抗原组在制备诊断疾病的试剂盒中的用途和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种疾病检测试剂盒，该试剂盒包括：人IgG、Tif1-γ抗原和NXP2抗原的载体、作为二抗的碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG、作为对照的抗Tif1-γ抗体阳性和抗NXP2抗体阳性的阳性对照品；人IgG、Tif1-γ抗原和NXP2抗原分别包被在所述载体的不同区域。本发明专利技术还提供了抗原组在制备诊断疾病的试剂盒中的用途，所述抗原组包括Tif1-γ抗原和NXP2抗原，所述疾病为皮肌炎合并肿瘤。本发明专利技术提供的疾病检测试剂盒，通过检测患者体内TIF1-γ抗体和抗NXP2抗体的存在，能够高特异性地诊断皮肌炎合并肿瘤，能够用于皮肌炎合并肿瘤的早期诊断，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
抗原组在制备诊断疾病的试剂盒中的用途和试剂盒
本专利技术涉及生物医药领域，具体地，涉及一种用于检测疾病的试剂盒和抗原组在制备诊断疾病的试剂盒中的用途。
技术介绍
特发性炎症性肌病(idiopathicinflammatorymyopathy，IIM)是一组以骨骼肌受累为主要表现形式的获得性的异质性疾病，主要包括多发性肌炎(polymyositis，PM)、皮肌炎(dermatomyositis，DM)和包涵体肌炎(inclusionbodymyositis，IBM)3种类型。临床实践中观察到IIM合并恶性肿瘤(cancer-associatedmyositis，CAM)的病例并不少见，既往国内外的研究显示IIM患者并发肿瘤的风险为6％-70％，其中，DM合并肿瘤的发生率明显高于PM。合并肿瘤的IIM治疗更困难，死亡率高，是影响患者预后的重要因素，早期发现肿瘤，积极治疗是改善患者预后的关键。目前，临床上用于肿瘤的筛查方法如肿瘤标记物、CT、MRI、PET-CT等，它们或是敏感性和特异性差，无法做到早期诊断，或是价格昂贵，不适合用作筛查的手段。因此，临床上至今尚无简便、实用、敏感而又特异的指标能够早期诊断和预测肿瘤的发生。因此，急需开发一种高度敏感及特异的能够用于诊断特发性炎性肌病(IIM)合并肿瘤的试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中没有能够预测及高效诊断特发性炎性肌病患者伴发恶性肿瘤的筛查手段的缺点，提供一种敏感及高特异性的能够用于诊断特发性炎性肌病(IIM)合并肿瘤的试剂盒。转录中介因子α/γ(transcriptionalintermediaryfactor1-α/γ，TIF1-α/γ)是近年来新发现的TIF1家族成员之一，它们是一种与肿瘤相关的自身抗原。TiF1-α可以通过其N端的RING结构域泛素化P53蛋白，降解该蛋白，从而使其在细胞中的表达水平降低。TIF1-γ抑制转化生长因子(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)信号传导通路上的重要蛋白Smad4，在多种实体瘤的发病中起重要作用。核基质蛋白2(anti-nuclearmatrixprotein2，NXP2)参与了活化肿瘤抑制基因p53的过程。本专利技术的专利技术人经过多年研究发现在肌炎患者体内可检测到抗TiF1-γ抗体，尤其多见于皮肌炎合并肿瘤患者，因此，通过检测肌炎患者体内TiF1-γ抗体的存在能够对皮肌炎(DM)合并肿瘤具有很好的诊断及预测价值；通过在此领域的持续研究，本专利技术的专利技术人进一步发现在部分肌炎患者体内还可以检测到核基质蛋白2(anti-nuclearmatrixprotein2，NXP2)，通过检测肌炎患者体内NXP2抗体的存在也能够对皮肌炎(DM)合并肿瘤具有很好的诊断及预测价值；专利技术人更惊喜的发现，当通过将检测肌炎患者体内TiF1-γ抗体的存在和检测肌炎患者体内NXP2抗体的存在联合起来的同时，在患者体内同时检测到Tif1-α抗体和TiF1-γ抗体时，经后续病理实验证实具有更高的阳性预测值，能够更好地对患皮肌炎(DM)合并肿瘤的患者进行早期诊断和预测。基于本专利技术专利技术人的上述发现，本专利技术提供了一种疾病检测试剂盒，该试剂盒包括：包被有人IgG、Tif1-γ抗原和NXP2抗原的载体、作为二抗的碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG、作为对照的抗Tif1-γ抗体阳性和抗NXP2抗体同时阳性的阳性对照品；人IgG、所述Tif1-γ抗原和所述NXP2抗原分别包被在所述载体的不同区域。本专利技术还提供了抗原组在制备诊断疾病的试剂盒中的用途，其中，所述抗原组包括Tif1-γ抗原和NXP2抗原，优选地包括Tif1-α抗原、Tif1-γ抗原和NXP2抗原；所述疾病为皮肌炎合并肿瘤。