用于诱导多能性干细胞的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术提供以特定的顺序导入了编码用于诱导多能性干细胞的重编程因子的基因的仙台病毒载体；包含这些载体的用于在多能性干细胞的诱导中使用的基因导入用组合物，以及它们的用途。通过将KLF基因、OCT基因、以及SOX基因以一定的顺序组入到一个仙台病毒载体中，成功地提高了多能性干细胞的诱导效率。通过将多个重编程因子搭载到一个载体上，使得减少必需的载体数、进一步提高多能性干细胞的诱导效率成为可能。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及在多能性干细胞的诱导中使用的用于基因投递的组合物及其用途。此夕卜，本专利技术涉及在多能性干细胞的诱导中使用的基因投递载体。具体地，本专利技术涉及以特定的顺序导入了编码重编程因子的基因的仙台病毒载体，包含这些载体的、供在多能性干细胞的诱导中使用的基因投递用组合物，以及它们的用途。
技术介绍
自从由体细胞诱导多能干细胞(诱导的多能干细胞(iPS)细胞；又称“人工多能干细胞”或“诱导多能性干细胞”)被报道以来(非专利文献I)，已经通过将重编程因子导入到多种哺乳动物细胞，包括人和小鼠细胞中来产生iPS细胞(非专利文献I至9)。它们中的许多使用逆转录病毒来导入重编程因子。然而，由于逆转录病毒具有由于整合入宿主基因组而致瘤的风险，它们的用途受到限制(非专利文献3)。为了解决这个问题，人们已经尝试了利用腺病毒来诱导iPS细胞，但是只要使用DNA型载体，就不可能完全消除整合到基因组中的担忧。此外，这些载体的iPS细胞诱导效率极低(非专利文献10至13)。为了解决这些问题，本专利技术人先前开发了一种利用RNA型病毒仙台病毒载体来诱导iPS细胞的系统(专利文献I)。利用仙台病毒载体的iPS细胞诱导效率显著高于使用其他载体的先前案例。由于仙台病毒在其生命周期中不具有DNA期，它们没有整合到宿主基因组中的担忧，而且它们就安全性而言是极为优越的。而且，所述载体在iPS细胞诱导后可以容易地去除。然而，利用仙台病毒载体来进一步提闻iPS细胞诱导效率的技术尚属未知。现有技术文献国际公布TO2010/008054Takahashi, K.and Yamanaka, S.(2006)Celll26, 663-676Maherali, N.et al., (2007)Cell Stem Celll, 55-70 Okita, K.et al.，(2007) Nature448, 313-317Wernig，M.et al., (2007) Nature448, 318-324Takahashi，K.et.al.，(2007)Celll31, 861-872Yu, J.et al.，(2007) Science318, 1917-1920 Lowry, W.Ε.et al., (2008) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA105, 2883-2888Park, 1.H.et al.，(2008) Nature451, 141-146Masaki，H.et al., (2008) Stem Cell Res.1，105-115 Stadtfeld, M.et al.，(2008) Science322, 945-949 Okita, K.et al., (2008) Science322, 949-953 Yu, J.et al.，(2009) Science324, 797-801Zhou, ff.etal.，(2009) stem cells27, 2667-267
技术实现思路
