【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于核酸电化学检测
，特别涉及一种。
技术介绍
核酸电化学检测技术是重要的检测手段，广泛运用于免疫诊断、病原微生物筛查及环境监控等领域。该方法以分子生物学技术为检测基础(常利用核酸扩增技术)、以电化学发光原理为支撑，旨在于构建高灵敏度、快速及可靠的检测方法。得益于电化学发光原理的优越性，该方法具有较宽的检测范围、高灵敏度、反应体系可控及高信噪比等特点。然而，核酸电化学检测技术以单个三联吡啶钌为发光基团。因此，建立一种多个三联吡啶钌发光基团，对于提高核酸电化学检测技术的灵敏度具有积极作用。目前，电化学发光信号的放大常采用纳米金放大技术，在单个胶体金表面标记多个三联吡啶钌发光基团，以达到提闻检测灵敏度的目的。但是，纳米金放大技术存在一些不足:(1)纳米金放大技术以巯基与金球表面形成硫-金键，反应过程复杂、耗时；(2)纳米金放大技术在探针制备时，纳米金表面常标记多个DNA探针，且不可控，导致单个纳米金球上标记上多个DNA探针，因此，不能达到理想的放大效果；(3)纳米金放大技术在标记过程，常发生纳米金聚集，标记过程不稳定且与纳米金合成的质量好...
【技术保护点】
一种基于聚合物电化学发光信号放大的核酸检测方法，其特征在于包括以下具体步骤：（1）三联吡啶钌的合成：①称取：二氯双(2,2'‑联吡啶)钌0.05g，NaHCO30.05g，4‑羧酸‑2,2'‑联吡啶0.0375g；②加入10mL体积分数80%甲醇水溶液，混合液在硅油浴下回流；③所得溶液在冰浴中冷却2h；④用1mol/L的H2SO4将pH值调到4.4，形成沉淀；⑤形成的沉淀进行过滤，收集滤液；⑥向⑤中所得滤液中加入3.125mL NaPF6溶液，搅拌后置于4℃环境中挥发滤液，观察晶体产生；收集所得结晶即为二（2,2'‑联吡啶）（4‑羧酸‑2,2'‑联吡啶）钌的二（六氟磷酸盐）...
【技术特征摘要】
1.一种基于聚合物电化学发光信号放大的核酸检测方法，其特征在于包括以下具体步骤: (1)三联吡啶钌的合成: ①称取:二氯双(2，2’-联吡啶)钌0.05g, NaHCO30.05g, 4-羧酸-2，2’ -联吡啶.0.0375g ； ②加入IOmL体积分数80%甲醇水溶液，混合液在硅油浴下回流； ③所得溶液在冰浴中冷却2h； ④用lmol/L的H2SO4将pH值调到4.4，形成沉淀； ⑤形成的沉淀进行过滤，收集滤液； ⑥向⑤中所得滤液中加入3.125mL NaPF6溶液，搅拌后置于4°C环境中挥发滤液，观察晶体产生；收集所得结晶即为二(2，2’ -联吡啶)(4-羧酸-2，2’ -联吡啶)钌的二(六氟磷酸盐)； (2)三联吡啶钌的活化: ①称取:二环己基碳二亚胺1.1635g, N-羟基琥拍酰亚胺0.5947g ； ②搅拌条件下溶解于7.7568mL 二甲基甲酰胺中，然后冰浴冷却Ih ； ③加入0.1616g步骤(1)合成的二(2，2’ -联吡啶)(4-羧酸-2，2’ -联吡啶)钌的二(六氟磷酸盐)，混合物冰浴搅拌混匀； ④室温下密封振荡； ⑤通过吸滤装置除去所得沉淀，滤液中含有活性的钌配合物，即活化三联吡啶钌； (3)聚赖氨酸-三联吡啶钌复合物的制备: ①取一管聚赖氨酸固体粉末离心； ②打开管盖，并加入75μ L0.1M硼酸钠,调整pH值至8.5,盖上管盖； ③充分上下振荡5min,离心收集； ④加入30μ L的步骤(2)⑤中所得到的活化三联吡啶钌； ⑤室温避光孵育12h； ⑥用超滤管分离除去体系中的小分子化合物； ⑦离心，倒去滤液，加入0.5mL预冷无水乙醇，放入超低温冰箱中lh，用超滤管分离除去体系中的小分子化合物； ⑧离心，倒去滤液，加入ImL预冷体积分数80%乙醇水溶液，放入超低温冰箱中Ih,用超滤管分离除去体系中的小分子化合物； ⑨离心，倒去滤液，加入ImL预冷体积分数80%乙醇水溶液，放入超低温冰箱中Ih,用超滤管分离除去体系中的小分子化合物； ⑩离心，将所得沉淀，加100μ L水稀释，得到聚赖氨酸-三联吡啶钌复合物，放入-20°C保存； (4)DNA探针标记聚赖氨酸-三联吡啶钌复合物: 该反应体系中，将聚赖氨酸-三联吡啶钌复合物、DNA探针及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚 胺混匀，调整pH值至6 ;避光孵育；最后，用超滤管离心除去小分子化合物；得到DNA探针标记的聚赖氨酸-三联吡啶钌复合物，并用纯水保存在_20°C ； (5 )磁捕捉检测目标DNA序列:以传统的磁捕捉及“sandwich”模型为基础，构建了一种以聚赖氨酸-三联吡啶钌为信...
【专利技术属性】
技术研发人员：邢达，周小明，廖玉辉，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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