本专利技术提供的疾病检测试剂盒，通过将检测肌炎患者体内TiF1-γ抗体的存在和检测肌炎患者体内NXP2抗体的存在联合起来，经后续病理实验证实能够更好地对患皮肌炎(DM)合并肿瘤的患者进行早期诊断，具有广阔的应用前景。附图说明图1所示电泳图谱是含有3401bp目的Tif1-γ基因长度的DNA片段的典型电泳图谱。图2是洗脱下来的Tif1-γ-FLAG融合蛋白的典型的电泳图。图3是抗TIF1-γ抗体以及抗FLAG抗体鉴定Tif1-γ-FLAG融合蛋白的典型的蛋白杂交图。图4是含有2832bp目的NXP2基因长度的DNA片段的典型电泳图。图5为洗脱的NXP2-FLAG融合蛋白的典型电泳图。图6为抗NXP2抗体以及抗FLAG抗体鉴定NXP2-FLAG融合蛋白的典型的蛋白杂交图。图7为含有3068bp目的Tif1-α基因长度的DNA片段的典型电泳图。图8为洗脱的Tif1-α-FLAG融合蛋白的典型电泳图。图9为抗Tif1-α抗体以及抗FLAG抗体鉴定Tif1-α-FLAG融合蛋白的典型的蛋白杂交图。图10为检测实施例1的ROC曲线结果图。具体实施方式本专利技术提供了一种疾病检测试剂盒，其中，该试剂盒包括：包被有人IgG、Tif1-γ抗原和NXP2抗原的载体、作为二抗的碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG、作为对照的抗Tif1-γ抗原的抗体阳性血清和抗NXP2抗原的抗体阳性血清；人IgG、所述Tif1-γ抗原和所述NXP2抗原分别包被在所述载体的不同区域。根据本专利技术，所述Tif1-γ抗原的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。所述NXP2抗原的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。根据本专利技术，所述Tif1-γ抗原可以通过转基因表达的方式得到，通过转基因技术来表达目的基因蛋白的方法为本领域技术人员所公知，例如可以通过以下步骤进行表达和纯化：(一)取对数期K562细胞，经典Trizol法提取总RNA，再用Promega逆转录试剂盒逆转录为cDNA。(二)根据GeneID：51592所示的序列，用Primer5.0设计引物，上游引物加入酶切位点SgfI，下游引物加入酶切位点MluI，通过PCR扩增出Tif1-γ基因，反应条件为：模板98℃变性2min，再按以下参数反应共35个循环：94℃预变性2min、94℃变性45s、54℃退火30s、72℃延伸140s、34个循环；最后一个循环72℃、延伸5min，PCR反应产物用10g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定。通过PCR获得了含有3401bp目的基因长度的DNA片段。图1所示的电泳图谱是含有3401bp目的基因长度的DNA片段的典型电泳图谱。引物Tif1-γ-T1：5’-TAGCGATCGCCATGGCGGAAAACAAAGG-3’(SEQIDNO.4)Tif1-γ-T2：5’-CGCACGCGTCTTTATATGTACTGGTCTCTCAT-3’(SEQIDNO.5)(三)DNA凝胶回收试剂盒回收目的基因片段(四)建立SgfI和MluI双酶切体系，37℃下过夜酶切PCR产物和pCMV6-AC-IRES-GFP质粒(带FLAG标签)，带FLAG标签的氨基酸序列为SEQIDNO.1。用DNA凝胶回收试剂盒回收酶切后产物，以插入目的片段和质粒载体5∶1的比例于16℃下T4连接酶催化连接反应5小时。(五)采用Inoue方法制备Rosetta-gamiB大肠杆菌感受态细胞，将连接反应的产物转化Rosetta-gamiB大肠杆菌感受态，接种于A本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疾病检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：包被有人IgG、Tif1‑γ抗原和NXP2抗原的载体、作为二抗的碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG、作为对照的抗Tif1‑γ抗体阳性和抗NXP2抗体阳性的阳性对照品；人IgG、所述Tif1‑γ抗原和所述NXP2抗原分别包被在所述载体的不同区域。

【技术特征摘要】
1.抗原组在制备早期诊断疾病的试剂盒中的用途，其中，所述抗原组包括Tif1-α抗原、Tif1-γ抗原和NXP2抗原；所述疾病为皮肌炎合并肿瘤；所述Tif1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢昕，王国春，杨阚波，彭清林，舒晓明，
申请(专利权)人：中日友好医院，
类型：发明
国别省市：北京;11