本发明专利技术提供试样中的成纤维细胞生长因子-23（FGF-23）的测定方法。该测定方法的特征在于，包含以下工序：（1）使试样中的FGF-23在水性介质中和磁性粒子、与FGF-23结合的第1抗体或其片段以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段反应，从而在磁性粒子上产生由与FGF-23结合的第1抗体或其片段、FGF-23及与FGF-23结合的第2抗体或其片段构成的免疫复合体的工序；（2）利用磁力聚集工序（1）后的反应混合物中的磁性粒子，从而将通过磁力聚集的磁性粒子与除其之外的成分分离的工序；以及（3）对工序（2）中分离出的磁性粒子上的免疫复合体进行测定的工序。通过本发明专利技术，可以提供高灵敏度、测定范围广的试样中的FGF-23的测定方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及试样中的成纤维细胞生长因子-23 (以下记为FGF-23)的测定方法及FGF-23的测定试剂。
技术介绍
FGF-23是成纤维细胞生长因子(FGF)家族的一员，主要是由在骨组织中产生的251个氨基酸构成的多肽，其作用于肾脏，阻碍肾小管处的磷的再吸收。近年来指出，在低磷血症性佝偻病、肿瘤性骨软化病症、肾功能衰竭等疾病中的FGF-23的相关性(参照非专利文献I)。FGF-23形成为N末端的24个氨基酸脱离后的227个氨基酸所构成的多肽受到修饰并添加有糖链的结构，以约32.5kDa的成熟的蛋白释放到细胞外。另外，FGF-23在凝血酶的作用下距离N末端的第197位和第198位之间的键被剪切，第198-251位的片段作为C末端片段存在于血中。在此之前已经报道了获得了针对FGF-23的抗体(参照专利文献I及2、非专利文献2)、和使用了该抗体的血清或血浆中的FGF-23的免疫测定方法(参照专利文献1、非专利文献2)，基于该测定方法的测定试剂盒也在市场上有售[Human Intact FGF-23ELISA Kit(Immutopics 公司)、Human FGF-23 (C-Term) ELISA Kit (Immutopics 公司)、FGF-23 测定试剂(Kainos公司)]。但是，之前的免疫测定方法是利用平板法的测定方法，该方法存在测定灵敏度低、测定范围窄等问题。特别是在慢性肾脏病(CKD)患者及透析患者中存在数pg/mL 数万pg/mL浓度范围的检体,存在着在低浓度检体中由于精度不良而无法获得准确的测定值、在高浓度检体中超过测定范围等课题。现有技术文献专利文献专利文献1:W02003/057733小册子专利文献2:日本特表2004-504063号公报非专利文献非专利文献1:腎i骨代謝(肾和骨代谢)，vol.15，N0.4，ρ.351 356 (2002)。非专利文献2:N ENGL J MED, vol.348，N0.17，p.1656 1663 (2003)。
技术实现思路
专利技术要解决的技术问题本专利技术的目的在于提供高灵敏度、测定范围广的试样中的FGF-23的测定方法及测定试剂。用于解决技术问题的手段本专利技术人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现:通过使用磁性粒子作为载体的免疫测定方法，能够以高灵敏度进行测定范围广的FGF-23的测定，从而完成了本专利技术。即，本专利技术涉及以下的[I] [10]。[I] 一种试样中的FGF-23的测定方法，其特征在于，包含以下工序:(I)使试样中的FGF-23在水性介质中和磁性粒子、与FGF-23结合的第I抗体或其片段、以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段反应，从而在磁性粒子上生成由与FGF-23结合的第I抗体或其片段、FGF-23以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段构成的免疫复合体的工序；(2)利用磁力聚集工序(I)后的反应混合物中的磁性粒子,从而将通过磁力聚集的磁性粒子与除其以外的成分分离的工序；以及(3)对工序(2)中分离出的磁性粒子上的免疫复合体进行测定的工序。[2]上述[I]所述的测定方法，其中，第2抗体为经标记化的抗体。[3]上述[2]所述的测定方法，其中，经标记化的抗体为碱性磷酸酶标记抗体。[4]上述[I] [3]中任一项所述的测定方法，其中，工序(3)的磁性粒子上的免疫复合体的测定通过化学发光的测定来进行。[5]上述[I] [4]中任一项所述的测定方法，其中，试样为血清或血浆。[6] 一种试样中的FGF-23测定试剂，其特征在于，含有磁性粒子、与FGF-23结合的第I抗体或其片段、以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段。[7]上述[6]所述的测定试剂，其中，第2抗体为经标记化的抗体。[8]上述[7]所述的测定试剂,其中，经标记化的抗体为碱性磷酸酶标记抗体。