本发明专利技术提供了包含与部分连接的器官、组织或肿瘤细胞归巢分子的偶联物。所述部分能够是例如寡核苷酸、小干扰RNA、基因、病毒、蛋白、药物或可检测剂。此外，本发明专利技术提供了通过给予患有或疑似患有病变的个体分子或偶联物以诊断或治疗肌肉或心脏病变的方法，所述分子或偶联物归巢于、结合于肌细胞或心脏细胞并被肌细胞或心脏细胞摄取。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体内靶向领域，并提供了归巢于、结合于多种器官或组织并被多种器官或组织吸收的分子。
技术介绍
大多数治疗性化合物通过循环递送至靶器官或组织。然而，在大多数情况下，药物或其它治疗不仅靶向患病器官或组织，而且会被体内的其它器官和组织吸收。这由于例如遍及患者身体的普遍毒性效应而导致不期望的副作用。因此，选择性靶向特定器官或组织是理想的。另外，将治疗化合物与靶向分子偶联能够改善被靶向的组织或细胞对化合物的摄取性质，这产生更有效的分子。因此，与靶向分子偶联获得相比于母体化合物更有效且毒性更低的化合物，参见 Curnis et al., 2000, Nature Biotechnol.18，1185-1190。这能够应用于多种化合物，例如肽、蛋白质、细胞抑制剂、抗菌素和抗病毒剂。在诸如杜兴氏肌营养不良(DMD)、肌强直性营养不良(MD)或脊髓性肌萎缩(SMA)的肌肉疾病的情况下，肌特异性肽能够与例如反义寡核苷酸(AON)和小干扰RNA(SiRNA)结合。AON和SiRNA通过阻断不期望基因的转录而具有用作治疗特定疾病的新型药品的高效能。在DMD治疗领域中，反义诱导的外显子跳读(antisense-1nduced exon skipping)作为用于校正抗肌萎缩蛋白(dystrophin)转录子的翻译读码框的新颖且有前景的工具而备受关注。其目的是以如下方式操作剪接:跳读被靶向的外显子(通过将AON与前体mRNA结合)并产生较短但为框内的转录子。这允许校正翻译读码框，并诱导合成贝克肌营养不良(Becker’s muscular dys trophy, BMD)样抗肌萎缩蛋白，所述蛋白可以显著缓解疾病进展。已有若干报道显示出在体外培养的患者来源的肌细胞中(van Deutekom etal.，2001, Hum.Mol.Genet.10, 1547-1554)和在体内通过肌内注射的转基因hDMD小鼠肌组织中(Bremmer-Bout et al., 2004, Mol.Ther.10，232-240),外显子跳读策略用于恢复抗肌萎缩蛋白生成的治疗潜力。然而，要克服的最大障碍是这些AON的体内摄取差，特别是在如肌强直性营养不良(MD)和脊髓性肌萎缩(SM)的各类肌病中。这些肌萎缩症的有效治疗需要靶向包括臂和腿的骨骼肌的基本上所有的骨骼肌和参与呼吸的肌肉以及心肌。至今没有研究出能够同时将(反义)寡核苷酸(更不用说完整基因)特异性递送至全身基本上所有肌组织/细胞的机理，。迄今为止已经公开的用于将基因或其它化合物体内递送至肌肉的方法包括采用或不采用电转移注射裸DNA、使用微泡(Lu et al.2003，Gene Ther.10，396-405)和使用泊洛沙姆(羟基聚(氧-乙烯)聚(氧丙烯))的全身递送。最近在mdx小鼠中显示出全身递送吗啉代AON导致抗肌萎缩蛋白在若干肌肉中表达增加(Alter et al., 2006, Nature Med.12, 1-3) 然而，即使在重复给予后，抗肌萎缩蛋白表达在膈中几乎检测不到，并且在心肌中检测不出。此外，在这些mdx小鼠中AON相当容易被吸收进入肌肉中，因为肌膜受损，但例如年轻杜兴氏患者的肌肉的情况并非如此。而且，在如SMA和MD的其它肌肉疾病中，AON的递送是复杂的，因为在该情况下肌细胞壁未受损。理论上，全身肌肉治疗使用具有细胞特异性靶向能力的化合物的全身递送(例如静脉内或皮下)。某些分子已经被描述为具有肌细胞靶向的潜力。最先报道的是具有增强的体内骨骼和心肌结合的肽序列，其通过筛选随机曬菌体展示文库被鉴定(Samoylova andSmith, 1999, Muscle Nerve22，460-466)。然而，没有表明该肽是否能够用于使偶联的化合物体内靶向肌细胞。还已经描述了在噬菌体随机肽文库的体内筛选后从人骨骼肌中回收的多个7-聚肽序列(Arap et al., 2002, Nature Medicine8, 121-127)。未提供与心肌细胞结合的信息。