一种新型抗病毒多肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种新型抗病毒多肽AVP-W2及其制备方法与应用，其特征在于分离的多肽基因序列为SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列，其AVP-W2的前体组织形式编码74个氨基酸残基，由22个残基信号肽、17个残基成熟肽和35个残基前体肽三个部分组成，且具有SEQ?ID?NO2所示的氨基酸序列。本发明专利技术进一步公开了抗病毒多肽AVP-W2在制备治疗抑制HIV病毒增殖药物方面的应用。抗病毒结果实验表明合成多肽AVP-W2对MeV和HIV增殖的高效抑制作用，在10μg/mL时，AVP-W2对MeV和HIV的抑制率就可以达到100％抑制。

【技术实现步骤摘要】
一种新型抗病毒多肽及其制备方法与应用
本专利技术属于生物
，更具体涉及一种高效抗病毒功能的多肽。具体地说，本专利技术涉及一种东亚钳蝎抗病毒多肽在抗麻疹病毒(MeV)和人免疫缺陷病毒(HIV)中的用途。
技术介绍
病毒感染是一个严重危害人类健康的疾病，这个问题困扰了人类多年。早在公元前412年的古希腊时期，希波克拉底就已经记述了类似流感的疾病；1742年至1743年由流感病毒引起的流行性感冒曾殃及90%的东欧人；1889年至1894年席卷西欧的“俄罗斯流感”，发病范围广泛，死亡率很高；1918年，一场致命的流感席卷全球，造成了 2000万至5000万人死亡；1957年“亚洲流感”及1968年“香港流感”的爆发，就美国的统计数据来看,分别有7万人和3.4万人因此丧命；流感病毒平均每年在美国也导致11万多人住院，3.4万人死亡。1981年6月，美国疾病控制中心首先报道了 5例获得性人类免疫缺陷症，随后，在美国和其他国家都陆续发现了类似症状的病人，后在全世界大规模传播开来；至2003年艾滋病毒感染新例达到近550万例，使全世界艾滋病毒(HIV)携带者和病人(AIDS)数量达到3430万人。报告指出，除非出现奇迹，大部分病人将在今后10年内死亡。自人类发现艾滋病后，已有1880万人死于该绝症；由SARS病毒引起的“非典”在2003年爆发。据世界卫生组织统计数字，2003年全球累计非典病例共8422例，全球因非典死亡人数919人，病死率近11%。从这些统计数据可以看出，病毒感染已经对人类的健康造成极大的危害，并且还正在继续危害人类的健康。病毒分布广泛，能引起各种人类疾病，难以治疗，危害人类健康。比如HIV病毒引起的获得性人类免疫缺陷症(AIDS)，该病患者的免疫功能部分或完全丧失，CD4+细胞数目减少，继而发生机会性感染、肿瘤等，临床表现多种多样。该病传播速度快、病死率高，且目前无法治愈；流感目前没有药物可以治愈，市面上的流感药物只能够减轻流感症状，通过人体自身的免疫能力对抗病毒。现在比较有效的方法是注射流感疫苗预防，有效率为70%至90%。由于流感病毒极其容易发生变异，每年流行的流感病毒类型不一样，因此必须每年注射疫苗才能发挥作用；乙肝没有办法治愈，但是可以其控制不发作，一旦感染，终生携带。病毒很难杀灭，是由于病毒使用了寄主的活动机制。现有的抗病毒药物一般为病毒遗传物质复制的抑制剂，这些抑制剂也会抑制人体的遗传物质复制，所以对人体也是具有毒性的，所以现在最积极的预防病毒的方法仍然还是接种疫苗。但是有些病毒如流感、HIV，其自身遗传物质不稳定，容易发生突变，从而使得在此之前的疫苗对这种新的突变病毒的预防作用降低或者完全失效。而阳离子防御肽的发现使人们看到了治疗病毒疾病的新方法。阳离子防御肽是一类由宿主生成，并且在天然免疫中特异性发挥防御性作用的一类小肽。这一类小分子多肽通常由10-50个氨基酸构成，静电荷从+2到+9不等，在生物体抵御微生物的入侵中发挥重要的作用。根据结构的差别，阳离子防御肽可以分为如下几类:含有2-4个P片层的两亲性分子、两亲性a螺旋、卷曲结构、以及含有高级结构的分子。阳离子防御肽在体内对细菌、真菌、寄生虫、以及病毒的侵染均有有效的抵御作用。研究表明，蜂毒溶血肽Melitiin和天蚕素Cecropins在亚毒性浓度下通过阻遏基因表达来抑制人免疫缺陷病毒HIV-1的增殖，爪蟾抗病毒肽Magainin-2对疱疹病毒HSV-1和HSV-2有一定的抑制效果，这些多肽都是a螺旋类阳离子防御肽。目前的研究表明，a螺旋类阳离子防御肽特异性作用于有包膜的RNA病毒及DNA病毒，其作用方式通常是作用于病毒进入的过程，或者是直接作用于病毒的包膜。例如，Dermas印tin就是通过作用于HIV的包膜而引起HIV的失活，从而达到抗病毒的作用。所以，阳离子防御肽不再是传统的疫苗防治，而是通过直接抑制病毒达到抗病毒的目的。蝎子中阳离子防御肽的研究也已经有多年的历史。其中除了从淋巴系统中发现的防御肽外，更多的是从蝎毒腺中分离到的防御肽，例如hadrurin, Scorpine, opistoporin,parabutoporin, ISCT, pandinin。