降钙素原定量检测的化学发光微流控盘片制造技术

本实用新型专利技术公开了一种降钙素原定量检测的化学发光微流控盘片，包括微流控盘片，所述的微流控盘片上安装有微流检测单元，所述的微流检测单元包括全血注入槽、全血分离信道、血球储存槽、血浆传送流道、混合/侦测槽、降钙素原单克隆抗体包被的磁微粒溶液注入槽、清洗液注入槽、内含磁铁的外部磁铁区域、废液槽、碱性磷酸酶标记的降钙素原单克隆抗体溶液注入槽、发光底物液注入槽。本实用新型专利技术能实现全血分离、血浆定量、培育混合、清洗的功能，能快速实现样品中PCT浓度的定量检测，具有检测灵敏度高，结果准确可靠，重复性好的特点。

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种降钙素原定量检测的化学发光微流控盘片，属于医学免疫体外诊断领域，能够在很短时间内实现对生物样品中降钙素原的定量检测，具有操作简单，灵敏度高，低成本的特点。
技术介绍
降钙素原(PCT)是一种含116个氨基酸的无激素活性糖蛋白，分子量约为13kDa，在生理情况下由甲状腺-C细胞产生，在健康人群的血清中几乎不能被检出。在细菌、真菌、寄生虫等感染性疾病并有全身或/和中枢神经系统性炎症反应时，病菌的内毒素可促使甲状腺-C细胞、肝脏巨噬细胞和单核细胞、肺和肠道组织的淋巴细胞以及神经内分泌细胞等甲状腺以外的组织大量产生PCT，而导致其血清中的含量升高或持续性升高。新生儿的PCT水平于出生后1~2天内和少数大型外科手术患者术后1～4天内的PCT可有轻度短暂升高，但均呈逐日下降趋势且于三天后即可达到成人正常值。为此PCT检查可为上述病情提供确切的鉴别诊断。PCT水平反映了全身细菌性炎症反应的活跃程度，并提示与被感染器官的大小和类型、细菌的种类、以及炎症程度和免疫反应状况相关。PCT水平的升高虽可出现在严重休克、全身性炎症反应综合征和多器官功能紊乱综合征患者，如无细菌感染或细菌感染性病灶存在，其水平通常低于那些有细菌感染性病灶的患者。PCT检测的临床价值是多方面的。对细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒血症性感染的病因诊断、抗生素的临床应用、病情和预后的评估均具有明显的应用价值，对自身免疫、过敏、病毒感染和无菌性炎症等具有明确的鉴别诊断价值。目前，检测降钙素原的方法主要有放射免疫分析法、化学发光免疫分析法、胶体金比色法。放射免疫分析法检测耗时长，而且有放射性元素的污染使用受到限制；胶体金比色法具有快速简便、容易观察等特点，是一种快速的半定量使用方法；化学发光免疫分析法操作简便，特异性强，灵敏度高，检测时间短，目前得到广泛的应用。磁微粒免疫检测技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的的抗体或抗原等各种免疫活性物质，具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单、不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下可定向运动，使某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。微流控芯片作为一种新型的分析检测平台，具有高通量、集成化、便携式、易操作、低成本等优点，已经在众多领域中得到了广泛的应用，尤其是在免疫分析领域已崭露头角。免疫磁珠的生物微流控芯片是将磁颗粒技术，免疫分析集成到微流控芯片上的一种分析使用方法，目前这种综合性的使用方法的主要难点表现为：1)液体在芯片内部微流动的智能控制，目前常采用的方法是在芯片内部设置多个微泵和微阀，使得微流控体系变得更加复杂化；2)反应体系的混合不充分，导致反应不充分；3)集成化程度不高，导致非特异性背景高。
技术实现思路
本技术目的在于提供了一种降钙素原定量检测的化学发光微流控盘片；本技术能实现全血分离(样本前处理)、血浆定量、培育混合、清洗的功能，能快速实现样品中PCT浓度的定量检测，具有检测灵敏度高，结果准确可靠，重复性好的特点。为了达到上述目的，本技术的技术方案是：一种降钙素原定量检测的化学发光微流控盘片，包括微流控盘片，所述的微流控盘片上安装有微流检测单元，所述的微流检测单元包括全血注入槽，所述的全血注入槽通过全血分离信道与血球储存槽相连，所述血球储存槽与血浆传送流道连通；所述的血浆传送流道与混合/侦测槽顶部相连；所述的混合/侦测槽顶部通过管路与降钙素原单克隆抗体包被的磁微粒溶液注入槽连通；所述的混合/侦测槽顶部还通过管路与清洗液注入槽连通；所述的混合/侦测槽一侧安装有内含磁铁的外部磁铁区域；所述的混合/侦测槽底部通过管路与废液槽连通，且所述的混合/侦测槽底部与废液槽之间的管路上安装有阀门；所述的降钙素原单克隆抗体包被的磁微粒溶液注入槽顶部通过管路与碱性磷酸酶标记的降钙素原单克隆抗体溶液注入槽的底部连通；所述的清洗液注入槽顶部通过管路与发光底物液注入槽的底部连通。所述的微流控盘片上安装6个以上且为6的倍数的微流检测单元。所述的微流控盘片上优选安装12个微流检测单元。