抗肿瘤抗体、蛋白质及其应用制造技术

本发明专利技术公开了与４０ｋＤａ蛋白质结合的抗体，该蛋白质在肿瘤上表达、但不在正常成人造血细胞上表达。还公开了这些抗体的生产方法和应用。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及与肿瘤细胞特异性结合的抗体和蛋白质，以及涉及与肿瘤细胞特异性结合的这些抗体的生产方法和应用。基于这些发现，本专利技术特别描述了单克隆抗体或其抗原结合片段，其中单克隆抗体(a)与胎儿胸腺细胞结合；(b)与该细胞结合时抑制细胞的增殖；并(c)不与成人胸腺细胞结合。这些单克隆抗体在与细胞结合时也可诱导同型聚集、诱导与其结合细胞的编程性细胞死亡、并可与E710.2.3，RMA-S，CTLL，LB17.4，A20，WEHI-231，PBK101A2，C2.3，B16，MC57，WOP-3027，293T，143Btk，Jurkat和Cos中的一种或多种肿瘤细胞系特异性结合。可以用例如可检测的标记物标记这些抗体。由杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-377产生的单克隆抗体DMF 10.62.3、由杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-405产生的单克隆抗体DMF 10.167.4、由杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-404产生的单克隆抗体DMF 10.34.36也在本本专利技术还描述了单克隆抗体，它们与杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-377、杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-405或杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-404产生的单克隆抗体结合的蛋白质相同的蛋白质结合。该单克隆抗体可以人源化。另一方面，本专利技术描述了单克隆抗体或其抗原结合片段，它与杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-377、杂交瘤细胞系PTA-404或杂交瘤细胞系PTA-405产生的单克隆抗体结合的40kDa蛋白质相结合。还有一方面，本专利技术描述了嵌合单克隆抗体或其抗原结合片段，它们与杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-377、杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-405或杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-404产生的单克隆抗体结合的相同的蛋白质结合，其中嵌合抗体包括非人可变区和轻链和重链的人的恒定区。还有一方面，本专利技术描述了单克隆抗体或其抗原结合片段，它们与杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-377、杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-405或杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-404产生的单克隆抗体结合的表位相同的表位结合。本专利技术还描述了单克隆抗体或其抗原结合片段，它们与具有下列特征的蛋白质特异性结合(i)分子量为40kDa；(ii)在胎儿胸腺细胞表面表达；(iii)在成人胸腺细胞表面无表达；(iv)与该抗体结合时能阻断细胞增殖；和(v)与抗体结合时能诱导同型聚集。该单克隆抗体与一种蛋白质特异性结合，该蛋白质的特征还在于(vi)与该抗体结合时能诱导细胞的编程性细胞死亡；和(vii)在包含E710.2.3，RMA-S，CTLL，LB17.4，A20，WEHI-231，PBK101A2，C2.3，B16，MC57，WOP-3027，293T，143Btk，Jurkat和Cos的一种或多种肿瘤细胞系的细胞表面表达。本专利技术还描述了本文所述的单克隆抗体的抗原结合片段。该抗原结合片段可以用例如可检测的标记物进行标记。本专利技术还描述了产生本文所述的单克隆抗体的杂交瘤细胞系。