辐抗肽蛋白的新用途制造技术

本发明专利技术公开了辐抗肽蛋白的新用途。本发明专利技术提供了辐抗肽蛋白在制备抑制肝损伤疾病产品中的应用；所述辐抗肽蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术辐抗肽蛋白抑制肝损伤，可以用来制备抑制肝损伤药物。

【技术实现步骤摘要】
辐抗肽蛋白的新用途
本专利技术涉及生物
，尤其涉及辐抗肽蛋白的新用途。
技术介绍
Toll 样受体（Toll-like receptor，TLR)是 Lemaitre 等人在 1996 年研究果妮过 程中发现，目前研究表明，在人体内发现了 11个TLRs家族成员，主要表达于免疫细胞等。 Toll-like receptors (TLRs)家族是一类在机体固有免疫和获得性免疫应答中发挥重要作 用的模式识别受体，它们通过特异性识别细菌、病毒等病原体相关分子模式活化NF- κ B信 号通路介导炎症反应、抗病毒反应和免疫效应细胞的分化成熟，并以此抵御病原微生物的 入侵。 研究显示，多种TLR受体在肝脏细胞中表达，并参与肝脏损伤保护过程，其中如 TLR3激活对酒精性肝损伤具有抑制作用；TLR4抑制对包括酒精性肝损伤在内的多种肝损 伤具有抑制作用。目前已经有多种TLR的配体被用来研发肝损伤保护药物，如TLR4拮抗剂、 TLR7和TLR9激动剂等在包括丙型肝炎等肝脏疾病治疗药物。 TLR5作为TLRs家族中一员，其唯一配体为细菌的鞭毛蛋白。近期研究表明，细菌 鞭毛蛋白或者其保留TLR5结合活性的衍生物（如辐抗肽）对γ射线照射后导致的辐射损 伤具有保护作用，其抗辐射作用机制是通过结合细胞表面TLR5,激活细胞内的NF-kB信号 通路，抑制辐射照射引起的细胞凋亡，进而达到降低辐射损伤的效果。作为TLR5唯一的配 体，鞭毛蛋白或其衍生物辐抗肽蛋白在肝损伤保护中的作用目前尚无人报道。 刀豆蛋白A(Con A)诱发的小鼠急性肝损伤是T淋巴细胞介导的肝损害模型之一， 很好地模拟了人类病毒性肝炎、自身免疫性肝病等疾病。 辐抗肽蛋白来源于沙门氏菌鞭毛蛋白，编码296个氨基酸，分子量约为31KD。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供辐抗肽蛋白新用途。 本专利技术提供的辐抗肽蛋白在制备治疗和/或抑制肝损伤疾病产品中的应用； 所述辐抗肽蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2。 上述应用中，所述抑制肝损伤疾病通过1)-5)中至少一种体现： 1)降低肝损伤动物的死亡率； 2)抑制肝损伤动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST表达量； 3)减轻肝损伤动物肝脏组织损伤； 4)抑制肝损伤动物肝实质细胞凋亡；上述抑制肝损伤动物肝实质细胞凋亡具体 体现在降低Casepase3、8、9活性； 5)抑制肝实质细胞中的粒细胞浸润；上述抑制肝实质细胞中的粒细胞浸润具体 体现在降低单核细胞、中性粒细胞的数量。 本专利技术的另一个目的是提供辐抗肽蛋白另一个用途。 本专利技术提供的辐抗肽蛋白在制备具有如下1)-5)中至少一种功能产品中的应用： 1)降低肝损伤动物的死亡率； 2)抑制肝损伤动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST表达量； 3)减轻肝损伤动物肝脏组织损伤； 4)抑制肝损伤动物肝实质细胞凋亡； 5)抑制肝实质细胞中的粒细胞浸润； 所述辐抗肽蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2。 上述应用中，所述肝损伤疾病为由刀豆蛋白A诱导产生的肝损伤疾病。 上述应用中，所述动物为人或鼠。 上述应用中，所述动物为小鼠。 上述应用中，所述产品为药物。 本专利技术第三个目的是提供一种具有如下1)_6)中至少一种功能产品。 本专利技术提供的产品，其活性成分为辐抗肽蛋白； 所述辐抗肽蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2 ; 1)降低肝损伤动物的死亡率； 2)抑制肝损伤动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST表达量； 3)减轻肝损伤动物肝脏组织损伤； 4)抑制肝损伤动物肝实质细胞凋亡； 5)抑制肝实质细胞中的粒细胞浸润； 6)治疗和/或抑制肝损伤疾病。 上述产品中，所述动物为人或鼠；所述鼠具体为小鼠；所述肝损伤疾病为由刀豆 蛋白A诱导产生的肝损伤疾病，并不限于ConA诱导产生的肝损伤。 上述产品为药物。 本专利技术的实验证明，本专利技术发现辐抗肽蛋白可以明显抑制人类病毒性肝炎、自身 免疫性肝病血清中谷丙转氨酶ALT和谷草转氨酶AST的水平，明显减轻肝组织的损伤程度， 明显抑制ConA引起的肝实质细胞的细胞凋亡水平，可以明显抑制肝实质的粒细胞浸润。 【附图说明】 图1为辐抗肽蛋白诱导表达产物SDS-PAGE鉴定 图2为辐抗肽预防给药降低ConA致小鼠死亡率 图3为辐抗肽给药后小鼠肝脏ALT和AST的变化 图4为辐抗肽不同剂量给药对ConA致肝损伤后ALT和AST的影响 图5为福抗肽不同时间给药对ConA致肝损伤后ALT和AST的影响 图6为辐抗肽给药后ConA引起的肝组织损伤影响 图7为辐抗肽给药对ConA引起的AST/ALT动态变化 图8为辐抗肽对ConA导致的肝实质细胞凋亡的影响 图9为辐抗肽抑制肝实质细胞中的粒细胞浸润 【具体实施方式】 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 实施例1、辐抗肽蛋白（FKT)的制备 人工合成辐抗肽蛋白（FKT)编码基因序列1，其编码的蛋白辐抗肽（FKT)的氨基酸 序列为序列表中序列2。 将序列1所示的FKT编码基因插入pBV220原核表达载体的Small和Sail位点间 得到重组载体，命名为PBV220-FKT。 将辐抗肽表达质粒PBV220-FKT转化到BL21大肠杆菌中建立表达工程菌，在30°C 条件下培养至菌体密度OD6tltl = 0. 6左右，升高温度到42°C诱导辐抗肽基因的表达，诱导表 达4小时后，离心收集菌体，经超声破碎，高速离心保留沉淀部分即为粗制包涵体。 用各种不同的缓冲液充分洗涤粗制包涵体后，将包涵体在含4M尿素的 20mMTris-HCl(pH 6.8)于4°C搅拌过夜，然后离心回收上清并用20mM Tris-HCl(pH6.8) 稀释至尿素终浓度为2M。随后将该溶液上样于用2M尿素20mM Tris-HCl(pH6.8)平衡 后的DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱，上样完毕后，分别用2M尿素20mM Tris-HCl (pH6. 8)和 20mM Tris-HCl (pH6. 8)平衡至基线平稳。以 0 ?20% IM NaCl (20mM Tris-HCl，pH6. 8)梯度洗脱60min，流速10ml/min，收集低盐洗脱组分。随后，将初纯化 所得目标峰洗脱液用注射用水稀释5倍（用IM Tris-HCI pH6. 8调节其电导与平衡液相 同）后上样于另一个用 20mM Tris-HCl (ρΗ6· 8)平衡的 DEAE-Sepharose Fast Flow 层析 柱，上样结束后用20mM Tris-HCl(pH6. 8)平衡至基线平稳，以0?10% IM NaCl/20mM Tris-HCl(pH6. 8)洗脱30min，流速为5ml/min,收集各洗脱峰，目的蛋白主要出现在低盐洗 脱组分，即为纯化产物FKT。 以SDS-PAGE电泳鉴定纯化产物，本文档来自技高网...

