HER3抗体及其用途制造技术

本文提供的是对HER3特异的抗体。还提供的是治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本文所述的抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】HER3抗体及其用途优先权申请的交叉引用本申请要求2011年11月9日提交的美国临时申请No.61/557,672的优先权，其通过引用整体并入本文。关于联邦资助研究的声明本专利技术在来自美国国立卫生研究院的拨款No.RO1-CA112169下通过政府资助进行。美国政府具有本专利技术的某些权利。背景HER3，也称为ERBB3，是ErbB蛋白家族的成员。ErbB蛋白家族由四种密切相关的跨膜酪氨酸激酶受体：表皮生长因子受体(EGFR)(也称为HER1)、ERBB2(HER2)、ERBB3(HER3)和ERBB4(HER4)组成。每个受体包含胞外结构域、α-螺旋跨膜区段和细胞内酪氨酸激酶结构域。受体的二聚化对于受体功能是必不可少的需求。不同异二聚体可在ErbB受体蛋白家族之间形成，并且形成哪个异二聚体且结合哪个配体决定哪个信号传导途径被或活化。概述本文提供的是对HER3特异的抗体或其片段，其中抗体或片段阻断HER3的磷酸化(自体磷酸化和/或配体诱导的磷酸化)。本文提供的某些抗体或片段特异性结合HER3并且不阻断HER3配体结合，而其它抗体或片段特异性结合HER3但阻断配体结合。不阻断配体结合的本文所述的抗体或片段在本文被称为非配体依赖性抗体或片段，因为自体磷酸化被阻断。不阻断配体结合的本文所述的抗体或片段在本文被称为配体依赖性抗体或片段，因为配体诱导的磷酸化被阻断。本文还提供的是治疗受试者的增殖性病症(例如癌症)的方法。该方法包括向受试者施用有效量的本文所述的抗体或其片段。例如，该方法包括向所述受试者施用任选地与其它抗体或片段组合的非配体依赖性抗体或其片段和配体依赖性抗体或其片段的组合的方法。一个或多个实施方案的详情在附图及下面描述中列出。其它特征、目的和优点根据描述和附图以及根据权利要求将是明显的。附图描述图1示出1A5和3D4抗体与HER3的特异性结合。图1A和1B示出表明如通过ELISA测定确定的1A5(图1A)和3D4(图1B)的结合特异性的曲线图。ELISA板用1μg/ml重组可溶性EGFR、HER2、或HER3(胞外结构域)涂敷并且用指示浓度的1A5或3D4、之后用HRP-山羊抗-小鼠IgG孵育。呈现一式三份的平均OD值。egFR的值与HER2的值重叠。图1C和1D示出表明1A5(图1C)和3D4(图1D)的结合特异性的流式细胞术结果。EGFR、HER2或HER3-转染的SP2/0细胞用1μg/ml纯化抗体、用PE-山羊抗-小鼠IgG染色。图2示出1A5和3D4抗体对HER3的配体结合的效应。图2A示出表明如通过ELISA测定确定的1A5抗体不阻断HER3的配体结合、而3D4抗体阻断HER3的配体结合的曲线图。ELISA板用1μg/ml重组可溶性HER3涂敷，然后用100ng/ml生物素-缀合的重组NRG1在缺少或存在指示浓度的1A5和3D4抗体下孵育。通过HRP-链霉亲和素检测NRG1与HER3的结合(垂直轴)。图2B示出表明如通过流式细胞术确定的1A5抗体不阻断HER3的配体结合、而3D4抗体阻断HER2的配体结合的曲线图。HER3-转染的SP2/0细胞用100ng/ml生物素-缀合的NRG1在缺少或存在指示浓度的1A5或3D4抗体下孵育。通过PE-链霉亲和素检测NRG1结合。呈现所结合NRG1的平均荧光强度(MFI)。图3示出表明1A5和3D4抗体识别HER3上的不同表位的曲线图。ELISA板用2μg/ml纯化的1A5涂敷，然后用指示浓度的重组可溶性HER3在存在200ng/mlHRP-缀合的3D4下孵育。通过化学荧光底物检测3D4与HER3的结合。呈现一式三份的平均计数每秒。图4示出1A5抗体对HER3的非配体依赖性活化(自体磷酸化)的体外剂量依赖性抑制。人胃癌N87细胞(图4A)、乳腺癌BT474细胞(图4B)、乳腺癌ZR75-30细胞(图4C)和胰腺癌Panc2.03细胞(图4D)用指示浓度的1A5或3D4抗体处理24小时。在2mg/ml总细胞裂解液中通过ELISA确定HER3的酪氨酸磷酸化水平(pHER3，图4A-4D的左曲线图)。