一种测定化合物抗氧化性的方法技术

本发明专利技术公开了一种测定化合物抗氧化活性的方法及装置，所述方法以紫外线光解过氧化氢溶液产生·OH，以对羟基苯甲酸与·OH反应产生3，4-二羟基苯甲酸，通过检测生成的3，4-二羟基苯甲酸含量间接测定化合物清除·OH的能力。本发明专利技术的方法，操作方法简单、快速、准确，稳定性和重现性良好。本发明专利技术公开的一种测定化合物抗氧化活性的装置，包括反应容器和紫外光源，其中反应容器中包含反应溶液，所述反应溶液中包括对羟基苯甲酸、待测化合物和过氧化氢。可以用于执行本发明专利技术的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化学分析领域，尤其涉及。
技术介绍
近年来研究表明自由基是引起衰老和人类许多疾病的重要因素。例如癌症、多发性硬化症、帕金森疾病、自身免疫疾病、局部缺血、贫血症、老年痴呆病慢性肺炎等都与自由基有关。在生物体内，需氧代谢的氧化还原反应所产生的羟基自由基，可以引发不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，并损伤膜结构及功能。因此筛选出具有良好抗氧化活性的化合物是开发治疗此类疾病药物的关键。国内外对羟基自由基的测定均进行了大量的研究，现有的方法主要有三种:一是电子自旋共振法，但此方法必须在捕捉自由基后立即进行测定，从而限制了许多实验研究；二是Fenton法，Fenton试剂法及类Fenton试剂法目前尚属试验和探索阶段，虽然国内外的研究不少，但是在试验中产生羟基自由基的过程中，涉及到的温度，湿度，PH等环境因素的多重影响，试验稳定性差。三是电解氧化法，由于受到电极材料的限制，该法能耗大，操作繁琐，设备陈本高。高效液相色谱法可用于间接测定自由基。测定过程中必须先选择合适的化合物捕集被测体系中的自由基，使之生成具有一定稳定性，且能被液相色谱分离与检测的产物，然后用HPLC进行测定。有文献报道以二甲基亚砜、水杨酸捕集羟基自由基进行HPLC测定或用Fenton反应产生.0H后分光光度计法进行测定。但是这些方法中同样存在实验稳定性差的问题。因此，本领域的技术人员致力于开发一种操作简单方便，结果重现性好的测定化合物抗氧化性的方法。
技术实现思路
有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种测定化合物抗氧化活性的方法。本专利技术的目的在于提供一种简便易行的测定化合物抗氧化活性的方法。经过 申请人:系统而深入的研究，意外地发现利用紫外线光解过氧化氢溶液产生.0H，以对羟基苯甲酸(式I)作为捕捉剂，与.0H反应产生3，4-二羟基苯甲酸，通过HPLC检测生成的3，4_ 二羟基苯甲酸含量可以间接测定化合物清除.0H的能力。HO O COOHI本专利技术的第一方面提供了一种测定化合物抗氧化活性的方法，所述方法以紫外线光解过氧化氢溶液产生.0H，以对羟基苯甲酸与.0H反应产生3，4-二羟基苯甲酸，通过检测生成的3，4_ 二羟基苯甲酸含量可以间接测定化合物清除.0H的能力。进一步地，所述方法包括步骤:(I)制备反应体系配制对羟基苯甲酸和待测化合物的混合溶液，在所述混合溶液中加入过氧化氢得反应体系；(2)紫外线光解利用紫外线照射所述检测体系；⑶HPLC 检测紫外线光解完成后，HPLC检测反应体系中3，4_ 二羟基苯甲酸的生成量。进一步地，所述步骤(I)中，反应体系中过氧化氢体积终浓度为0.01% -1.50%,对轻基苯甲酸浓度为0.001mmol/L-l.000mmol/L。优选地,反应体系中过氧化氢体积终浓度为 0.05% -1.0对轻基苯甲酸浓度为 0.01mmoI/Τ,-Q.Smmol/I,进一步地，所述步骤⑵中，紫外线光解时间为0.5-1.0小时，紫外线功率为15W-75W。进一步地，所述步骤(3)中，HPLC检测波长为254nm。进一步地，所述步骤⑶中，HPLC检测条件为:色谱柱:C18柱((4.6X250mm，5um)；流动相:甲醇:0.1% H3PO4 = 30:70 ;流速:1.0ml/min ;柱温:35°C ;进样量:20ul。在本专利技术的第二方面，提供了一种对羟基苯甲酸的用途，所述用途为将对羟基苯甲酸用于检测样品中的.0H含量。