【技术保护点】
辐抗肽蛋白在制备治疗和/或抑制肝损伤疾病产品中的应用；所述辐抗肽蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2。

【技术特征摘要】
1. 福抗肤蛋白在制备治疗和/或抑制肝损伤疾病广品中的应用； 所述辐抗肽蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于： 所述抑制肝损伤疾病通过1)-5)中至少一种体现： 1) 降低肝损伤动物的死亡率； 2) 抑制肝损伤动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST表达量； 3) 减轻肝损伤动物肝脏组织损伤； 4) 抑制肝损伤动物肝实质细胞凋亡；体现在降低Cas印ase3、8、9活性； 5) 抑制肝实质细胞中的粒细胞浸润。体现在降低单核细胞、中性粒细胞的数量；所述 动物为小鼠。3. 辐抗肽蛋白在制备具有如下1)_5)中至少一种功能产品中的应用： 1) 降低肝损伤动物的死亡率； 2) 抑制肝损伤动物肝脏中谷丙转氨酶ALT和/或谷草转氨酶AST表达量； 3) 减轻肝损伤动物肝脏组织损伤； 4) 抑制肝损伤动物肝实质细胞凋亡； 5) 抑制肝实质细胞中的粒细胞浸润； 所述辐抗肽蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2。4. 根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓明，葛常辉，詹逸群，王磊，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11