例如，本专利技术描述了杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-377、杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-405或杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-404。本专利技术还描述了一种实质上纯的蛋白质，其特征在于(i)分子量为40kDa；(ii)在胎儿胸腺细胞表面表达；(iii)在成人胸腺细胞表面无表达；(iv)能阻断本文所述抗体所结合的细胞增殖；和(v)能诱导本文所述与抗体结合时的同型聚集。该蛋白质还可具有以下特征(vi)在包含E710.2.3，RMA-S，CTLL，LB17.4，A20，WEHI-231，PBK101A2，C2.3，B16，MC57，WOP-3027，293T，143Btk，Jurkat和Cos的一种或多种肿瘤细胞系的细胞表面表达，和(vii)能诱导本文所述的抗体结合细胞的编程性细胞死亡。另一方面，本专利技术描述了与单克隆抗体结合的实质上纯的蛋白质，该单克隆抗体由杂交瘤细胞系ATCC No.PTA-377、杂交瘤细胞系PTA-405或杂交瘤细胞系PTA-404产生。本专利技术还描述了包含本文所述的单克隆抗体和药学上可接受的载体的一种药物组合物。本专利技术还描述了一种检测受检者体内肿瘤细胞的方法，该方法包括将受试者细胞样品与本文所述的一种或多种单克隆抗体结合，并且检测该抗体与样品的结合，其中结合表示受检者体内有肿瘤细胞存在。肿瘤细胞的例子包括胸腺淋巴瘤、T细胞瘤、B细胞淋巴瘤、黑素瘤、骨肉瘤和急性T细胞白血病。该肿瘤细胞也可存在于患者体内。可以对用于检测肿瘤的单克隆抗体进行标记。本专利技术还描述了一种抑制肿瘤细胞增殖的方法，该方法包括将该肿瘤细胞与其量足以抑制肿瘤细胞增殖的本文所述的单克隆抗体接触。在另一个实施方式中，本专利技术描述了一种诱导细胞的编程性细胞死亡的方法，该方法包括将该细胞与其量足以诱导细胞的编程性细胞死亡的本文所述的一种或多种单克隆抗体接触，该细胞可以是选自由胸腺淋巴瘤、T细胞瘤、B细胞淋巴瘤、黑素瘤、骨肉瘤和急性T细胞白血病的肿瘤细胞。该细胞可以是体外或体内的细胞。本专利技术也包括一种肿瘤诊断试剂盒，该试剂盒包含本文所述的一种或多种单克隆抗体及其使用说明。该试剂盒可以含有选自胸腺淋巴瘤、T细胞瘤、B细胞淋巴瘤、黑素瘤、骨肉瘤和急性T细胞白血病的肿瘤细胞。本专利技术还包括一种肿瘤细胞导向剂，它包含本文所述的一种或多种单克隆抗体，该抗体可与一种成分缀合以将该成分传递至肿瘤细胞。该成分的例子包括抗肿瘤剂、细胞毒素、细胞因子或信息组(reporter group)。本专利技术的另一个实施方式是选择性地将一种成分传送至哺乳动物肿瘤细胞的方法。该方法包括对哺乳动物给予本文所述的与一种成分连接的导向剂，和给予充分的时间以使导向剂到达肿瘤细胞、其中导向剂中的抗体与肿瘤细胞结合，由此选择性地将该成分传递至哺乳动物肿瘤细胞。该成分的例子包括抗肿瘤剂、细胞毒素、细胞因子和信息组。本专利技术还包括一种分离本文所述40kDa蛋白质的方法。该方法包括将含该蛋白质的样品与本文所述的单克隆抗体结合一定时间、并且该结合是在足以形成单克隆抗体/蛋白质复合物的条件下进行的，如果需要，则从该样品中取出一种或多种复合物，从该复合物中取出蛋白质，由此分离该蛋白质。“分离的核酸序列”是实质上没有与自然产生的生物体基因组中的核酸序列侧面相接基因的核酸序列。因此该术语包括掺入载体、掺入自主复制的质粒或病毒、或掺入原核生物或真核生物的基因组核酸序列的重组核酸序列。也包括单独的分子，例如cDNA、基因组片段、由聚合酶链反应(PCR)产生的片段或限制片段。与蛋白质“特异性结合”的抗体是一种与蛋白质结合的抗体，但不识别和结合样品(例如生物学样品)中的其它分子，所述样品自然包括蛋白质，如40kDa蛋白质。“保存性”氨基酸置换是指其中一种氨基酸残基被具有相似侧链的另一种氨基酸残基代替的替换。本领域中已经对具有相似侧链的氨基酸残基家族进行了规定。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天门冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单克隆抗体、或其抗原结合片段，其中该单克隆抗体：（ａ）与胎儿胸腺细胞结合；（ｂ）与该细胞结合抑制时细胞的增殖；并（ｃ）不与成年胸腺细胞结合。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：肯尼思L洛克，丹塞拉弗尔南德斯，
申请(专利权)人：马萨诸塞州大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]