在本专利技术的第三方面，提供了一种测定化合物抗氧化活性的装置，所述装置包括反应容器和紫外光源，其中反应容器中包含反应溶液，所述反应溶液中包括对羟基苯甲酸、待测化合物和过氧化氢。进一步地，所述装置还包括壳体，所述壳体提供容置所述反应容器和所述紫外光源的空间。进一步地，所述装置还包括盖体，所述盖体盖合于所述壳体上，形成密闭的反应空间。根据本专利技术第三方面的装置可以执行根据本专利技术第一方面的方法。技术效果本专利技术提供了一种通过HPLC检测，评价化合物间接清除羟基自由基能力的方法及装置。本专利技术利用紫外光解过氧化氢溶液产生羟基自由基，以对羟基苯甲酸作为捕捉剂，与羟基自由基反应产生3，4-二羟基苯甲酸，通过HPLC检测生成的3，4- 二羟基苯甲酸含量间接测定化合物清除羟基自由基的能力。采用本专利技术方法，操作方法简单、快速、准确，稳定性和重现性良好。【附图说明】图1是本专利技术实施例1中反应前的HPLC图谱；图2是本专利技术实施例1中反应后的HPLC图谱。图3是本专利技术的一个实施方式中的测定化合物抗氧化活性的装置。【具体实施方式】下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。如图3所示，本专利技术的一个测定化合物抗氧化活性的装置包括，紫外光源I和反应容器2。其中反应容器2用于容置反应溶液3，所述反应溶液3中包括对羟基苯甲酸、待测化合物和过氧化氢。所述装置还包括壳体4，所述壳体4提供容置所述反应容器2和所述紫外光源I的空间。所述装置还包括盖体5，所述盖体5盖合于所述壳体4上，形成密闭的反应空间。本实施方式中的测定化合物抗氧化活性的装置可以使用外接电源，也可以使用内置的充电电池。实施例1-9配制反应体系:取对羟基苯甲酸，加入蒸馏水中，然后加入H2O2，，紫外照射后进行HPLC分析测定生成3，4_ 二羟基苯甲酸的含量。各实施例的反应体系中各组分的终浓度如表1所示。结果见图2和图3，从图中可看出反应后生成3，4_ 二羟基苯甲酸。若以1.0ml蒸馏水代替H2O2，进行上述反应，则不生成3，4-二羟基苯甲酸。说明是通过紫外光解过氧化氢溶液产生.0H。HPLC检测波长为254nm ;检测条件为:色谱柱=C18柱((4.6 X 250mm，5um);流动相:甲醇:0.1% H3PO4 = 30:70 ;流速:1.0ml/min ;柱温:35°C ;进样量:20ul。捕捉率=反应后3，4_ 二羟基苯甲酸峰面积/反应前对羟基苯甲酸峰面积X 100%。捕捉率越高，说明反应体系的灵敏性越高。通过上述实施例证明，反应体系中各组分的含量在本专利技术的范围内，即，对羟基苯甲酸浓度处于0.0Olmmol/L-1.0OOmmol/L ;双氧水浓度处于0.01 %-1.50% (v/v);反应时间处于30min-60min的范围内，能够达到较优检测结果。表1实施例对羟基笨甲酸浓度双氣水浓度I反应时间I捕捉率本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定化合物抗氧化活性的方法，其特征在于，所述方法以紫外线光解过氧化氢溶液产生·OH，以对羟基苯甲酸与·OH反应产生3，4‑二羟基苯甲酸，通过检测生成的3，4‑二羟基苯甲酸含量间接测定化合物清除·OH的能力。

【技术特征摘要】
1.一种测定化合物抗氧化活性的方法，其特征在于，所述方法以紫外线光解过氧化氢溶液产生.0H，以对羟基苯甲酸与.0H反应产生3，4-二羟基苯甲酸，通过检测生成的3，4- 二羟基苯甲酸含量间接测定化合物清除.0H的能力。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括步骤: (1)制备反应体系 配制对羟基苯甲酸和待测化合物的混合溶液，在所述混合溶液中加入过氧化氢得反应体系； (2)紫外线光解 利用紫外线照射所述检测体系；(3)HPLC 检测 紫外线光解完成后，HPLC检测反应体系中3，4_ 二羟基苯甲酸的生成量。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜军，苟小军，何钢，郭晓强，梁立，
申请(专利权)人：成都大学，
类型：发明
国别省市：四川;51