本技术的有益效果是：本技术能实现全血分离(样本前处理)、血浆定量、培育混合、清洗的功能，能快速实现样品中PCT浓度的定量检测，具有检测灵敏度高，结果准确可靠，重复性好的特点。附图说明图1是本技术一种降钙素原定量检测的化学发光微流控盘片的结构示意图；图2是图1中微流控盘片上单个微流检测单元的放大示意图。具体实施方式实施例1：降钙素原的定量检测本实施例的一种降钙素原定量检测的化学发光微流控盘片，如图1、2所示，包括微流控盘片13，所述的微流控盘片13上安装有12个微流检测单元，所述的每个微流检测单元包括全血注入槽1，所述的全血注入槽1通过全血分离信道2与血球储存槽3相连，所述血球储存槽3与血浆传送流道4连通；所述的血浆传送流道4与混合/侦测槽7顶部相连；所述的混合/侦测槽7顶部通过管路与降钙素原单克隆抗体包被的磁微粒溶液注入槽9连通；所述的混合/侦测槽7顶部还通过管路与清洗液注入槽10连通；所述的混合/侦测槽7一侧安装有内含磁铁的外部磁铁区域8；所述的混合/侦测槽7底部通过管路与废液槽6连通，且所述的混合/侦测槽7底部与废液槽6之间的管路上安装有阀门5；所述的降钙素原单克隆抗体包被的磁微粒溶液注入槽9顶部通过管路与碱性磷酸酶标记的降钙素原单克隆抗体溶液注入槽11的底部连通；所述的清洗液注入槽10顶部通过管路与发光底物液注入槽12的底部连通。1.降钙素原溶液配制1）降钙素原系列校准品的制备：用胎牛血清将降钙素原纯品（海肽生物科技（上海）有限公司）稀释为系列校准品，其校准品浓度范围为0～50ng/mL。2）降钙素原单克隆抗体包被的磁微粒溶液的制备：将降钙素原单克隆抗体（海肽生物科技（上海）有限公司）置于透析袋中，在PBS缓冲液中过夜透析；用PBS缓冲液配制BNHS溶液，每mg抗体中加入15μLBNHS（生物素-N-羟基琥珀亚胺酯（上海励瑞生物科技有限公司）溶液，混合均匀，室温反应30min；将标记好的抗体置于透析袋中，在PBS缓冲液中过夜透析。将2.0μm的链霉亲和素磁微粒（广州达于成贸易有限公司）加磁场，静置5min，倒出上清液，用PBS缓冲液清洗3次，并用该缓冲液进行悬浮；倒出上清液；每mL磁微粒悬浮液中加入1mg标记好的抗体，混合均匀，室温反应20min；用含有5%的牛血清白蛋白的Tris-HCl缓冲液清洗3次；用含有0.5%牛血清白蛋白和0.02%Proclin300（防腐剂，上海励瑞生物科技有限公司）的PBS缓冲液重悬，得到降钙素原单克隆抗体包被的磁微粒溶液。3）碱性磷酸酶标记的降钙素原单克隆抗体溶液的制备：用PB缓冲液配制Sulfo-SMCC溶液，每mg碱性磷酸酶中加入0.1mLSulfo-SMCC（4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐，上海励瑞生物科技有限公司）溶液，混合均匀，室温反应30min，在PB缓冲液中透析；用PB缓冲液配制2-亚氨基硫羟烷盐酸盐溶液，每mg抗体中加入0.1mL2-亚氨基硫羟烷盐酸盐溶液，混合均匀，室温反应30本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种降钙素原定量检测的化学发光微流控盘片，其特征在于：包括微流控盘片（13），所述的微流控盘片（13）上安装有微流检测单元，所述的微流检测单元包括全血注入槽(1)，所述的全血注入槽(1)通过全血分离信道(2)与血球储存槽(3)相连，所述血球储存槽(3)与血浆传送流道(4)连通；所述的血浆传送流道(4)与混合/侦测槽(7)顶部相连；所述的混合/侦测槽(7)顶部通过管路与降钙素原单克隆抗体包被的磁微粒溶液注入槽(9)连通；所述的混合/侦测槽(7)顶部还通过管路与清洗液注入槽(10)连通；所述的混合/侦测槽 (7)一侧安装有内含磁铁的外部磁铁区域(8)；所述的混合/侦测槽(7)底部通过管路与废液槽(6)连通，且所述的混合/侦测槽(7)底部与废液槽(6)之间的管路上安装有阀门（5）；所述的降钙素原单克隆抗体包被的磁微粒溶液注入槽(9)顶部通过管路与碱性磷酸酶标记的降钙素原单克隆抗体溶液注入槽(11)的底部连通；所述的清洗液注入槽 (10)顶部通过管路与发光底物液注入槽(12)的底部连通。

【技术特征摘要】
1.一种降钙素原定量检测的化学发光微流控盘片，其特征在于：包括微流控盘片（13），所述的微流控盘片（13）上安装有微流检测单元，所述的微流检测单元包括全血注入槽(1)，所述的全血注入槽(1)通过全血分离信道(2)与血球储存槽(3)相连，所述血球储存槽(3)与血浆传送流道(4)连通；所述的血浆传送流道(4)与混合/侦测槽(7)顶部相连；所述的混合/侦测槽(7)顶部通过管路与降钙素原单克隆抗体包被的磁微粒溶液注入槽(9)连通；所述的混合/侦测槽(7)顶部还通过管路与清洗液注入槽(10)连通；所述的混合/侦测槽(7)一侧安装有内含磁铁的外部磁铁区域(8)；所述的混合/侦测槽(...

【专利技术属性】
技术研发人员：林佳慧，左阳，杨意枫，倪燕婕，连海燕，余波，
申请(专利权)人：绍兴普施康生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：浙江;33