抑制ADAM17基因的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抑制ADAM17基因的siRNA及其应用。本发明专利技术公开一种化学修饰的双链siRNA分子，是由如下A所示的siRNA分子中至少一条链经过如下(1)-(13)所示的任意化学修饰后互补而成的双链siRNA分子。本发明专利技术公开的siRNA可以作为关节炎及相关炎症的治疗药物，可通过骨关节腔局部注射siRNA及其制剂抑制炎症因子表达实现对关节炎症的治疗。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种抑制ADAM17基因的siRNA及其应用。本专利技术公开一种化学修饰的双链siRNA分子，是由如下A所示的siRNA分子中至少一条链经过如下(1)-(13)所示的任意化学修饰后互补而成的双链siRNA分子。本专利技术公开的siRNA可以作为关节炎及相关炎症的治疗药物，可通过骨关节腔局部注射siRNA及其制剂抑制炎症因子表达实现对关节炎症的治疗。【专利说明】抑制ADAM17基因的s i RNA及其应用
本专利技术涉及一种抑制ADAM17基因的SiRNA及其应用，属于生物
。
技术介绍
骨关节炎（Osteoarthritis，OA)是一种严重危害人类健康，目前尚缺乏有效治疗 手段的慢性退行性骨关节病变，迫切需要研宄出能有效防治骨关节炎的新方法。骨关节炎 临床病理特征之一是软骨破坏和hFLS细胞外基质降解，而软骨的破坏最终都来源于胞外 基质的蛋白水解。因此多种蛋白水解酶活性增高引起继发性软骨外基质（extracellular matrix，ECM)的降解异常是软骨退变的直接原因，最终导致覆盖关节骨表面的软骨破坏。白 介素-I(IL-I)和肿瘤坏死因子-a (TNF-α)都有促进hFLS细胞分解代谢及降解细胞外基 质的作用，有研宄表明在关节炎患者的关节液中发现高浓度的IL-I和TNF-α，它们被认为 是在关节炎发病机制中起关键作用的促炎细胞因子。 ADAM17(解聚素-金属蛋白酶17)是ADAMs家族（解聚素和金属蛋白酶）的一员， ADAMs家族是近年来发现的一类具有多种功能的细胞膜表面糖蛋白家族，它们共同参与细 胞与细胞、细胞与基质的黏连、细胞融合、胞外基质的降解及信号传导等多种生理过程，如 白细胞的迀移。除此之外，它们还参与了肿瘤形成、增殖及转移等病理过程。ADAM17将膜 结合型的TNF-α切断，产生游离型的TNF-α，因此被称作为TNF-α转换酶（TACE)。游离 型的TNF-α引起炎症性细胞因子的过量分泌、细胞凋亡、细胞内信号传导的障碍等，导致 各种疾病，包括风湿性关节炎（RA)、系统性红斑狼疮（SLE)、多发性硬化症、急性感染病、哮 喘、特应性皮炎、牛皮癣等。ADAM17除以TNF-α为底物外，巨噬细胞集落刺激因子或趋化 因子FKN也受ADAM17的调节。因此，认为抑制ADAM17的化合物有望作为炎症疾病的治疗 药。然而，金属蛋白酶家族高度保守，开发选择性的小分子抑制剂已经被证明具有非常大的 挑战。先前使用更广谱的金属蛋白酶抑制剂的试验已经被证明具有组织毒性，因此开发高 度选择性的ADAM17抑制剂（Moss，2008)是需要解决的问题。 1998年克雷格·梅洛和安德鲁?法尔发现了基因沉默现象，随后Tuschl和他的同 事在哺乳动物细胞中发现化学合成的19 一 25个碱基的小干扰RNA(SiRNA)，可特异高效的 沉默靶mRNA。从此siRNA被广泛用于基因功能研宄，疾病治疗。siRNA可特异的同序列互 补的靶mRNA结合，并使其降解。长片段的双链RNA被Dicer酶切割成21 - 23个碱基长度 短片段RNA。两条链中同靶mRNA结合的链称为反义链，另一条链称为正义链或信使链。体 外化学合成的siRNA进入细胞后同样发挥RNA干扰作用，而且有效降低了长链RNA引起的 免疫反应。但针对同一基因不同片段位置可设计出多种siRNA，沉默效果有明显差异。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抑制ADAM17基因的SiRNA及其应用。 