[9]上述[6] [8]中任一项所述的测定试剂，其中，进一步含有化学发光测定试剂。[10]上述[6] [9]中任一项所述的测定试剂，其中，试样为血清或血浆。专利技术效果通过本专利技术，可以提供高灵敏度、测定范围广的试样中的FGF-23的测定方法及测定试剂。附图说明图1为表示实施例1的FGF-23测定方法的最小测定浓度的曲线图，是表示试样中的FGF-23浓度与发光量之间的关系的曲线图。横轴表示FGF-23浓度(pg/mL)，纵轴表示发光量(RLU)。I表示平均值±2SD的范围。另外，虚线表示空白+2SD的发光量。图2为表示实施例2的FGF-23测定方法的测定范围的曲线图，是表示试样中的FGF-23浓度与发光量之间的关系的曲线图。横轴表示FGF-23浓度(pg/mL)，纵轴表示发光量(RLU)。图3为表示使用了透析患者来源的血清(患者血清D)的实施例3的测定方法的稀释线性的曲线图，是表示稀释率与FGF-23浓度之间的关系的曲线图。横轴表示该血清的稀释率，纵轴表示所确定的FGF-23浓度(pg/mL)。图4为表示使用了透析患者来源的血清(患者血清E)的实施例3的测定方法的稀释线性的曲线图，是表示稀释率与FGF-23浓度之间的关系的曲线图。横轴表示该血清的稀释率，纵轴表示所确定的FGF-23浓度(pg/mL)。图5为表示使用平板的比较例I的FGF-23测定方法的最小测定浓度的曲线图，是表示试样中的FGF-23浓度与吸光度之间的关系的曲线图。横轴表示FGF-23浓度(pg/mL)，纵轴表示吸光度(Abs)。I表示平均值±2SD的范围。另外，虚线表示空白+2SD的发光量。图6为表示使用平板的比较例2的FGF-23测定方法的测定范围的曲线图，是表示试样中的FGF-23浓度与吸光度之间的关系的曲线图。横轴表示FGF-23浓度(pg/mL)，纵轴表不吸光度(Abs)。具体实施方式(测定方法)本专利技术的试样中的FGF-23的测定方法是使用磁性粒子作为载体的利用夹心法的试样中的FGF-23的免疫测定方法，该测定方法包含以下工序。(I)使试样中的FGF-23在水性介质中和磁性粒子、与FGF-23结合的第I抗体或其片段、以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段反应，从而在磁性粒子上生成由与FGF-23结合的第I抗体或其片段、FGF-23以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段构成的免疫复合体的工序； (2)利用磁力聚集工序(I)后的反应混合物中的磁性粒子,从而将通过磁力聚集的磁性粒子与除其以外的成分分离的工序；以及(3)对工序(2)中分离出的磁性粒子上的免疫复合体进行测定的工序。< 工序(1)>工序(I)中，试样中的FGF-23在水性介质中和磁性粒子、与FGF-23结合的第I抗体或其片段、以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段反应，从而在磁性粒子上生成由与FGF-23结合的第I抗体或其片段、FGF-23以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段构成的免疫复合体。这里，试样中的FGF-23和磁性粒子、与FGF-23结合的第I抗体或其片段以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段的反应只要是在磁性粒子上生成由与FGF-23结合的第I抗体或其片段、FGF-23以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段构成的免疫复合体，则任何反应都可以，例如可以使试样中的FGF-23和磁性粒子及与FGF-23结合的第I抗体或本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.08.31 JP 2010-1932131.一种试样中的成纤维细胞生长因子的测定方法，以下将该成纤维细胞生长因子记为FGF-23，该测定方法的特征在于，包含以下的工序: (O使试样中的FGF-23在水性介质中和磁性粒子、与FGF-23结合的第I抗体或其片段、以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段反应，从而在磁性粒子上产生由与FGF-23结合的第I抗体或其片段、FGF-23以及与FGF-23结合的第2抗体或其片段构成的免疫复合体的工序； (2)利用磁力聚集工序(I)后的反应混合物中的磁性粒子，从而将通过磁力聚集的磁性粒子与除其以外的成分分离的工序；以及 (3)对工序(2)中分离出的磁性粒子上的免疫复合体进行测定的工序。2.根据权利要求1所述的测定方法，其中...
【专利技术属性】
技术研发人员：鹈泽耕治，铃木惠美子，池田和幸，守田和树，
申请(专利权)人：协和梅迪克斯株式会社，
类型：
国别省市：
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