绿盲蝽超气门蛋白特异性多克隆抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种绿盲蝽超气门蛋白(ultraspiracle protein，ALUSP)的多克隆抗体及其制备方法和应用。本发明专利技术将经原核表达纯化的ALUSP重组蛋白应用于免疫家兔后制备了多克隆抗体，通过利用ELISA法确定了该多克隆抗体的效价后，发明专利技术人采用Western blot法确定该多克隆抗体能特异性识别ALUSP重组蛋白，并可产生特异性免疫反应。基于此，发明专利技术人还建立了一套高效、高灵敏度和准确的Western blot方法，可特异性地从绿盲蝽虫体内检测出超气门蛋白。应用本发明专利技术，可为超气门蛋白在绿盲蝽体内的组织分布以及该蛋白的快速检测和分子生物学研究提供物质基础和技术支撑。

【技术实现步骤摘要】
绿盲蝽超气门蛋白特异性多克隆抗体及其制备方法和应用
本专利技术涉及抗体工程农业科学
，具体涉及绿盲蝽超气门蛋白特异性多克隆抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
绿盲蝽Apolygus lucorum(Hemiptera:Miridae)属半翅目盲蝽科，是棉花、蔬菜、果树、牧草等多种农作物上的重要害虫。近年来，由于转Bt基因棉的大面积种植和农业产业结构的调整等原因，绿盲蝽种群数量急剧上升，加之长期依赖化学农药防治，致使绿盲蝽的抗药性日渐增强，目前农业生产上的绿盲蝽防控面临严峻挑战，急待开拓减少化学农药使用的新型无公害防控手段。迄今，多种新型昆虫生长调节剂已应用到防治绿盲蝽的危害中，如氟铃脲等第三代杀虫剂，显示出较好的杀虫效果。但是，由于这些农药的特异性靶标表达量的差异，可显著影响其药效。超气门蛋白(ultraspiracle protein, USP)就是多种昆虫生长调节剂的靶标基因，也是绿盲蝽体内一种重要的核基因。绿盲蝽USP基因在不同龄期、不同组织中的蛋白表达量均不相同，导致昆虫生长调节剂施用后，对靶标基因超气门蛋白的抑制效果出现较大差异，从而可引起农药的使用效果下本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种绿盲蝽ALUSP多克隆抗体，其特征在于，将重组ALUSP蛋白免疫家兔后制得。

【技术特征摘要】
1.一种绿盲蝽ALUSP多克隆抗体，其特征在于，将重组ALUSP蛋白免疫家兔后制得。2.权利要求1所述的一种绿盲蝽ALUSP多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: a、抗原处理:取纯化后的重组ALUSP蛋白与等体积弗氏完全佐剂混匀乳化得到首次免疫抗原；弗氏不完全佐剂和重组ALUSP蛋白等体积混合得到第二、三和四次免疫抗原； b、动物免疫:采用皮下多点注射法免疫家兔，共免疫4次；首次免疫采用首次免疫抗原；间隔21天后第二次免疫采用第二次免疫抗原，耳静脉采血1ml，ELISA检测抗体效价；间隔35天后第三次免疫采用第三次免疫抗原，耳静脉采血1ml，ELISA检测抗体效价；间隔49天后第四次免疫采用第四次免疫抗原，末次免疫后第7天，耳静脉采血1ml，ELISA检测抗体效价；最后于第四次免疫后第8天，颈动脉采全血，分离血清，抗原亲和纯化法获得绿盲蝽ALUSP多克隆抗体。3.根据权利要求2所述的一种绿盲蝽ALUSP多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤b中的首次免疫抗原剂量为0.3mg/只，第二、三和四次免疫抗原剂量为0.15m...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭永安，肖留斌，柏立新，孙洋，赵静，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32