可区分HBV B型和非B型的双探针实时定量PCR法制造技术

本发明专利技术涉及一种双探针实时荧光定量PCR方法，更具体涉及一种可区分HBVB型和非B型的双探针实时定量PCR法。本发明专利技术建立了一种基于型特异性碱基设计的双探针实时定量PCR法，适用于B、C基因型流行的亚洲和太平洋地区HBV感染者HBV核酸定量的同时进行粗略基因分型，并且避免了其他少见基因型的漏检。该方法包括以下步骤：（1）设计保守引物，及针对B型和非B型的Taqman探针；（2）提取血清样本中HBVDNA；（3）双探针实时荧光定量PCR,同时对HBVDNA进行分型和定量。本发明专利技术建立的双探针实时定量PCR法准确、灵敏、特异、重复性好，可以同时进行HBVDNA的定量检测和基因分型，适合于临床推广。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种双探针实时荧光定量PCR方法，更具体涉及一种可区分HBVB型和非B型的双探针实时定量PCR法。本专利技术建立了一种基于型特异性碱基设计的双探针实时定量PCR法，适用于B、C基因型流行的亚洲和太平洋地区HBV感染者HBV核酸定量的同时进行粗略基因分型，并且避免了其他少见基因型的漏检。该方法包括以下步骤：（1）设计保守引物，及针对B型和非B型的Taqman探针；（2）提取血清样本中HBVDNA；（3）双探针实时荧光定量PCR,同时对HBVDNA进行分型和定量。本专利技术建立的双探针实时定量PCR法准确、灵敏、特异、重复性好，可以同时进行HBVDNA的定量检测和基因分型，适合于临床推广。【专利说明】可区分HBV B型和非B型的双探针实时定量PCR法
本专利技术涉及一种双探针实时荧光定量PCR方法，更具体涉及一种可区分HBV B型和非B型的双探针实时定量PCR法。
技术介绍
乙型肝炎病毒感染严重威胁着人类的健康，可引起急慢性乙型肝炎、肝纤维化、肝硬化甚至肝癌等肝脏疾病。目前全球有超过3.5亿的慢性HBV感染者，每年死于HBV感染所致的终末期肝病和肝癌的人本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可区分HBV B型和非B型的双探针实时定量PCR法，其特征在于：包括以下步骤：（1）通过对已明确基因型的HBV全基因组序列进行比对，选择保守区设计保守引物，即上游引物F和下游引物R，同时选择型特异性碱基聚集区设计针对B型和非B型的Taqman探针，其中B型探针5′端标记Hex荧光基团，非B型探针5′端标记FAM荧光基团，两者3′端均标记猝灭基团；（2）提取血清样本中HBV DNA；（3）双探针实时荧光定量PCR：保守引物能扩增所有基因型HBV DNA，而B型探针只能结合B基因型HBV DNA，非B型探针能结合余下所有基因型HBV DNA，然后在PCR反应进行时，Taqman探针被Taq酶水...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：欧启水，王炜，曾勇彬，
申请(专利权)人：福建医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：福建;35