ELISA板用3F8抗-HER3抗体(识别与1A5和3D4不同的表位)涂敷以捕获总HER3(总HER3，图4A-4D的右曲线图)。通过HRP-缀合的4G10抗-酪氨酸磷酸化抗体检测酪氨酸-磷酸化的HER3。通过HRP-缀合的1E8抗-HER3抗体检测总HER3。然后通过化学荧光测量酪氨酸-磷酸化的HER3和总HER3水平。图5示出1A5对一小组的人癌症细胞的自体磷酸化的效应。癌细胞用20μg/ml的1A5抗体处理24小时。在2mg/ml总细胞裂解液中通过ELISA测定HER3的酪氨酸-磷酸化水平。ELISA板用3F8抗-HER3抗体(识别与1A5抗体不同的表位)涂敷以捕获总HER3。通过HRP-缀合的4G10抗-酪氨酸磷酸化抗体检测酪氨酸-磷酸化的HER3，并且通过化学荧光测量磷酸化水平。图6示出对HER3的配体依赖性活化的剂量依赖性抑制。人胃癌N87细胞(图6A)、乳腺癌BT474细胞(图6B)、乳腺癌ZR75-30细胞(图6C)和胰腺癌Panc2.03细胞(图6D)用指示浓度的1A5或3D4处理24小时，然后用100pg/ml重组NRG1处理1小时。在25μl的2mg/ml总细胞裂解液中通过ELISA确定HER3的酪氨酸磷酸化水平。ELISA板用3F8抗-HER3抗体(识别与1A5和3D4不同的表位)涂敷以捕获总HER3。通过HRP-缀合的4G10抗-酪氨酸磷酸化抗体检测酪氨酸-磷酸化的HER3，并且通过化学荧光测量磷酸化水平。图7示出通过用1A5和3D4抗体组合处理的HER3的完全失活。人胃癌N87细胞(图7A)、乳腺癌BT474细胞(图7B)、乳腺癌ZR75-30细胞(图7C)和胰腺癌Panc2.03细胞(图7D)用指示浓度的1A5或3D4或两种抗体处理24小时，然后这些细胞用100pg/ml重组NRG1处理1小时。在2mg/ml总细胞裂解液中通过ELISA确定HER3的酪氨酸磷酸化水平。ELISA板用3F8抗-HER3抗体(识别与1A5和3D4不同的表位)涂敷以捕获总HER3。通过HRP-缀合的4G10抗-酪氨酸磷酸化抗体检测酪氨酸-磷酸化的HER3，然后通过化学荧光测量磷酸化水平。图8示出在N87胃癌细胞中用1A5和3D4抗体对HER3活化的完全阻断使拉帕替尼的抗增殖效应敏感。人胃癌N87细胞用20μg/ml1A5或3D4或两种抗体在有或没有100nM拉帕替尼下处理24小时。在2mg/ml总细胞裂解液中通过化学荧光ELISA确定EGFR(图8A)、HER2(图8B)和HER3(图8C)的酪氨酸磷酸化水平。ELISA板用抗-EGFR(克隆：1E1，图8A)、抗-HER2(克隆：5G12，图8B)、或抗-HER3(克隆：3F8，图8C)涂敷。通过HRP-缀合的4G10抗-酪氨酸磷酸化抗体检测酪氨酸-磷酸化的EGFR、HER2和GER3，并且通过化学荧光测量磷酸化水平。细胞用EdU标记，并且通过流式细胞术检查EdU+增殖细胞(图8D)。图9示出在A549肺癌细胞中用1A5和3D4抗体对HER3活化的完全阻断使埃罗替尼的抗增殖效应敏感。人肺癌A本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对HER3特异的抗体，其中所述抗体不阻断配体结合并且其中所述抗体阻断HER3的磷酸化。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.11.09 US 61/557,6721.一种对HER3特异的抗体，其中所述抗体不阻断配体结合并且其中所述抗体阻断HER3的磷酸化，其中所述磷酸化不依赖于HER3的配体结合，其中所述抗体含有轻链和重链，所述轻链的多肽序列包含SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5，所述重链的多肽序列包含SEQIDNO:6、SEQIDNO:7和SEQIDNO:8。2.如权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·周，唐纳德·J·布奇斯鲍姆，沈恩允，陈宪，
申请(专利权)人：UAB研究基金会，北京同为时代生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US