一种制备奈西利肽的方法技术

本发明专利技术涉及一种制备奈西利肽的方法，本发明专利技术具体步骤为：A）通过液相法合成三肽片段H-Arg(Boc)2-Arg(Boc)2-His(Trt)-OtBu；B）采用固相合成法，以2-CTC-树脂为起始树脂，按照奈西利肽主链1-29的肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸；C）在有机碱条件下，采用碘固环；D）裂解，得到全保护型奈西利肽主链1-29肽片段；E）三肽片段H-Arg(Boc)2-Arg(Boc)2-His(Trt)-OtBu和全保护型奈西利肽主链1-29肽片段偶联；F）裂解、纯化、冻干后得到奈西利肽。本发明专利技术提供了一种纯度高、成本低，适合规模化生产的奈西利肽制备工艺，此工艺不仅可以有效控制消旋肽杂质D-His32-奈西利肽、缺失肽杂质Des-Arg31-奈西利肽或Des-Arg30-奈西利肽，还优化固环条件提高了奈西利肽的收率。

【技术实现步骤摘要】
-种制备奈西利化的方法
本专利技术属于多肤药物制备方法
，特别涉及一种制备奈西利肤的方法。
技术介绍
奈西利肤，英名为；Nesiritide，结构式如下： H-Ser-Pro-Lys-Met-Val-Gln-Gly-Ser-Gly-Cys-Phe-Gly-Arg-Lys-Met-Asp-Arg-Ile -Ser-Ser-Ser-Ser-Gly-Leu-Gly-切s-Lys-Val-Leu-Arg-Arg-His-OH (二硫離键：10-26) 奈西利肤由Suhoh于1988年从猪脑组织中分离出来，是由32个氨基酸组成的环肤， 10-26位置通过S-S键相连，与内生荷尔蒙完全相同，主要用于急性失代偿性充血性也力衰 竭时呼吸困难的治疗，其效果较好且副作用小，是一种很有市场前景的多肤药物。 关于奈西利肤的制备方法，CN200410083873.X报道了也房肤的制造方法，由于 采用Boc法国相合成，需要采用毒性很大的HF作裂解，因此，不适合大规模生产。中国 专利CN200910104860. 9、CN200910104861. 3报道了 一种固相制备和纯化方法，一方面 采用HMPB-AM树脂为载体树脂，HMPB-AM树脂与第一保护氨基酸醋化的时候，有50%的 Fmoc-His(ht)-〇H将会发生消旋化，所W在产品中存在消旋异构体；另一方面由于采用低 浓度奈西利肤线性肤液环，导致产生大量废液，污染大，且生产效率不高，不适合大规模生 产。王梅和陈五岭在人脑利轴肤的Fmoc固相合成（《现代生物医学进展》，2008, 8 (2); 280-282。）中报道了采用楓固环侧链全保护的奈西利肤-CTC-树脂，虽然楓固环避免液环 产生大量废液，但是楓氧化的副产物楓化氨会导致肤从CTC-树脂上切下来，影响总收率。 此外，本品结构中含有一个Arg-Arg片段，在固相偶联时，由于精氨酸的侧链保护基团为大 分子的疏水性基团，因此导致精氨酸偶联不完全，生成缺失肤杂质Des-Arg3i-奈西利肤(或 Des-ArgW-奈西利肤)，由于消旋异构体D-His 32-奈西利肤和缺失肤Des-ArgSi-奈西利肤 (或Des-ArgW-奈西利肤)与奈西利肤的极性相近，在纯化过程中很难去掉，所W本产品常规 固相合成总收率很低，很难实现规模化生产。
技术实现思路
本专利技术为解决上述技术问题从而提供一种制备奈西利肤的方法，该方法一方面使 用片段偶联法，避免了缺失肤杂质Des-ArgSi-奈西利肤(或Des-Argw-奈西利肤)和消旋肤 杂质D-His32-奈西利肤的产生，另一方面优化固环条件提高生产收率，实现奈西利肤规模 化的大生产。 