抗PD-L1抗体及其用途制造技术

本申请涉及抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，编码其的核酸，其治疗性组合物，以及它们用于增强T细胞的功能以上调细胞介导的免疫应答和用于治疗T细胞功能失调性病症，例如肿瘤免疫，和用于治疗癌症的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗PD-L1抗体及其用途专利
本申请涉及抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，编码其的核酸，其治疗性组合物，以及它们用于增强T细胞的功能以上调细胞介导的免疫应答和用于治疗T细胞功能失调性病症，例如肿瘤免疫，和用于治疗癌症的用途。专利技术背景淋巴细胞发育和活化人中淋巴细胞的两种主要类型是T（胸腺衍生的）和B（骨髓衍生的）。这些细胞衍生自已致力于淋巴发育途径的骨髓和胎肝中的造血干细胞。这些干细胞的后代遵循不同的途径，以成熟为B或T淋巴细胞。人B-淋巴细胞发育完全在骨髓内发生。另一方面，T细胞从不成熟前体发育，所述前体离开骨髓并通过血流行进到胸腺，在那里它们增殖并分化为成熟的T淋巴细胞。从胸腺或骨髓出现的成熟的淋巴细胞是处于休眠，或“静息”状态，即，它们是有丝分裂失活的。当分散到血流中，这些“幼稚（naive）”或“处女（virgin）”淋巴细胞，行进到各个二级或外周淋巴器官，如脾脏、淋巴结或扁桃体。大多数处女淋巴细胞具有固有的短寿命并且在离开骨髓或胸腺后不出几天就死亡。然而，如果这样的细胞接收表明抗原存在的信号，它们可以活化并进行连续多轮的细胞分裂。一些产生的后代细胞，然后恢复到静息状态，成为记忆淋巴细胞-B和T细胞，它们基本上是与刺激过敏原的下一次相遇致敏的。活化的处女淋巴细胞的其它后代是效应细胞，其仅存活几天，但进行特异性的防御活动。淋巴细胞活化是指有序的系列事件，当静息淋巴细胞被刺激分裂和产生后代时（其中一些变成效应细胞）经过这一系列事件。一个完整的应答包括诱导细胞增殖（有丝分裂发生）及表达免疫功能。当特异性配体与在淋巴细胞表面上的受体结合时，淋巴细胞变成活化的。配体对于T细胞和B细胞是不同的，但产生的细胞内的生理机制是类似的。一些外源抗原本身可以诱导淋巴细胞活化，特别是大的聚合抗原，其交联B-细胞上的表面免疫球蛋白或T细胞上的其它糖蛋白。然而，大多数抗原是不聚合的，并且甚至直接大量结合B细胞，而无法导致活化。当用邻近的活化的辅助性T淋巴细胞共刺激B细胞时，这些更常见的抗原活化B细胞。这样的刺激可从由T-细胞分泌的淋巴因子发生，但最有效地通过B细胞与T细胞表面蛋白的直接接触来传递，所述T细胞表面蛋白与某些B细胞表面受体相互作用以生成次级信号。T细胞T淋巴细胞不表达免疫球蛋白，但是，改为以通过称为T细胞受体（TCR）的表面蛋白的方法检测外源物质的存在。这些受体通过直接接触或通过影响其它免疫细胞的活性来识别抗原。连同巨噬细胞，T细胞是参与细胞介导的免疫的主要细胞类型。与B细胞不同，T细胞只有在特定背景下才可以检测外源物质。具体而言，仅当外源蛋白第一次裂解成小肽，其然后展示在第二宿主细胞（称为抗原呈递细胞（APC））的表面上，T-淋巴细胞才会识别外源蛋白。许多类型的宿主细胞可以在一些条件下呈递抗原，但某些类型是更特异性地适合于这个目的并且在控制T细胞，包括巨噬细胞和其它B-细胞的活性中是特别重要的。抗原呈递部分地取决于在呈递细胞表面上的特定蛋白质，称为主要组织相容性复合体（MHC）蛋白。因此，为了刺激细胞介导的免疫，外源肽必须呈递给与MHC肽结合的T细胞，并且这种结合必须被T细胞受体识别。有两种显著的T细胞亚群：细胞毒性T淋巴细胞（Tc细胞或CTL）和辅助性T细胞（TH）细胞，其大致可以在标志物CD8和CD4的细胞表面表达的基础上被鉴定。Tc细胞在病毒防御中是重要的，并且可以直接通过识别某些细胞表面表达的病毒肽而杀死病毒。TH细胞促进增殖、成熟和其它细胞类型的免疫功能，例如淋巴因子分泌，来控制B细胞、巨噬细胞和细胞毒性T细胞的活性。处女和记忆性T淋巴细胞两者通常保持在静息状态，并且在这种状态下它们不表现出显著辅助性或细胞毒性活性。当被活化时，这些细胞经过几轮的有丝分裂以产生子细胞。