本发明专利技术是关于可用于特异性辨认感染性普立昂蛋白(PrPSc)的单株抗体，本发明专利技术的单株抗体特征在于不需要经过蛋白水解酶的反应，就能够直接特异性地辨认PrPSc蛋白，可提供用来建立一种高特异性及高灵敏度的普立昂疾病检测方法与套组。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术是关于可用于特异性辨认感染性普立昂蛋白(PrPSc)的单株抗体，本专利技术的单株抗体特征在于不需要经过蛋白水解酶的反应，就能够直接特异性地辨认PrPSc蛋白，可提供用来建立一种高特异性及高灵敏度的普立昂疾病检测方法与套组。【专利说明】
本专利技术关于可专一性辨认感染性普立昂蛋白质(scrapie prion protein, PrPsc)的单株抗体，特别地，是关于可与普立昂蛋白质C端以β褶版(Psheet)为主的片段结合的单株抗体，及其用于检测普立昂疾病的用途。
技术介绍
普立昂疾病(prion diseases)又称作传染性海绵体脑部病变(Transmissiblespongiform encephalopathies,以下简称TSE),病理特征是在脑部会出现海绵状空洞、神经元细胞死亡、星状细胞增生、组织染色出现淀粉斑块(amyloid plaque);临床特征通常在长时间的潜伏下会出现渐进式的行为、运动失调、痴呆等(Ludlam, C.A.，Lancet351:1289-1290，1998; Soto, C.，Nature reviews Microbiology2:809-819，2004)，虽与其他神经性退化疾病如阿兹海默(Alzheimer disease)、帕金森氏症(Parkinson disease)相似,但是独特的地方在于其具有传染性，会严重影响动物如羊骚痒症(Scrapie)、狂牛症(bovinespongiform encephalopathy,以下简称 BSE),以及人类如库贾氏症(Creutzfeldt-Jakobdisease, CJD)、Gerstmann-Straussler-Scheinker 氏症(GSS)、致死性家族失眠症(Fatalfamilial insomnia, FFI)等。人类的普立昂疾病的致病原因可分为遗传性:GSS、FF1、fCJD ；后天获得:Kuru、iCJD、vCJD ;未知:sCJD，动物则是因为有吃自己同类尸体的习惯，而有传染性紹脑病变(Transmissible mink encephalopathy),及因牛误食羊骚痒症(Scrapie)的羊制成的肉骨粉，而产生的狂牛症(BSE)。 在公元1986年，英国首次爆发从未出现过造成大量牛只死亡的疾病，即为后来所知的狂牛症(Wells, G.A.，et al., The Veterinary recordl21:419-420，1987),接着几年也开始在其他国家陆续出现案例，造成大规模流行。目前研究显示，BSE的爆发可能是因为在作为牛饲料添加的肉骨粉中，含有大量的羊搔痒症病原所致，这也暗示TSE似乎会跨越种别差异，而造成另一物种的疾病发生，人类的库贾氏病在1920年代初期被发现，为一种相当罕见的疾病，发生率约为每百万人口 0.5~I名病例。此病的病理症状与狂牛症类似。过去几年来各国已经确信BSE是严重的问题，目前在病原的鉴定上，主要的检体来源都是“死后”的脑部组织，仅可由严重感染的牛只脑部组织做成乳剂后，以人工接种感染小鼠来证实BSE的病原是可传播感染的；但这类接种感染的方式却最少须150几天的感染期才能证实有无感染成立。而现今WHO及OIE所承认的诊断方法，是以死后检查临床疫情、症状、显微病理变化、免疫组织化学染色技术及西方免疫墨点转溃法等，来作为普立昂疾病的诊断依据(Hardt, M., et al., Journal of comparative pathologyl22:43-53，2000;Ingrosso, L., et al., Trends in molecular medicine8, 273—280，2002)。以下将分别叙述现有常用的几个TSE检测方法:1.西方免疫墨点转溃法:原理是依据？冲&被蛋白酶K水解后会产生27~30kDa(PrPres)大小的讯号，将脑组织均质液与蛋白酶K反应后，接着利用单株抗体6H4(抗原决定位:DYEDRYYRE)侦测，此方法的好处是可以减少检测上的错误率，因为相对于用酵素免疫分析法(ELISA)全长PrPG部分没被水解掉进而干扰PrP27_30讯号的现象，此外也可以发现新的PrPse种(strain)。2.CEA/BioRad检测:是将脑组织先经过一连串去活性(denaturation)及浓缩步骤后，进行利用两种单株抗体三明治型的酵素免疫分析法。此方法较其他方法的侦测灵敏度高，可到0.5-2.0pmol，但是相对于其他方法，从纯化到浓缩脑组织液需要耗费相对多的时间及人力，也同样有会受到未完全被水解掉的PrPe片段干扰的困扰。3.结构依据(conformation dependent)免疫分析:是利用抗体对于原始及变性后的PrP有不同的键结能力，而建立的三明治酵素免疫分析法。抗体会辨认只在PrPse变性后才出现的结构依据抗原决定位(conformational epitope),特别是不用依赖蛋白水解酵素，故对于蛋白酶K敏感的PrPse株(strain)仍旧可以侦测的到，但缺点是相对于其他快速检测方式，其需要较多的处理步骤。上述方式都具有潜在性的问题，由于其侦测极限过高(目前具备最低侦测极限的检测方法是CEA/Biorad检测)，而使许多牛只可能处于PrPse潜伏阶段，还未出现任何临床症状，以致所获得的化学检测结果呈现伪阴性(false negative)。另外，类似的情况也会发生在人类，目前对于“活着”的CJD患者的症状出现前(pre-symptom)检测仍旧在发展中，所以同样的问题在于，如果vCJD患者在未知的状态下进行手术、捐赠器官、输血等医疗行为，而鉴于PrPse耐高温、不怕杀菌剂的特性，其一旦附着在手术器具上，便无法清除干净，接着就会发生传染造成医源性(iatrogenic) CJD案例的发生。另外，根据PrPse的特性,检体取得后通常需要经过蛋白水解酶的处理，但是这样的处理会使得原本存在少量的PrPse损失，逃过侦测极限而得到另外一种伪阴性的发生。总结上述，目前仍需要发展一种于临床症状发生前、活体状态下，采取的检体不需要经过蛋白水解酶的处理，而能够直接特异性地辨认PrPsc,并且提升侦测极限的检测方法。发展专一结合PrPse结构的抗体，是一直以来研究普立昂疾病的重点，而普立昂蛋白的特点在于，它并不像其他感染性物质如病毒、细菌能够引起强烈的免疫反应，在PrP蛋白正常表达的动物(Prnp+/+)于普立昂疾病发生的过程，因为正常B细胞、T细胞表面即有广泛分布的PrPe,而PrPse的初级结构可能与PrPe相似，使得B细胞有免疫耐受性而没有免疫反应(Bueler, H., et al., Cell73, 1339-1347, 1993;Kascsak, R.J., et al., Journalof virology61:3688, 1987;Prusinerj S.B.,et al., The Journal of infectiousdiseases167:602-613，1993) 0这几年来尝试不同策略，但仍旧无法发展出专一性高的辨认PrPse抗体，最早在1997年，Korth的团队利本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种特异性辨认感染性普立昂蛋白(PrPSc)的单株抗体，其特征在于与具有普立昂蛋白的胺基酸141‑182(SEQ ID NO.1)的肽片段结合。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈宜民，黄思惟，林盈妤，
申请(专利权)人：法玛科技顾问股份有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。