这些肽的功能都已经得到有效的鉴定。本室长期从事蝎毒素的研究，目前从文库中筛选并鉴别的系列阳离子多肽。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供了一种抗病毒的多肽，抗病毒活性高，该抗病毒肽含有17个氨基酸，生产成本低，水溶性好。本专利技术涉及一种抗病毒多肽在制备治疗或预防麻疹病毒(MeV)和人免疫缺陷病毒(HIV)感染的药物中的应用，具有抑制病毒感染的功能，抑制效果好，无副作用。多肽AVP-W2在制备MeV和HIV引起疾病的治疗或预防药物中的应用，其在预防和治疗由MeV和HIV所引起的感染效果显著。为了实现上述目的，采用化学合成的方法，获得了蝎毒抗病毒多肽AVP-W2，抗病毒试验结果表明，抗病毒多肽AVP-W2对MeV和HIV有明显的抑制作用。当AVP-W2的浓度达到10 u g/mL时，AVP-W2对MeV和HIV的抑制率就可以达到100%抑制。ABP-W2是一种具有抗病毒能力阳离子防御肽，目前的研究结果显示ABP-W2抗病毒能力强，毒性低；加上ABP-W2只有17个氨基酸，工业生产成本低，所以将阳离子抗病毒肽ABP-W2应用于抗病毒药物具有广阔的前景。本专利技术的技术方案如下: 一种新型抗病毒多肽AVP-W2，其特征在于分离的东亚钳蝎抗病毒的多肽的编码基因，其序列为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；其AVP-W2的前体组织形式编码74个氨基酸残基，由22个残基信号肽、17个残基成熟肽和35个残基前体肽三个部分组成，且具有SEQ IDN02所示的氨基酸序列。本专利技术进一步公开了新型抗病毒多肽AVP-W2的制备方法，:首先构建高质量东亚钳蝎毒腺组织cDNA文库: (1)蝎毒腺总RNA的分离和mRNA纯化； (2)cDNA的第一链和第二链合成，双链cDNA与pSPORTl载体的连接和转化，获得蝎毒腺组织cDNA文库； (3)在构建文库的基础上，随机挑选50克隆子进行测序，序列分析发现W2克隆子为一个新的东亚钳蝎抗病毒肽基因，命名为AVP-W2 ； (4)在10ii g/mL时，AVP-W2对MeV和HIV的抑制率就可以达到100%抑制。本专利技术还公开了含有新型抗病毒多肽AVP-W2及一种或多种药用辅料的组合物。其中所述的组合物为固体制剂或液体制剂。固体制剂为胶囊、软胶囊、片剂、含片、颗粒剂或滴丸；液体制剂为口服液或注射液。本专利技术所用到的辅料指的是药学上可接受的载体、赋形剂及其它添加剂形成的化合物，可采用乳糖或淀粉做载体，明胶，羧甲基纤维素钠，甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等是合适的结合剂或成颗剂。作为崩解剂可选用淀粉或微晶纤维素，常以滑石粉，胶体硅胶，硬脂酸甘油酯，硬脂酸钙或镁等作为合适的抗粘合剂和润滑剂。例如，可通过压制湿颗粒来制备片剂。活性成分与载体以及选择性的与一份崩解添加剂组成混合物，该混合物与粘合剂的含水溶液，醇性或含水醇性溶液在合适的设备中进行颗粒化，干燥颗粒随后加入其它的崩解剂，润滑剂和抗粘剂将此混合物压片。本专利技术进一步公开了新型抗病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型抗病毒多肽AVP?W2，其特征在于分离的东亚钳蝎抗病毒的多肽的编码基因，其序列为SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列；其AVP?W2的前体组织形式编码74个氨基酸残基，由22个残基信号肽、17个残基成熟肽和35个残基前体肽三个部分组成且具有SEQ?ID?NO2所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种新型抗病毒多肽AVP-W2，其特征在于分离的东亚钳蝎抗病毒的多肽的编码基因，其序列为SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列；其AVP-W2的前体组织形式编码74个氨基酸残基，由22个残基信号肽、17个残基成熟肽和35个残基前体肽三个部分组成且具有SEQID N02所示的氨基酸序列。2.权利要求1所述新型抗病毒多肽AVP-W2的制备方法，其特征在于:首先构建高质量东亚钳蝎毒腺组织cDNA文库: (1)蝎毒腺总RNA的分离和mRNA纯化； (2)cDNA的第一链和第二链合成，双链cDNA与pSPORTl载体的连接和转化，获得蝎毒腺组织cDNA文库； (3)在构建文库的基础上，随机挑选50克隆子进行测序，序...

【专利技术属性】
技术研发人员：李虹，
申请(专利权)人：天津拓飞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：