一种蚕沙药材的检测方法技术

本发明专利技术属于中药材检测领域，具体涉及一种蚕沙药材的检测方法，该检测方法通过HPLC法测定1-脱氧野尻霉素的含量，进而对蚕沙药材进行检测。本发明专利技术的检测方法快速、全面、针对性强，有利于对该药材的质量进行有效控制，有助于提高该药材使用的安全性和稳定性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药材检测领域，具体涉及。
技术介绍
蚕沙又称晚蚕沙、蚕屎、马鸣肝、晚蚕矢、二蚕沙等，为蚕娥科昆虫家蚕的干燥粪便。干燥的蚕沙呈圆柱型小粒，微有青草气，色黑，坚实，均匀。临床上，蚕沙具有祛风除湿、活血定痛之功能，治疗除风湿痹痛、风疹瘙痒、头风头痛、皮肤不仁、关节不遂、急剧吐泻转筋、腰脚冷涌、烂弦风眼等症。研究表明，蚕沙中主要有效部位是总生物碱，其代表成分为1-脱氧野尻霉素，该生物碱是一种天然糖的结构类似物，具有很高的a-葡萄糖苷酶抑制活性，可用于治疗糖尿病、肥胖症、病毒感染等疾病。然而现有的蚕沙药材的检测方法通常采用茚三酮反应或TLC鉴别或对派可林酸进行检测，不仅检测的指标较为单一，而且不能检测其中的生物碱的含量，不利于从整体上对该药材或者含有该药材的药物的质量进行有效控制。因此，建立一种快速、全面、针对性强的蚕沙药材的质量检测及质量控制的方法具有重要的意义。
技术实现思路
为此，本专利技术所要解决的技术问题在于现有的蚕沙药材的检测方法检测的指标较为单一，不能检测其中的生物碱的含量，不利于从整体上对该药材或者含有该药材的药物的质量进行有效控制，从而提出一种快速、全面、针对性强的蚕沙药材的质量检测及质量控制的方法。为解决上述技术问题，本专利技术通过以下技术方案来实现:本专利技术的，该检测方法包括如下对1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤:精密称定1-脱氧野尻霉素对照品5-15mg,加水稀释制成每mL含0.1-0.5mg的对照品储备液；精密量取ImL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为1-3%的NaHCO3溶液l-4mL以及l-3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液l_4mL，混匀并于30_60°C进行水浴反应20-40min，随后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作为对照品溶液；取待测药材研细，并精密称取0.5-2.0g，加入用浓盐酸调pH值为3_4的水30-60mL，搅拌均匀，超声处理20-30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3_4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至10-20mL ;将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至近干，随后加水IOmL溶解，超声处理1-5分钟，并加水定容至20-30mL，得到供试品储备液；精密量取ImL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为1-3 %的NaHCO3溶液lmL、以及l_3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30°C进行水浴反应40min，随后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作为供试品溶液；照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2%的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱:0-8min，A:B为25%:75% ；8-40min, A:B 为 25%:75%— 50%:50% ；40-45min, A:B 为 50%:50% ;45_46min，A:B 为50%:50%^ 25%:75% ；46-75min, A:B 为 25%:75% ;控制流速 1.0mL/min，柱温 25°C，检测波长263nm，理论板数按1-脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000 ；精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定。本专利技术上述蚕沙药材的检测方法，所述对1-脱氧野尻霉素的含量进行测定的步骤包括:精密称定1-脱氧野尻霉素对照品10mg，加水稀释制成每mL含0.2mg的对照品储备液；精密量取ImL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为2%的NaHCO3溶液ImL以及2mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30°C进行水浴反应40min，随后以50%的乙腈定容至25mL，作为对照品溶液；取待测药材研细，并精密称取lg，加入用浓盐酸调pH值为3-4的水50mL，搅拌均匀，超声处理30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3_4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至20mL ;将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至近干，随后加水IOmL溶解，超声处理2分钟，并加水定容至25mL，得到供试品储备液；精密量取ImL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为2%的NaHCO3溶液lmL、以及lmg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30°C进行水浴反应40min，随后以50%的乙腈定容至25mL，作为供试品溶液；照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2%的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱:0-8min，A:B为25%:75% ；8-40min, A:B 为 25%:75%— 50%:50% ；40-45min, A:B 为 50%:50% ;45_46min，A:B 为50%:50%^ 25%:75% ；46-75min, A:B 为 25%:75% ;控制流速 1.0mL/min，柱温 25°C，检测波长263nm，理论板数按1-脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000 ；精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定。本专利技术上述蚕沙药材的检测方法，上述1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤中，上述阳离子交换树脂柱为DOOl-CC型阳离子交换树脂柱，树脂体积为50mL，径高比为1:8。本专利技术蚕沙药材的检测方法，还包括将上述阳离子交换树脂进行前处理的步骤，上述前处理具体包括如下步骤:用等体积的2M盐酸浸泡DOOl-CC型离子交换树脂4小时以上；再用4倍树脂体积的2M盐酸冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M NaOH溶液冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M盐酸溶液冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M NaOH溶液冲洗树脂，水洗至中性；用3倍树脂体积的2M盐酸溶液冲洗树脂，水洗至中性，即可。本专利技术上述蚕沙药材的检测方法，上述1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤中，上述超声处理的条件为:功率300W，频率50KHz。