这些子细胞的一些回到静息状态作为记忆细胞，但其它的变成效应细胞，其活跃地表现辅助性或细胞毒活性。这些子细胞类似于它们的亲本：CD4+细胞只可以产生CD4+后代，而CD8+细胞只获得CD8+后代。效应T细胞表达在静息T细胞上不表达的细胞表面标志物，例如CD25、CD28、CD29、CD40L，转铁蛋白受体和II类MHC蛋白。当活化刺激被撤回时，细胞毒性或辅助活性经过几天的时期逐渐消退，而效应细胞死亡或恢复到静息状态。类似于B细胞活化，T淋巴细胞对大多数抗原的应答还需要两种类型的同步刺激。第一个是抗原，其如果适当地由MHC蛋白在抗原呈递细胞上展示，则可以被T-细胞受体识别并结合。尽管此抗原-MHC复合体不发出信号到细胞内部，其通常不足以导致T细胞活化。充分活化，例如与辅助性T细胞发生，需要用称为共刺激分子的表达在抗原呈递细胞表面上的其它特异性配体来共刺激。另一方面，细胞毒性T细胞的活化通常需要IL-2，其是由活化的辅助性T细胞所分泌的细胞因子。PD-1途径调节T细胞活化的重要的负的共刺激信号是通过程序性死亡-1受体（PD-1）（CD279），和其配体结合配偶体PD-L1（B7-H1，CD274）和PD-L2（B7-DC，CD273）提供。PD-1的负调节作用通过PD-1敲除（Pdcdl-/-）揭示，所述PD-1敲除容易出现自身免疫。Nishimura等,ImmunityJJ.:141-51(1999)；Nishimura等,Science291:319-22(2001)。PD-1涉及CD28和CTLA-4，但缺乏允许同源二聚化的近膜半胱氨酸。PD-1的胞质结构域包含基于免疫受体酪氨酸（tyorine）的抑制基序（ITIM,V/IxYxxL/V）。PD-1只结合PD-L1和PD-L2。Freeman等,J.Exp.Med.192:1-9(2000)；Dong等,NatureMed.5:1365-1369(1999)；Latchman等,NatureImmunol2:261-268(2001)；Tseng等,J.Exp.Med.193:839-846(2001)。PD-1可以在T细胞、B细胞、自然杀伤T细胞、活化的单核细胞和树突状细胞（DC）上表达。PD-1由被活化的，但未被刺激的人CD4+和CD8+T细胞、B细胞和骨髓细胞表达。这与CD28和CTLA-4的更受限制的表达相反。Nishimura等,Int.Immunol.8:773-80(1996)；Boettler等,J.Virol.80:3532-40(2006)。有至少4种已从活化的人T细胞中克隆的PD-1的变体，包括缺乏（ⅰ）外显子2、（ⅱ）外显子3、（ⅲ）外显子2和3或（iv）外显子2至4的转录物。Nielsen等,Cell.Immunol.235:109-16(2005)。除了PD-lΔex3的例外，所有的变体都以如全长PD-1相似的水平表达在静息的外周血单核细胞（PBMC）中。所有变体的表达在用抗-CD3和抗-CD28活化人T细胞后被显著诱导。PD-1Δex3变体缺少跨膜结构域，并类似于可溶性CTLA-4，其在自身免疫中起重要作用。Ueda等,Nature423:506-11(2003)。这个变体富集在类风湿关节炎患者的关节滑液和血清中。Wan等,J.Immunol.177:8844-50(2006)。两个PD-1配体在它们的表达模式方面不同。PD-L1在小鼠T本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的重链可变区多肽，其包含HVR‑H1、HVR‑H2和HVR‑H3序列，其中：(a) 所述HVR‑H1序列是；(b) 所述HVR‑H2序列是；(c) 所述HVR‑H3 序列是；进一步其中：X1是K、R、T、Q、G、A、W、M、I或S； X2是V、R、K、L、M或I；X3是H、T、N、Q、A、V、Y、W、F或M；X4是F或I；X5是S或T；X6是E或D。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.11.28 US 61/563,9031.