一种人CCCH型锌指蛋白表达基因的用途及其相关药物制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及人CCCH型锌指蛋白表达基因的用途及其相关药物。本发明专利技术公开了人CCCH型锌指蛋白表达基因在肿瘤治疗、肿瘤诊断及药物制备中的用途，并且进一步构建了针对人CCCH型锌指蛋白表达基因的小分子干扰RNA、基因干扰核酸构建体、基因干扰慢病毒，公开了他们的用途。本发明专利技术提供的siRNA或者包含该siRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人CCCH型锌指蛋白的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中CCCH型锌指蛋白的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种人CCCH型锌指蛋白表达基因的用途及其相关药物
本专利技术涉及生物
，具体地涉及人CCCH型锌指蛋白表达基因的用途及其相关药物。
技术介绍
RNA干扰（RNAinterference,RNAi）即用核苷酸组成的短的双链RNA(dsRNA)进行转录后基因沉默。它可高效、特异地阻断体内特定基因的表达，导致其降解，从而引起生物体内特异基因的沉默，使细胞表现出某种基因表型的缺失，是近年来新兴的一种常用的研究基因功能、寻找疾病治疗方法的实验室技术。研究表明，长度为21-23nt的双链RNA能够在转录和转录后水平特异性的引起RNAi（TuschlT,ZamorePD,SharpPA,BartelDP.RNAi:double-strandedRNAdirectstheATP-dependentcleavageofmRNAat21to23nucleotideintervals.Cell2000；101:25-33.）。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综合治疗，但五年生存率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的治疗开辟新途径。近年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可以抑制原癌基因、突变的抑癌基因、细胞周期相关基因、抗凋亡相关基因等的表达来抑制肿瘤进程（Uprichard,SusanL.ThetherapeuticpotentialofRNAinterference.FEBSLetters2005；579:5996-6007.）。锌指蛋白是一类生物体中广泛存在的具有典型锌指结构特征的超蛋白家族，几乎参与了生物体生长发育的各个阶段。研究发现人类基因的1%属于锌指蛋白基因家族。锌指蛋白能够通过靶定在基因启动子区域而调节基因的表达，在组织细胞的生长、增殖和分化中均起重要作用，其异常表达可能导致许多疾病包括恶性肿瘤的发生（YajimaI,KumasakaM,ThangND,YanagishitaT,OhgamiN,KallenbergD,NaitoY,YoshikawaT,SakashitaN,KatoM.Zincfingerprotein28asanovelmelanoma-relatedmolecule.JDermatolSci.2009；55:68-70.OyanagiH,TakenakaK,IshikawaS,KawanoY,AdachiY,UedaK,WadaH,TanakaF.ExpressionofLUNgenethatencodesanovelRINGfingerproteiniscorrelatedwithdevelopmentandprogressionofnon-smallcelllungcancer.LungCancer.2004；46:21-28.）。根据锌指蛋白的结构及功能特点，锌指蛋白主要分为9大类，其中CCCH型锌指蛋白相比其他几类来说较少，约占所有锌指蛋白的0.8%，在植物，动物，微生物中都有发现（BrownRS.Zincfingerproteins:gettingagriponRNA.CurrOpinStructBiol.2005；15:94–98.HallTM.MultiplemodesofRNArecognitionbyzincfingerproteins.CurrOpinStructBiol.2005；15:367–373.）。CCCH型锌指蛋白包含一个或多个由3个半胱氨酸和一个组氨酸组成的能与锌离子结合的基序。到目前已发现，CCCH型锌指蛋白在生物与非生物胁迫、生长发育、疾病中都发挥着不同的功能。ZC3H15基因位于染色体的2q32.1位置，编码一种CCCH型锌指蛋白。有文献提到ZC3H15可能参与了细胞因子介导的信号转导通路，但其功能尚不明确，而且ZC3H15在肿瘤相关领域的报道也是一片空白，因此有深入研究该基因的功能。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开与人CCCH型锌指蛋白表达基因相关的治疗方法及药物，以RNA干扰（RNAi）为手段研究CCCH型锌指蛋白表达基因在肿瘤细胞的存活和凋亡过程中的作用。本专利技术所述CCCH型锌指蛋白表达基因为ZC3H15(zincfingerCCCH-typecontaining15)基因。