本专利技术上述蚕沙药材的检测方法，该方法还包括如下鉴别和/或含量测定的步骤中的至少一种:A、茚三酮反应取待测药材粉末0.1-0.3g，置具塞试管中，加热水3_7mL，加塞振摇并滤过；取滤液lmL，加茚三酮试液3~4滴，摇匀，放入沸水浴中加热，观察溶液颜色变化；B、TLC 鉴别取待测药材粗粉约0.5-1.5g，加无水乙醇5_15mL，加热回流半小时，放冷，滤过，滤液用少许活性炭脱色，滤过，滤液浓缩至约lmL，作为供试品溶液；另取β -谷甾醇对照品，加无水乙醇制成每ImL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18-19.8:0.2-2.0的三氯甲烷-丙酮为展开剂，展开，取出，晾干；喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C烘干15分钟，鉴别；C、HPLC法测定派可林酸的含量精密称定派可林酸对照品3-8mg，加水稀释定容至50mL ;精密量取0.5-2.0mL溶液，依次加水0.5-2.0mL、加质量浓度为0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液l_3mL以及0.5mol/L的碳酸氢钠溶液l_3mL，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蚕沙药材的检测方法，其特征在于，该检测方法包括如下对1‑脱氧野尻霉素的含量测定步骤：精密称定1‑脱氧野尻霉素对照品5‑15mg，加水稀释制成每mL含0.1‑0.5mg的对照品储备液；精密量取1mL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为1‑3％的NaHCO3溶液1‑4mL以及1‑3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液1‑4mL，混匀并于30‑60℃进行水浴反应20‑40min，随后以30‑60％的乙腈定容至20‑30mL，作为对照品溶液；取待测蚕沙药材研细，并精密称取0.5‑2.0g，加入用浓盐酸调pH值为3‑4的水30‑60mL，搅拌均匀，超声处理20‑30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3‑4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至10‑20mL；将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至近干，随后加水10mL溶解，超声处理1‑5分钟，并加水定容至20‑30mL，得到供试品储备液；精密量取1mL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为1‑3％的NaHCO3溶液1mL、以及1‑3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30℃进行水浴反应40min，随后以30‑60％的乙腈定容至20‑30mL，作为供试品溶液；照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2％的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0‑8min，A：B为25％：75％；8‑40min，A：B为25％：75％→50％：50％；40‑45min，A：B为50％：50％；45‑46min，A：B为50％：50％→25％：75％；46‑75min，A：B为25％：75％；控制流速1.0mL/min，柱温25℃，检测波长263nm，理论板数按1‑脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000；精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定。...

【技术特征摘要】
1.一种蚕沙药材的检测方法，其特征在于，该检测方法包括如下对1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤: 精密称定1-脱氧野尻霉素对照品5-15mg,加水稀释制成每mL含0.1-0.5mg的对照品储备液；精密量取ImL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为1-3%的NaHCO3溶液l-4mL以及l-3mg/mL的 芴甲氧羰酰氯乙腈溶液l_4mL，混匀并于30_60°C进行水浴反应20-40min，随后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作为对照品溶液； 取待测蚕沙药材研细，并精密称取0.5-2.0g，加入用浓盐酸调pH值为3-4的水30-60mL,搅拌均匀，超声处理20-30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3_4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至10-20mL ;将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至近干，随后加水IOmL溶解，超声处理1-5分钟，并加水定容至20-30mL，得到供试品储备液；精密量取ImL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为1-3 %的NaHCO3溶液lmL、以及l_3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30°C进行水浴反应40min，随后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作为供试品溶液； 照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2%的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱:0-8min，A:B为25%:75% ；8-40min,A:B 为 25 %:75 % — 50 %:50 % ；40-45min, A:B 为 50 %:50 % ;45_46min，A:B 为 50 %:50%- 25%:75% ；46-75min, A:B 为 25%:75% ;控制流速 1.0mL/min，柱温 25°C，检测波长263nm，理论板数按1-脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000 ； 精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定。2.根据权利要求1所述的蚕沙药材的检测方法，其特征在于，所述对1-脱氧野尻霉素的含量进行测定的步骤包括: 精密称定1-脱氧野尻霉素对照品IOmg,加水稀释制成每mL含0.2mg的对照品储备液；精密量取ImL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为2%的NaHCO3溶液ImL以及2mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30°C进行水浴反应40min，随后以50%的乙腈定容至25mL，作为对照品溶液； 取待测药材研细，并精密称取lg，加入用浓盐酸调PH值为3-4的水50mL，搅拌均匀，超声处理30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3_4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至20mL ;将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至近干，随后加水IOmL溶解，超声处理2分钟，并加水定容至25mL，得到供试品储备液；精密量取ImL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为2%的NaHCO3溶液lmL、以及lmg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30°C进行水浴反应40min，随后以50%的乙腈定容至25mL，作为供试品溶液； 照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2%的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱:0-8min，A:B为25%:75% ；8-40min,A:B 为 25 %:75 % — 50 %:50 % ；40-45min, A:B 为 50 %:50 % ;45_46min，A:B 为 50 %:50%- 25%:75% ；46-75min, A:B 为 25%:75% ;控制流速 1.0mL/min，柱温 25°C，检测波长263nm，理论板数按1-脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000 ； 精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20 μ L，注入液相色谱仪，测定。3.根据权利要求1或2所述的蚕沙药材的检测方法，其特征在于，所述1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤中，所述阳离子交换树脂柱为DOOl-CC型阳离子交换树脂柱，树脂体积为50mL,径高比为I:8o4.根据权利要求3所述的蚕沙药材的检测方法，其特征在于，还包括将所述阳离子交换树脂进行前处理的步骤，所述前处理具体包括如下步骤:用等体积的2Μ盐酸浸泡DOOl-CC型离子交换树脂4小时以上；再用4倍树脂体积的2Μ盐酸冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2MNa0H溶液冲洗树脂，水洗至中性；用5倍树脂体积的2M盐酸溶液冲洗树脂，水洗至中性；...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘杰，于娟，吴丽璇，陈啟兰，
申请(专利权)人：漳州片仔癀药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35