在体内具有抗肿瘤活性的抗人TROP-2 抗体制造技术

本发明专利技术提供与hTROP-2特异性反应且在体内具有抗肿瘤活性的抗体、产生该抗体的杂交瘤、该抗体与药剂的复合物、肿瘤的诊断用或治疗用药物组合物、肿瘤的检测方法、肿瘤的检测用或诊断用试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有抗肿瘤活性的抗人TR0P-2抗体、特别涉及在体内具有抗肿瘤活性的抗人TR0P-2抗体。此外，本专利技术涉及产生该抗体的杂交瘤、及该抗体的用途。
技术介绍
人TROP-2 (Tacstd2，GA733-1，EGP-1)(以下也记作 hTROP-2。)为已知在各种上皮细胞癌肿中过度表达的、由323氨基酸残基(参照序列号2)构成的I次跨膜型的I型细胞膜蛋白。以前即已明确，存在与人滋养层细胞(tiOphoblasts)和癌细胞所表现的免疫抵抗有关的细胞膜蛋白(非专利文献1)，已经鉴定出一种被抗人绒毛膜癌细胞株BeWo的细胞膜蛋白的小鼠单克隆抗体(162-25.3、162-46.2)识别的抗原分子，为在人滋养层细胞(trophoblasts)中表达的分子之一，被命名为Trop-2 (非专利文献2)。此后，相同分子被其它研究者发现，将被免疫胃癌细胞SW948而得的小鼠单克隆抗体GA733识别的称为肿瘤抗原GA733-1 (非专 利文献3)、将被非小细胞肺癌的细胞免疫而获得的小鼠单克隆抗体RS7-3G11识别的称为上皮糖蛋白(epithelial/carcinoma antigen, EGP-1)(非专利文献4)，1995年克隆了 Trop-2的基因，确认了它们为同一分子(非专利文献5)。此外，阐明了其在癌细胞中具有放大细胞内钙信号的作用(非专利文献6)，也被称为肿瘤相关钙信号传导蛋白(tumor-associated calcium signal transducer) 2, TACSTD2。hTR0P-2基因定位在染色体1ρ32上，与具有约50%同源性的GA733-2 (还作为TACSTD1、上皮糖蛋白EGP-2、EpCAM及Trop-1而已知)一起构成TACSTD基因家族(非专利文献7)。hTR0P-2蛋白(323氨基酸残基；序列号2)具有约36kD的分子量，包含亲水性的信号肽(第I 26位的氨基酸)、细胞外结构域(第27 274位的氨基酸)、细胞跨膜结构域(第275 297位的氨基酸)以及细胞内结构域(第298 323位的氨基酸)。细胞外结构域中存在4个非均质N结合糖基化位点，添加糖链后，表观分子量增加11 13KD (非专利文献5)。TACSTD基因家族中，细胞外结构域具有特征性的甲状腺球蛋白(TY)重复序列，通常认为其与癌细胞的增殖、浸润、转移有关。截至目前，尚未鉴定出hTR0P-2的生理学上的配体，分子功能尚未阐明，但已经公开了其在肿瘤细胞中传递钙信号(非专利文献6)，此外，由于细胞内丝氨酸303号残基通过属于Ca2+依赖性蛋白激酶的蛋白激酶C而磷酸化(非专利文献4)以及细胞内结构域具有PIP2结合序列，表明其具有肿瘤细胞中的信号传递功能(非专利文献8)。通过免疫组化(IHC)及流式细胞术研究等体外诊断研究，已经报道了 hTR0P-2在胃癌、肺癌、大肠癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、胰癌、肝癌、食道癌等多种上皮源癌肿中过度表达。与此相对，显示出正常组织中的表达则仅限于上皮区域的细胞，表达水平也比癌肿中低，表明TR0P-2与肿瘤形成有关(专利文献I 3和9)。此外，在作为临床检体的生物学标志的hTR0P-2表达水平解析中，显示其与大肠癌(非专利文献10及11)、胰脏癌(非专利文献12)、口腔癌(非专利文献13)的恶性度有关，在hTR0P-2高表达时，癌的转移、复发频率显著高。此外，在使用cDNA微阵列技术的大规模基因表达分析中，已经鉴定出，其为与正常的卵巢上皮相比在卵巢的重度乳头状癌中最为高度过度表达的基因组之一(非专利文献14)。