本专利技术要解决的问题本专利技术的一个目的是提供在多能干细胞的诱导中使用的新的基因投递用组合物及其用途。此外，本专利技术的一个目的是提供在多能干细胞的诱导中使用的新的基因投递载体。具体地说，本专利技术的一个目的是提供以特定的顺序组入有编码重编程因子的、用于诱导多能干细胞的仙台病毒载体，包含这些载体的在多能性干细胞的诱导中使用的基因投递用组合物，及其用途。解决问题的手段本专利技术人发现，使用KLF基因、OCT基因和SOX基因(即重编程因子)位于仙台病毒基因组上的仙台病毒载 体，与使用各别的载体导入这三种基因时相比，可以以显著更高的效率诱导iPS细胞。此外，发现当这种载体与表达MYC基因的载体组合使用时，与将KLF基因、OCT基因和SOX基因搭载到各别的仙台病毒载体时相比，可以以显著高的效率诱导iPS细胞。或者，代替MYC基因表达载体，可以与表达Glisl基因(Maekawa etal.，Nature, 474:225-229，2011)的载体组合。尤其是，通过将KLF基因、OCT基因和SOX基因按此顺序插入单一仙台病毒载体，或者将OCT基因、SOX基因和KLF基因按此顺序插入单一仙台病毒载体，并使用该载体，能够显著提高iPS细胞诱导的效率。此外，当组合使用另外的具有插入到仙台病毒L基因紧邻上游的MYC基因的仙台病毒载体时，iPS细胞集落以极高的速率(rate)出现，如附图说明图1所示(条件2)。此外，当使用将OCT基因、SOX基因和KLF基因按此顺序插入单一仙台病毒载体中而得到的载体时，还可以组合使用携带KLF基因的仙台病毒载体。这样，使用将KLF基因、OCT基因和SOX基因插入到单一仙台病毒载体中而得到的载体，能够显著提高iPS细胞诱导的效率。具体地说，本专利技术涉及在多能干细胞的诱导中使用的新的基因投递用组合物及其用途，以及基因投递载体等，更具体地涉及各权利要求中描述的专利技术。由引用同一权利要求的多个权利要求中描述的两项或更多项专利技术的任意组合所构成的专利技术也是本申请意图要求保护的专利技术。更具体地说，本专利技术涉及下述: 一种供在用于多能干细胞诱导的基因投递中使用的组合物，其包含仙台病毒载体，所述载体中在仙台病毒P基因的紧邻后方依次插入了 KLF基因、OCT基因和SOX基因，或者依次插入了 OCT基因、SOX基因和KLF基因； 的组合物，其与插入有MYC基因或Glisl基因的另外的仙台病毒载体组合使用； 的组合物，其中MYC基因或Glisl基因插入到仙台病毒L基因的紧邻前方； 一种在多能干细胞的诱导中产生转基因细胞的方法，其包括向细胞中导入仙台病毒载体，所述载体中在仙台病毒P基因的紧邻后方依次插入了 KLF基因、OCT基因和SOX基因，或者依次插入了 OCT基因、SOX基因和KLF基因； 的方法，其还包括向细胞中导入插入有MYC基因或Glisl基因的另一仙台病毒载体； 的方法，其中MYC基因或Glisl基因插入到仙台病毒L基因的紧邻前方； 一种仙台病毒载体，其中在仙台病毒P基因的紧邻后方依次插入了 KLF基因、OCT基因和SOX基因，或者依次插入了 OCT基因、SOX基因和KLF基因； 一种核酸，其编码的仙台病毒载体的基因组或反基因组； 一种供在用于多能干细胞诱导的基因投递中使用的试剂盒，其包含的仙台病毒载体以及插入有MYC基因或Glisl基因的另外的仙台病毒载体；和 的试剂盒，其中所述MYC基因或Glisl基因插入仙台病毒L基因的紧邻前方。本申请意图涵盖本申请描述的专利技术的任何事项及其任何组合。本申请还意图涵盖在这些专利技术中排除了任何本申请中描述的事项或其任何组合的专利技术。此外，本申请中描述的本专利技术的相关特定具体实施方案不但公开了这些实施方案，还公开了从本申请中公开的包含这些实施方案的上位专利技术中排除这些实施方案而得到的专利技术。专利技术的效果仙台病毒不存在会整合到宿主基因组中的担忧，因此它们是非常安全的载体。故而如果能够利用这些载体以更高的效率诱导iPS细胞，则它们的实用将会极高。本专利技术使得人们能够进一步提高仙台病毒载体的iPS细胞诱导效率，同时实现了将多个重编程基因集成在单一仙台病毒载体中，从而为iPS细胞的诱导操作的简化和再现性的提高作出贡献。附图简介图1显示载体感染14日之后的细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：伴浩志，上田泰次，房木野惠美，佐伯晃一，长谷川护，
申请(专利权)人：生物载体株式会社，
类型：
国别省市：