本专利技术的合成路线如图1所示；首先通过液相法合成H肤片段H-Arg炬oc)2-Arg( Boc)2-His(ht)-化Bu ;然后采用固相合成法，W 2-CTC-树脂为起始树脂，按照奈西利肤主 链1-29的肤序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸；C)在有机碱条件下，采 用楓固环；D)裂解，得到全保护型奈西利肤主链1-29肤片段；E) H肤片段H-Arg炬oc)2-Ar g炬oc)2-His(ht)-化Bu和全保护型奈西利肤主链1-29肤片段偶联；F)裂解、纯化、冻干后 得到奈西利肤。 本专利技术中一些常用的缩写具有W下含义； Fmoc :巧甲氧撰基 Fmoc-AA ;巧甲氧撰基保护的氨基酸 DIC :N，N'-二异丙基碳化二亚胺 PyBOP :六氣磯酸苯并H哇-1-基-氧基H化咯焼基磯 HATU ;2-(7-偶氮苯并H氮哇）-N，N，N'，N' -四甲基脈六氣磯酸醋 HOBt :1-轻基苯骄H哇 巧U :叔下基 Trt 苯甲基 Boc :叔下氧撰基 化f :2, 2, 4, 6, 7-五甲基二氨苯并巧喃-5-賴醜基 His :组氨酸 Arg :精氨酸 Leu :亮氨酸 Val :额氨酸 Lys :赖氨酸 Cys :半脫氨酸 Gly :甘氨酸 Ser :丝氨酸 lie :异亮氨酸 Asp :天冬氨酸 Met :甲硫氨酸 Phe :苯丙氨酸 Gin :谷氨醜胺 Pro :脯氨酸 DMF ;N，N'-二甲基甲醜胺 MeOH :甲醇 DCM :二氯甲焼 T阳：H氣己醇 NMP :N-甲基化咯焼丽 DMS0 :二甲基亚讽 TFA :H氣醋酸 化SMe :苯甲硫離 EDT :1，2-己二硫醇 Piperidine :六氨化巧 DMAP ;4-二甲氨基化巧 DIEA ;N，N'-二异丙基己胺 TMP ;2,4,6-H甲基化巧 为此本专利技术提供一种制备奈西利肤的方法，其步骤如下： 步骤1，通过液相法合成；肤片段护4'肖炬〇(3)2-4'肖炬〇(3)2-化3的1：)-0巧11; 步骤2,采用固相合成法，w 2-CTC-树脂为起始树脂，按照奈西利肤主链1-29的肤序依 次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸； 步骤3,在有机碱条件下，采用楓固环； 步骤4,裂解，得到全保护型奈西利肤主链1-29肤片段； 步骤5, H肤片段H-Arg炬oc)2-Arg炬〇(3)2-化3订的)-化邮和全保护型奈西利肤主链 1-29肤片段偶联； 步骤6,裂解、纯化、冻干后得到奈西利肤。 其中，步骤1所述的液相法合成方法，所述片段H-Arg炬OC) 2-Arg炬OC) 2-His(Trt)-0巧U的液相法合成步骤为；Fmoc-Arg炬oc)2-〇H、册Su和DCC偶联得到 Fmoc-Arg (Boc)厂OSu,然后 Fmoc-Arg (Boc) 2-〇Su 和 H-Arg (Boc) 2-0H 反应得到二肤片段 Fmoc-Arg (Boc) 2_Arg (Boc) 2-0H ;Fmoc-Arg (Boc) 2_Arg (Boc) 2-0H、册Su 和 DCC 偶联得到 Fmoc-Arg (Boc) 2_Arg (Boc) 2-〇Su,然后 Fmoc-Arg (Boc) 2_Arg (Boc) 2-〇Su 和 H_His (T;rt) -OtBu 反应得到H肤片段Fmoc-Arg (Boc) 2-Arg (Boc) 2-His (Trt) -0巧11，去Fmoc保护基后得到H肤 片段 H-Arg (Boc) 2_Arg (Boc) 2_His (T;rt) -OtBu。 其中，步骤2所述的固相合成方法包括如下步骤；（1) 2-CTC树脂和Fmoc-Leu-OH 在DIEA、TMP或NMM的条件下得到0. 10?0. 90 mmol/g取代度的Fmoc-Leu-CTC树脂；（2)采 用由体积比为1:4的脈巧和DMF组成的去保护液脱除Fmoc-Leu-CTC树脂上的Fmoc保护基， 得到H-Leu-CTC树脂；（3)在偶联剂系统的存在下，H-Leu-CTC树脂和Fmoc保护的额氨酸 偶联得到Fmoc-Val-Leu-CTC树脂；（4)重复步骤（2)、（3)，按照奈西利肤前主链1-27肤序 依次进行氨基酸的偶联。