【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫细胞领域技术，尤其是指一种适用于cik细胞培养的无血清培养基及其培养方法。
技术介绍
1、cik细胞中文全称为“细胞因子诱导的杀伤细胞”；cik是单个核细胞在cd3单抗和多种细胞因子(包括ifng,il-2等)的作用下培养获得的一群cd3+cd56+细胞为主要效应细胞的异质细胞群，其既具有t淋巴细胞强大的抗肿瘤活性，又具有nk细胞(自然杀伤细胞)的非mhc(主要组织相容性抗原)限制性肿瘤杀伤能力。cik细胞具有杀瘤活性高、杀瘤谱广，对正常组织毒性低，体外可高度扩增等特点，是目前临床上广泛使用的过继性免疫治疗细胞，是机体对抗病原体和肿瘤细胞的第一道防线。但是，现有方法，诱导的cik细胞数量、纯度及活性均不能满足临床应用需求，其制备过程具有较大的改进空间，因此，本专利技术提供一种cik细胞的大规模培养方法，解决以上问题。
2、目前的cik细胞的培养基通常是在免疫细胞治疗培养基的基础上调节各营养物质而配成，不能针对性的提高cik细胞的扩增效果。在各类关于cik细胞的研究中表明，cik细胞培养离不开各类氨基酸及维生素，因此本专利技术选用了适合cik细胞生长的含丰富氨基酸alys505n-0/takara gt-t551的无血清培养基。同时添加了mem维生素溶液、l-谷氨酰胺、neaa(非必需氨基酸溶液)、nahco3、gp型消泡剂、葡萄糖、酚红、il-1、il-2、okt3、ifn-g给cik细胞提供营养及诱导因子，使培养基诱导cik细胞数量得到了有效的扩增；申请号为201510581416.1的专利技术涉
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术针对现有技术存在之缺失，其主要目的是提供一种适用于cik细胞培养的无血清培养基及其培养方法，其提供的适用于cik细胞培养的无血清培养基不含胎牛血清，降低了细胞感染疾病及污染概率；同时本申请提供的无血清培养基又对cik细胞的扩增起到了促进作用。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下之技术方案：
3、一种适用于cik细胞培养的无血清培养基，其包括alys505n-0/takara gt-t551无血清培养基、mem维生素溶液、l-谷氨酰胺、neaa、nahco3、gp型消泡剂、葡萄糖、酚红、il-1、il-2、okt3、ifn g和水。
4、作为一种优选方案：所述适用于cik细胞培养的无血清培养基包括体积分数为94.5％的alys505n-0/takara gt-t551无血清培养基，还包括以下组分及其浓度，体积分数为1％的mem维生素溶液、5mm的l-谷氨酰胺、体积分数为1％的neaa、1.5g/l的nahco3、体积分数为0.1％的gp型消泡剂、体积分数为2％的无菌50％葡萄糖母液、体积分数为0.5％的酚红溶液、体积分数为0.1％的水、250iu/ml的il-1、2300iu/ml的il-2、35g/l的okt3以及4mg/l的ifn-g。
5、作为一种优选方案：所述alys505n-0/takara gt-t551无血清培养基由alys505n-0和takara gt-t551培养基按照体积比为1:1混合而成。
6、一种适用于cik细胞培养的培养方法，其采用所述的适用于cik细胞培养的无血清培养基。
7、作为一种优选方案：所述适用于cik细胞培养的培养方法，包括如下步骤：取pbmc细胞，先用盐水洗涤，然后离心，上清留样，将细胞悬液接种于无血清培养基的培养瓶中，置于37℃、5％co2的co2培养箱中培养。
8、作为一种优选方案：所述pbmc细胞的种瓶数量为1-4*107个，并在培养第二天、第四天分别加入无血清培养基。
9、作为一种优选方案：所述cik细胞的培养时间为16天，在16天中计数，数量大于60亿进行收获细胞。
10、作为一种优选方案：所述收获细胞时，取出细胞，用生理盐水清洗细胞表面，检测细胞活率及细胞表型，剩余作冻存处理。
11、作为一种优选方案：所述于37℃、5％co2的co2培养箱中培养的第六天时，将细胞悬液进行转袋，每袋400ml，共2袋。
12、作为一种优选方案：所述细胞悬液进行转袋后，每间隔2天加入无血清培养基，每次每袋补加400ml。
13、本专利技术与现有技术相比具有明显的优点和有益效果，具体而言，由上述技术方案可知，本申请提供的适用于cik细胞培养的无血清培养基不含胎牛血清，降低了细胞感染疾病及污染概率；同时本申请提供的无血清培养基又对cik细胞的扩增起到了促进作用；本专利技术可实现大规模快培养cik细胞，同时能使细胞活率更高，表型更稳定。