本专利技术第一方面，以RNA干扰为手段，研究了ZC3H15基因在肿瘤发生和发展中的作用，公开了一种抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法，该方法包括：向肿瘤细胞施用一种能够特异性抑制ZC3H15基因的转录或翻译，或能够特异性抑制ZC3H15蛋白的表达或活性的分子，以此来抑制肿瘤细胞的生长、增殖、分化和/或存活。所述肿瘤细胞选自其生长与ZC3H15蛋白的表达或活性相关的肿瘤细胞。较优的，所述肿瘤细胞选自胃癌、肺癌和胶质瘤之任一。所述抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用量为足够降低ZC3H15基因的转录或翻译，或者足够降低ZC3H15蛋白的表达或活性的剂量。进一步的，所述ZC3H15基因的表达至少被降低50%、80%、90%、95%或99%。所述分子可选自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白或干扰慢病毒。所述核酸包括但不限于：反义寡核苷酸、双链RNA（dsRNA）、核酶、核糖核酸内切酶III制备的小干扰RNA（esiRNA）或者短发夹RNA（shRNA）。所述双链RNA、核酶、esiRNA或者shRNA含有ZC3H15基因的启动子序列或ZC3H15基因的信息序列。进一步的，所述双链RNA为小干扰RNA（siRNA）。所述小干扰RNA包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与ZC3H15基因中15-27个连续的核苷酸序列基本相同。所述小分子干扰RNA能特异性结合靶序列所编码的mRNA片段，并特异性沉默人ZC3H15基因的表达。进一步的，所述小干扰RNA的第一链序列与ZC3H15基因中的靶序列基本相同。较优的，所述ZC3H15基因中的靶序列含有SEQIDNO:1-32中之任一序列。所述ZC3H15基因中的靶序列即为所述小分子干扰RNA特异性沉默ZC3H15基因表达时，与所述的小分子干扰RNA互补结合的mRNA片段所对应的ZC3H15基因中的片段。较佳的，所述ZC3H15基因来源于人。本专利技术第一方面还公开了一种分离的人ZC3H15基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。进一步的，所述肿瘤选自胃癌、肺癌或胶质瘤。所述将分离的ZC3H15基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物包括两方面的内容：其一，将ZC3H15基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制剂；其二，将ZC3H15基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂。所述将ZC3H15基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制剂具体是指：将ZC3H15基因作为RNA干扰作用的靶标，来研制针对肿瘤细胞的药物或制剂，从而能降低肿瘤细胞内ZC3H15基因的表达水平。所述将ZC3H15基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂具体是指：将ZC3H15本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人ZC3H15基因在制备或筛选肿瘤治疗药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.一种人ZC3H15基因抑制剂在制备肿瘤治疗药物中的用途，所述肿瘤选自胃癌、肺癌或胶质瘤，所述ZC3H15基因的作用靶标如SEQIDNO:6所示。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述抑制剂为降低肿瘤细胞中ZC3H15基因表达的分离的核酸分子，所述肿瘤选自胃癌、肺癌或胶质瘤，所述核酸分子包含：a)双链RNA，所述双链RNA为小干扰RNA，该小干扰RNA第一链的序列如SEQIDNO：44所示，或b)shRNA，所述shRNA的序列如SEQIDNO：45所示；所述ZC3H15基因靶序列如SEQIDNO:6所示。3.一种ZC3H15基因干扰核酸构建体在制备肿瘤治疗药物中的用途，所述核酸构建体含有编码权利要求2中所述分离的核酸分子中的shRNA的基因片段，能表达所述shRNA，所述肿瘤选自胃癌、肺癌或胶质瘤。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述ZC3H15基因干扰核酸构建体为干扰慢病毒载体。5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述干扰慢病毒载体由将编码所述shRNA的基因片段克隆入慢病毒载体后获得，所述慢病毒载体选自：pLKO.1-puro、pLKO.1-CMV-tGFP、pLKO.1-puro-CMV-tGFP、pLKO.1-CMV-Neo、pLKO.1-Neo、pLKO.1-Neo-CMV-tGFP、pLKO.1-puro-CMV-TagCFP、pLKO.1-puro-CMV-TagYFP、pLKO.1-puro-CMV-TagRFP、pLKO.1-puro-C...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱向莹，孙琴，高博，杨敏，金杨晟，瞿红花，曹跃琼，
申请(专利权)人：上海吉凯基因化学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31