分离的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链可变区序列，其中：(a)所述重链包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3，其中进一步：(i)所述HVR-H1序列是SYIMM(SEQIDNO:15)；(ii)所述HVR-H2序列是SIYPSGGITFYADTVKG(SEQIDNO:16)；(iii)所述HVR-H3序列是IKLGTVTTVDY(SEQIDNO:17)；(b)所述轻链包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3，其中进一步：(iv)所述HVR-L1序列是TGTSSDVGGYNYVS(SEQIDNO:18)；(v)所述HVR-L2序列是DVSNRPS(SEQIDNO:19)；(vi)所述HVR-L3序列是SSYTSSSTRV(SEQIDNO:20)。2.权利要求1的抗体或其抗原结合片段，进一步包含：(a)在HVR之间并置的可变区重链构架序列HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3和HC-FR4，从而形成下式的序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，和(b)在HVR之间并置的可变区轻链构架序列LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3和LC-FR4，从而形成下式的序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。3.权利要求2的抗体或其抗原结合片段，其中所述构架序列衍生自人共有构架序列。4.权利要求2的抗体或其抗原结合片段，其中所述构架序列衍生自人种系构架序列。5.权利要求2的抗体或其抗原结合片段，其中一种或多种构架序列是下列：HC-FR1是；HC-FR2是；HC-FR3是；HC-FR4是。6.权利要求2的抗体或其抗原结合片段，其中一种或多种构架序列是下列：LC-FR1是；LC-FR2是；LC-FR3是；LC-FR4是。7.权利要求2的抗体或其抗原结合片段，其中：(a)所述可变区重链构架序列是下列：(i)HC-FR1是；(ii)HC-FR2是；(iii)HC-FR3是；(iv)HC-FR4是；和(b)所述可变区轻链构架序列是下列：(i)LC-FR1是；(ii)LC-FR2是；(iii)LC-FR3是；(iv)LC-FR4是。8.权利要求7的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含至少一个CH1结构域。9.权利要求7或8的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含CL结构域。10.权利要求7或8的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含CH1、CH2和CH3结构域。11.权利要求7的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含人或鼠恒定区。12.权利要求11的抗体或其抗原结合片段，其中所述恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。13.权利要求12的抗体或其抗原结合片段，其中所述恒定区是IgG1。14.分离的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区序列和轻链可变区序列，其中：(a)所述重链可变区序列是：，和(b)所述轻链可变区序列是：。15.权利要求14的抗体，其中所述抗体进一步包含CH1、CH2、CH3和CL结构域。16.权利要求1-7任一项的抗体，其中所述抗体结合人、小鼠或食蟹猴PD-L1。17.权利要求1-7任一项的抗体，其中所述抗体能够阻断人、小鼠或食蟹猴...

【专利技术属性】
技术研发人员：HG纳斯特里，C伊夫兰，O莱格，安琦，M卡特怀特，SD麦克肯纳，VD苏德，郝刚，
申请(专利权)人：默克专利股份公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE