本发明专利技术公开了一种具有双特异性抗体的细胞CTL(BiAT)及其制备方法与应用。具有双特异性抗体的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，是由CD3单抗与针对肿瘤相关抗原(TAAs)的任意抗体组合为双特异性抗体装备CTL细胞得到的，命名为CTL(BiAT)细胞。本发明专利技术联合利用多种肿瘤相关抗原表位肽刺激DC诱导产生靶向特异性CTL和肿瘤相关抗原抗体(一种或多种)的靶向结合，通过双重机理来确保CTL细胞的靶向作用，增加了CTL细胞作用的靶点数量，进一步提高了CTL细胞免疫效应的靶向性，能更高效地杀伤肿瘤细胞。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种具有双特异性抗体的细胞CTL(BiAT)及其制备方法与应用。具有双特异性抗体的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，是由CD3单抗与针对肿瘤相关抗原(TAAs)的任意抗体组合为双特异性抗体装备CTL细胞得到的，命名为CTL(BiAT)细胞。本专利技术联合利用多种肿瘤相关抗原表位肽刺激DC诱导产生靶向特异性CTL和肿瘤相关抗原抗体(一种或多种)的靶向结合，通过双重机理来确保CTL细胞的靶向作用，增加了CTL细胞作用的靶点数量，进一步提高了CTL细胞免疫效应的靶向性，能更高效地杀伤肿瘤细胞。【专利说明】一种具有双特异性抗体的细胞CTL(BiAT)及其制备方法与 应用
本专利技术属于生物
，涉及恶性肿瘤的靶向免疫细胞治疗药物，具体涉及一 种具有双特异性抗体的细胞CTL(BiAT)及其制备方法，以及其在制备增强特异性细胞毒性 T淋巴细胞（CTL)的免疫杀伤效应的药物中的应用。
技术介绍
免疫细胞治疗是当前恶性肿瘤免疫治疗的主流治疗方法，是通过采集肿瘤患者自 身外周血一定量的单个核细胞，在GMP实验室里经过体外培养，扩增并活化得到具有抗肿 瘤作用的免疫活性细胞，或用肿瘤抗原诱导进行靶向性处理，然后通过静脉、皮内注射、介 入等方式回输到患者体内杀灭肿瘤细胞，同时调节机体的免疫反应，增强抑制或杀灭肿瘤 细胞的免疫能力。 目前，临床常用的过继性肿瘤免疫细胞治疗技术，过继性免疫细胞治疗是指将体 外激活的自体或异体免疫效应细胞输注给患者，以杀伤患者体内的肿瘤细胞的治疗方法， 具体包括以下几种： CIK(cytokine-induced killer,多种细胞因子诱导的杀伤细胞），是将人外周血 单个核细胞在体外用多种细胞因子（如抗CD3单克隆抗体、IL-2和IFN-Y等）共同培养 诱导，而获得的一群⑶3+⑶56+为主的异质细胞，以及少量以⑶3+⑶8+为主的细胞毒性T 淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL)，因此CIK是含有至少上述细胞表型特征的细胞 群。由于该群细胞的主体同时表达CD3+和CD56+两种膜蛋白分子，故又被称为NK细胞样 T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤特点。 DC-CIK技术，是利用树突状细胞（Dendritic cells，DC)和CIK两种细胞联合协 同治疗肿瘤。用肿瘤细胞或肿瘤抗原致敏患者外周血提取分化培养的DC，并与前述所得的 CIK共培养，从而使DC提呈肿瘤抗原给CIK，增强CIK对肿瘤细胞的特异性识别和杀伤效 力，从而提1?治疗效果。 DC-CTL技术，是利用DC和抗肿瘤效应细胞（T淋巴细胞）两种细胞联合协同治疗 肿瘤。通过DC的抗原递呈，激活T淋巴细胞，生成机体抗肿瘤最重要的并赋予抗肿瘤特异 性的效应细胞一细胞毒性T淋巴细胞（CTL)。CTL识别递呈发生在肿瘤细胞表面并与Main histologic complex (MHC)-I类分子结合的抗原肽片段，通过分泌型杀伤（胞吐颗粒释放 效应分子如穿孔素、颗粒酶、淋巴毒素、TNF相关蛋白等引起靶细胞裂解或凋亡）或非分泌 型杀伤（表达FasL和TRAIL与靶细胞表面的相应受体分子结合，启动信号转导途径而诱导 凋亡）途径杀伤肿瘤细胞。DC-CTL技术的典型实施方法之一是用病毒技术进行基因转导。 