本专利技术提供一种化学修饰的双链siRNA分子，是由如下A所示的siRNA分子中至 少一条链经过如下（1)-(13)所示的任意化学修饰后互补而成的双链siRNA分子： A、一种SiRNA分子，为如下1)或2)所示： I) SEQ ID No. 1所示的RNA单链和SEQ ID No. 2所示的RNA单链互补而成的双链 siRNA分子； 2) SEQ ID No. 2所示的RNA单链和与SEQ ID No. 1所示的RNA单链有60%以上同 源性的RNA单链互补而成的双链siRNA分子； 或，SEQ ID No. 1所示的RNA单链和与SEQ ID No. 2所示的RNA单链有60%以上 同源性的RNA单链互补而成的双链siRNA分子； 或，与SEQ ID No. 2所示的RNA单链有70%以上同源性的RNA单链和与SEQ ID No. 1所示的RNA单链有70%以上同源性的RNA单链互补而成的双链siRNA分子； (1)磷酸骨架的硫代磷酸修饰； 所述硫代磷酸修饰为磷酸骨架的P-S键代替P-OH键； (2)核糖或脱氧核糖的2' -甲氧基修饰； (3)核糖或脱氧核糖的2' -氟修饰； (4)锁核酸修饰； 所述锁核酸修饰为核糖或脱氧核糖的2' -0位和4' -C位通过缩水作用形成环 状结构； (5)开环核酸修饰； 所述开环核酸修饰为核糖或脱氧核糖中2' -C和3' -C间的C-C键断裂； ⑶叼丨噪修饰； 所述吲哚修饰为碱基被吲哚替代； (7)碱基的5 -甲基胞嘧啶修饰； (8)碱基的5-乙炔基尿嘧啶修饰； (9)单链5'末端胆固醇修饰； (10)单链3'末端半乳糖修饰； (11)单链5'末端多肽修饰； 所述多肽具体为从N端到C端的序列为Arg-Gly-Asp的多肽； (12)单链5'末端磷酸化修饰； (13)单链5'末端荧光标记修饰； 所述荧光标记具体为Cy系列荧光标记； 所述与SEQ ID No. 2所示的RNA单链有70%以上同源性的RNA单链和与SEQ ID No. 1所示的RNA单链有70%以上同源性的RNA单链互补而成的双链siRNA分子具体为SEQ ID No. 3所示的单链和SEQ ID No. 4所示的单链互补而成的双链siRNA分子。 上述化学修饰的双链siRNA分子中，所述化学修饰后互补而成的双链siRNA分子 的正义链和反义链分别具有如下Bl和Cl所示的序列： Β1、5' -Γ -L' P' M' UCAUGUAUCUGAA P' Μ' M' dTdT-3' ； Cl、5' -R' -Q' Q' L' UUCAGAUACAUGA Q' L' P' dTdT-3' ； 所述K '为5 '末端胆固醇修饰； 所述R'为无修饰或5'末端磷酸化修饰； 所述dT为胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸； 所述L'、Μ'、P'和Q'分别为脱氧核糖的2' -甲氧基修饰的鸟嘌呤脱氧核糖核苷 酸、脱氧核糖的2' -甲氧基修饰的腺嘌呤脱氧核糖核苷酸、脱氧核糖的2' -甲氧基修饰的 胞嘧啶脱氧核糖核苷酸和核糖的2' -甲氧基修饰的尿嘧啶核糖核苷酸； 或， 所述L'、M'、P'和Q'分别为鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸、腺嘌呤脱氧核糖核苷酸、胞嘧 啶脱氧核糖核苷酸和尿嘧啶核糖核苷酸； 所述反义链为同ADAM17(解聚素-金属蛋白酶17)mRNA结合的单链，所述正义链 为与所述反义链互补结合的单链。 一种SiRNA分子也属于本专利技术的保护范围，为如下（1)或（2)所示： (I) SE本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种化学修饰的双链siRNA分子，是由如下A所示的siRNA分子中至少一条链经过如下(1)‑(13)所示的任意化学修饰后互补而成的双链siRNA分子：A、一种siRNA分子，为如下1)或2)所示：1)SEQ ID No.1所示的RNA单链和SEQ ID No.2所示的RNA单链互补而成的双链siRNA分子；2)SEQ ID No.2所示的RNA单链和与SEQ ID No.1所示的RNA单链有60％以上同源性的RNA单链互补而成的双链siRNA分子；或，SEQ ID No.1所示的RNA单链和与SEQ ID No.2所示的RNA单链有60％以上同源性的RNA单链互补而成的双链siRNA分子；或，与SEQ ID No.2所示的RNA单链有70％以上同源性的RNA单链和与SEQ ID No.1所示的RNA单链有70％以上同源性的RNA单链互补而成的双链siRNA分子；(1)磷酸骨架的硫代磷酸修饰；(2)核糖或脱氧核糖的2’‑甲氧基修饰；(3)核糖或脱氧核糖的2’‑氟修饰；(4)锁核酸修饰；(5)开环核酸修饰；(6)吲哚修饰；(7)碱基的5－甲基胞嘧啶修饰；(8)碱基的5‑乙炔基尿嘧啶修饰；(9)单链5’末端胆固醇修饰；(10)单链3’末端半乳糖修饰；(11)单链5’末端多肽修饰；(12)单链5’末端磷酸化修饰；(13)单链5’末端荧光标记修饰。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张必良，米其·托尔托雷，王喆，杨秀群，王秋云，
申请(专利权)人：广州市锐博生物科技有限公司，中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44