该文同样没有表明，这些肽是否能够用于使偶联的化合物体内靶向肌细胞。已经描述的另一分子是体内选择性转运至骨骼肌的单克隆抗体(mAb)的Fv部分(Weisbartet al.，2003，Mol.1mmunol.39，783-789)。将鼠源性mAb的单链Fv片段注射入小鼠尾静脉，4小时后，在20%的骨骼肌细胞中发现片段，所述片段主要位于细胞核中。mAb显示出与骨骼肌细胞裂解物中的蛋白肌球蛋白IIb结合，但其未与心肌细胞裂解物中的任何蛋白结合。因此，该抗体可以用于靶向骨骼肌而不是靶向心肌。在溶酶体贮积症的情况下，酶 替代疗法中的问题是肌细胞对治疗性重组酶的体内摄取差。例如在庞贝氏病(糖原贮积病II型)中，由于骨骼肌对rhGAA的摄取差，因此临床研究中需要的重组人酸性α -葡糖苷酶(rhGAA)的剂量非常高(Winkel et al.，2004, Ann.Neurol.55，495-502)。鉴于以上所述，进一步改善递送系统是实现诸如AON的药剂的体内特异性摄取明显所需的。专利技术概述本专利技术的目的是提供化合物，优选肽或模拟肽(peptidomimetic),其归巢于感兴趣的器官或组织或细胞型，特别是包括心脏在内的肌细胞。通过将诊断部分或具有生物活性的部分与这样的归巢化合物(homing compound)偶联,使所述部分祀向特定器官或组织或细胞。在广泛研究后，本专利技术人已经鉴定出大量与肌细胞选择性结合并被肌细胞摄取的肽，所述肌细胞包括心脏。因此本专利技术通过将例如治疗性重组酶或(反义)寡核苷酸与肌肉特异性肽结合满足了改善所述酶或寡核苷酸体内摄取的需要。分子有利地用于治疗肌病的反义治疗方法、其中肌肉潜在地用作蛋白生成储库的疾病的基因治疗、以及将多种诊断或药物递送至心脏和肌细胞。因此，本专利技术涉及包含选自以下序列或 由选自以下序列组成的肽或模拟肽:LGAQSNF(SEQ ID NO:100)QLFTSAS(SEQ ID NO:3)LYQDYSL(SEQ ID NO:85)SPNSIGT stfthprSTIHGST SAPRPLYAAQTSTP yqdsakt avtinep VTAATLS TYPAALLELSPSAP tvpqltt qnappsl YDIDNRR QTLLPSHTSFQPHR gntpsra ltqmsis RLTLPMP GTAPPVHHSPSKIP fphypms ashleps amttkid ATLTHPPHMATFHY llatptp aqpnkfk mpallrs LPPEHPLAHPQLAT YAGPYQH HWEMWSY QAPRLffS HTPNSTHSNQLVEG fspstpn asspvhr SPHSASL DQLPLIPSLAAYLH wsqmhfl sipllnh NQQFYIL FESRLTAQPLSNAS KPAYGST ANYSVSIYSHTAAT QHPPffRVMPAVPHS sallpsf thpptth snsirpn asvqqrgFPPSFTA mqqgprp qktalpltygtkis slkllnqTSSTMNR YKHTPTT GSffYQVPY本文档来自技高网...
【技术保护点】
与选自生物活性部分和诊断部分的部分连接的肽或模拟肽的偶联物，所述肽或模拟肽包含NLTRLHT或由NLTRLHT组成。
【技术特征摘要】
2007.07.12 EP 07112323.61.与选自生物活性部分和诊断部分的部分连接的肽或模拟肽的偶联物，所述肽或模拟肽包含NLTRLHT或由NLTRLHT组成。2.如权利要求1所述的偶联物，其中所述生物活性部分选自DNA、RNA或其类似物，诸如包含2，-O-烧基特别是2’ -O-甲氧基乙基-和2’ -O-甲基、或2’ -O-稀基(稀丙基)或2’ -O-炔基核苷酸的化合物，锁核酸(LNA)，肽核酸(PNA)，乙烯桥联核酸(ENA)，硫代磷酸修饰的核苷酸，基于吗啉代的核苷酸及其组合。3.如权利要求1或2所述的偶联物，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：约翰尼斯·安东尼乌斯·海姆斯凯克，朱迪思·克里斯蒂娜·塞奥多拉·万多伊特科姆，皮特拉·万库伊克罗梅恩，杰勒德·约翰尼斯·普拉滕伯格，
申请(专利权)人：普罗森那技术公司，
类型：发明
国别省市：
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