Bi_CIK(双特异性抗体装备的CIK)技术，是以单抗结合免疫细胞治疗为基础靶向 引导CIK (cytokine-induced killer,多种细胞因子诱导的杀伤细胞）治疗肿瘤，选用两个 特异性抗体在体外进行化学交联成特异性双抗（bi-specific antibodies，BiAb)，同时对肿 瘤患者自体外周血单核细胞依次进行分离、培养、扩增成CIK，并与BiAb结合后回输患者体 内。其中的一个抗体结合细胞作为效应细胞一T细胞，而另一个抗体为肿瘤特异性抗原抗 体，结合携带特异性表面抗原的靶细胞一肿瘤细胞，从而靶向地将效应细胞（T细胞）和靶 细胞（肿瘤细胞）结合对肿瘤进行靶向杀伤，达到治疗恶性肿瘤的目的。 但是，以上临床常用的过继性肿瘤免疫细胞治疗技术存在以下技术问题及缺陷： CIK技术：非靶向性杀伤作用，杀瘤活性相对较低，即使大剂量使用CIK，也仅能达 到很有限的抗肿瘤疗效。 DC-CIK技术：肿瘤抗原的来源存在一定的困难，需要从患者肿瘤组织中提取；肿 瘤抗原免疫原性较弱，诱导的CIK细胞靶向性弱；CIK杀瘤活性相对较低。 DC-CTL技术：肿瘤抗原免疫原性较弱，诱导的CTL细胞靶向性弱，肿瘤特异性杀伤 效应较低；存在MHC限制性，MHC代表个体特异性的同种异型抗原称移植抗原或组织相容性 抗原，其中能引起强而迅速排斥反应的抗原称主要组织相容性抗原。一方面，MHC分子直接 参与抗原提呈细胞（APC)对内源性或外源性抗原的提呈；另一方面，在TCR特异性识别APC 所提呈的抗原肽过程中，必须同时识别与抗原肽结合成复合物的MHC分子，才能产生T细胞 激活信号，即MHC限制性。 Bi-CIK技术：单靶向性杀伤作用，CIK杀瘤活性相对较低。 综上所述，虽然肿瘤免疫细胞治疗技术发展迅速，但现有技术仍然存在着不同程 度的缺陷。CIK肿瘤杀伤效应低，靶向性不明显，DC的联合和DC-CTL技术能在一定程度 上呈递肿瘤相关抗原（tumor-associated antigens, TAAs)，不过多祀向特异性杀瘤作用 仍受到限制，而多靶点作用能针对性地解决肿瘤通过下调一些TAAs的表达降低其免疫原 性的免疫逃逸；CTL虽具有特异性和相对较高效的杀瘤效应，但存在MHC限制性，据报道 25%-75%的肿瘤细胞有不同形式的人白细胞抗原（HLA)表型改变，导致免疫识别障碍， 为肿瘤免疫逃逸的主要原因之一；此外，CTL的特异性杀伤效应虽然相对较高，但有限的靶 向性只能杀死小部分肿瘤细胞，这些缺陷都严重限制了以CTL为基础的肿瘤免疫治疗的疗 效。因此，增强针对肿瘤细胞的靶向杀伤效应、提高对肿瘤细胞的多靶点作用、克服肿瘤免 疫逃逸等已成为现有肿瘤免疫细胞治疗技术需改进的技术热点及难点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有双特异性抗体的细胞毒性T淋巴细胞 (cytotoxic T lymphocyte, CTL)及其制备方法，以及其在制备增强特异性细胞毒性T淋巴 细胞（CTL)的免疫杀伤效应的药物中的应用。 本专利技术所提供的具有双特异性抗体的细胞毒性T淋巴细胞（CTL)，是由CD3单抗与 针对肿瘤相关抗原（tumor-associated antigens, TAAs)的任意抗体组合为双特异性抗体 装备CTL细胞得到的，命名为CTL(BiAT)细胞。 所述⑶3单抗是一类抗人T淋巴细胞⑶3抗原的单克隆抗体，可作为一种免疫 调节剂对T细胞的多种功能产生调节作用，它与IL-2具协同作用，诱导T细胞扩增，增强 细胞毒活性，具体可为兔抗人CD3单抗、鼠抗人CD3单抗等，优选为鼠抗人CD3单克隆抗体 (0KT3)。 所述TAAs(tumor-associated antigens, TAAs，肿瘤相关抗原）本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有双特异性抗体的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，是由CD3单抗与针对肿瘤相关抗原(tumor‑associated antigens，TAAs)的任意抗体组合为双特异性抗体装备CTL细胞得到的，命名为CTL(BiAT)细胞。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：胡祥，孙平，刘沐芸，丁长才，张芸，
申请(专利权)人：深圳市北科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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