东,44