14、为更清楚地阐述本专利技术的结构特征和功效，下面结合附图与具体实施例来对其进行详细说明。
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1.一种适用于CIK细胞培养的无血清培养基，其特征在于：包括ALyS505N-0/TAKARAGT-T551无血清培养基、MEM维生素溶液、L-谷氨酰胺、NEAA、NaHCO3、GP型消泡剂、葡萄糖、酚红、IL-1、IL-2、OKT3、IFN g和水。
2.根据权利要求1所述的适用于CIK细胞培养的无血清培养基，其特征在于：包括体积分数为94.5％的ALyS505N-0/TAKARA GT-T551无血清培养基，还包括以下组分及其浓度，体积分数为1％的MEM维生素溶液、5mM的L-谷氨酰胺、体积分数为1％的NEAA、1.5g/L的NaHCO3、体积分数为0.1％的GP型消泡剂、体积分数为2％的无菌50％葡萄糖母液、体积分数为0.5％的酚红溶液、体积分数为0.1％的水、250iu/mL的IL-1、2300iu/mL的IL-2、35g/L的OKT3以及4mg/L的IFN-g。
3.根据权利要求1所述的适用于CIK细胞培养的无血清培养基，其特征在于：所述ALyS505N-0/TAKARA GT-T551无血清培养基由ALyS505N-0和TAKARA GT-T5
4.一种适用于CIK细胞培养的培养方法，其特征在于：采用如权利要求1-3任意一项所述的适用于CIK细胞培养的无血清培养基。
5.根据权利要求4所述的适用于CIK细胞培养的培养方法，其特征在于：包括如下步骤：取PBMC细胞，先用盐水洗涤，然后离心，上清留样，将细胞悬液接种于无血清培养基的培养瓶中，置于37℃、5％CO2的CO2培养箱中培养。
6.根据权利要求5所述的适用于CIK细胞培养的培养方法，其特征在于：所述PBMC细胞的种瓶数量为1-4*107个，并在培养第二天、第四天分别加入无血清培养基。
7.根据权利要求5所述的适用于CIK细胞培养的培养方法，其特征在于：所述CIK细胞的培养时间为16天，在16天中计数，数量大于60亿进行收获细胞。
8.根据权利要求7所述的适用于CIK细胞培养的培养方法，其特征在于：所述收获细胞时，取出细胞，用生理盐水清洗细胞表面，检测细胞活率及细胞表型，剩余作冻存处理。
9.根据权利要求5所述的适用于CIK细胞培养的培养方法，其特征在于：所述于37℃、5％CO2的CO2培养箱中培养的第六天时，将细胞悬液进行转袋，每袋400mL，共2袋。
10.根据权利要求9所述的适用于CIK细胞培养的培养方法，其特征在于：所述细胞悬液进行转袋后，每间隔2天加入无血清培养基，每次每袋补加400mL。
...【技术特征摘要】
1.一种适用于cik细胞培养的无血清培养基，其特征在于：包括alys505n-0/takaragt-t551无血清培养基、mem维生素溶液、l-谷氨酰胺、neaa、nahco3、gp型消泡剂、葡萄糖、酚红、il-1、il-2、okt3、ifn g和水。
2.根据权利要求1所述的适用于cik细胞培养的无血清培养基，其特征在于：包括体积分数为94.5％的alys505n-0/takara gt-t551无血清培养基，还包括以下组分及其浓度，体积分数为1％的mem维生素溶液、5mm的l-谷氨酰胺、体积分数为1％的neaa、1.5g/l的nahco3、体积分数为0.1％的gp型消泡剂、体积分数为2％的无菌50％葡萄糖母液、体积分数为0.5％的酚红溶液、体积分数为0.1％的水、250iu/ml的il-1、2300iu/ml的il-2、35g/l的okt3以及4mg/l的ifn-g。
3.根据权利要求1所述的适用于cik细胞培养的无血清培养基，其特征在于：所述alys505n-0/takara gt-t551无血清培养基由alys505n-0和takara gt-t551培养基按照体积比为1:1混合而成。
4.一种适用于cik细胞培养的培养方法，其特征在于：采用如权利要求1-3任意...
【专利技术属性】
技术研发人员：王清芳，刘俊翔，蒋锦显，柯映佳，刘炳宏，钟桂强，邢岚，
申请(专利权)人：深圳市北科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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