其中，步骤（3)所述所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述 缩合剂选自DIC/册Bt、PyB0P/册Bt/DIEA或HATU/册Bt/DIEA ;所述反应溶剂选自DMF、DC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备奈西利肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，通过液相法合成三肽片段H‑Arg(Boc)2‑Arg(Boc)2‑His(Trt)‑OtBu；步骤2，采用固相合成法，以2‑CTC‑树脂为起始树脂，按照奈西利肽主链1‑29的肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸；步骤3，在有机碱条件下，采用碘固环；步骤4，裂解，得到全保护型奈西利肽主链1‑29肽片段；步骤5，三肽片段H‑Arg(Boc)2‑Arg(Boc)2‑His(Trt)‑OtBu和全保护型奈西利肽主链1‑29肽片段偶联；步骤6，裂解、纯化、冻干后得到奈西利肽。

【技术特征摘要】
1. 一种制备奈西利肽的方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤1，通过液相法合成三肽片段!1-4找(13〇〇)2-4找(13〇〇)2-把8(1'1'1:)-(^1311 ; 步骤2,采用固相合成法，以2-CTC-树脂为起始树脂，按照奈西利肽主链1-29的肽序依 次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸； 步骤3,在有机碱条件下，采用碘固环； 步骤4,裂解，得到全保护型奈西利肽主链1-29肽片段； 步骤5,三肽片段H-Arg(Boc)2-Arg(Boc)2-His(Trt)-〇tBu和全保护型奈西利肽主链 1-29肽片段偶联； 步骤6,裂解、纯化、冻干后得到奈西利肽。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征是： 其中，步骤1所述的液相法合成方法，所述片段H-Arg(Boc)2-Arg(Boc)2-Hi s(Trt)-〇tBu的液相法合成步骤为：Fmoc-Arg(Boc)2-〇H、HOSu和DCC偶联得到 Fmoc-Arg (Boc) 2-〇Su，然后 Fmoc-Arg (Boc) 2-〇Su 和 H_Arg (Boc) 2-〇H 反应得到二肽片段 Fmoc-Arg (Boc) 2_Arg (Boc) 2-〇H ;Fmoc_Arg (Boc) 2_Arg (Boc) 2-〇H、HOSu 和 DCC 偶联得到 Fmoc-Arg (Boc) 2_Arg (Boc) 2-〇Su，然后 Fmoc-Arg (Boc) 2_Arg (Boc) 2-〇Su 和 H_His (Trt) -OtBu 反应得到三肽片段Fmoc-Arg (Boc) 2-Arg (Boc) 2-His (Trt) -OtBu，去Fmoc保护基后得到三肽 片段 H_Arg (Boc) 2_Arg (Boc) 2_His (Trt) -OtBu。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征是： 其中，步骤2所述的在的固相合成方法包括如下步骤：（1) 2-CTC树脂和Fmoc-Leu-OH 在DIEA、TMP或NMM的条件下得到0. 10~0. 90 mmol/g取代度的Fmoc-Leu-CTC树脂；（2)采 用由体积比为1:4的哌啶和D...

【专利技术属性】
技术研发人员：路杨，杨东晖，周亮，
申请(专利权)人：杭州阿德莱诺泰制药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33