进而，近年通过使用大肠癌细胞的模型证明了 hTR0P-2在肿瘤形成中的重要作用(非专利文献15)。hTR0P-2的表达促进肿瘤细胞的锚着非依赖性细胞增殖，是移植到免疫缺陷小鼠皮下的癌细胞的肿瘤形成及增殖所必需的，表明其可能是功能性肿瘤抗原，可能成为新的治疗祀标。截至目前，已经报告了几种抗hTR0P-2抗体的抗肿瘤效果的研究结果。就RS7抗体(专利文献I)而言，使用经放射标记的抗体在体内模型中进行了试验，在裸小鼠异种移植模型中显示出抗肿瘤活性，但没有报告仅抗体(裸抗体)时的抗肿瘤效果。此外，报告了与细胞毒素结合的抗hTR0P-2单克隆抗体BRllO (专利文献2)对于人癌细胞株H3619、H2987、MCF-7、H3396及H2981的体外实验中的细胞毒性，但体内数据方面，对于裸抗体或免疫复合BRllO的体内数据则均未公开。近年还报道了:由通过用人卵巢癌组织免疫小鼠而得的杂交瘤细胞株AR47A6.4.2或AR52A301.5产生的分离单克隆抗体与hTR0P-2结合，初次以裸抗体形式显示体外的细胞毒性，并且在裸小鼠异种移植模型中显示抗肿瘤活性(专利文献3和4)。但是，这些文献中，在移植了胰脏癌细胞株BxPC-3及PL45、前列腺癌细胞PC-3、乳腺癌细胞MCF-7以及大肠癌细胞Colo205的小鼠异种移植模型中，虽然仅抗体时显示出抗肿瘤效果，但是除了在BxPC-3细胞移植中显示出治疗效果以外，均止步于通过抗体的预防性投与而部分地(约40 60%)抑制肿瘤形成及增殖，此外，所需抗体量也为20mg/kg左右，为非常高的用量。由以上的现有技术，虽然已经明确抗hTR0P-2抗体可能作为抗肿瘤抗体，但同时所有的抗hTR0P-2抗体均并非是以裸抗体形式以抗体单独在体内显示出抗肿瘤效果，表明对hTR0P-2的作用根据抗体的结合位点、亲和性、单克隆抗体谱而不同。专利文献1:美国专利第6653104号专利文献2:美国专利第5840854号专利文献3:美国专利第7420040号专利文献4:美国专利第7420041号非专利文献1:Faulk WP, et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.U S A, 75 (4)，p.1947-1951 (1978)非专利文献2:Lipinski M, et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.U S A, 78 (8)，p.5147-5150 (1981)非专利文献3:Linnenbach AJ, et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.U S A, 86 (1)，p.27-31 (1989)非专利文献4:Basu A, et al., Int.J.Cancer, 62 (4)，p.472-479 (1995)非专利文献5:Fornaro M, et al., Int.J.Cancer,62 (5), p.610-618 (1995)非专利文献6:Ripani E，et al., Int.J.Cancer, 76 (5)，p.671-676 (1998)非专利文献7:Calabrese G，et al.，Cell Genet.,92 (1-2), p.164-165 (2001)非专利文献8:E1 Sewedy Tet al., Int.J.Cancer, 75 (2)，p.324-330 (1998)非专利文献9:Cubas R, et al.，Biochim.Biophys.Acta., 1796 (2), p.309-314(2009)非专利文献10:0hmachi Tet al.，Cli本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：中村康司，冈村健太郎，田村真纪，柳内浩之，菅家彻，
申请(专利权)人：株式会社立富泰克，
类型：
国别省市：