【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种合成PNA的方法，具体涉及一种公斤级合成PNA的方法。
技术介绍
寡核苷酸在治疗用药物、分子生物学研究工具及诊断试剂上应用广泛。寡核苷酸应用的主要制约在于它容易 被核酸酶所降解、杂交后热稳定性差以及会与蛋白等非特异性结合等。为改造寡核苷酸的理化和生物学特性，许多寡核苷酸类似物被研究出来。肽核酸是寡核苷酸模拟物中的较为重要的一种。1991年Nielsen等报道了用N-(2-氨基乙基)甘氨酸骨架代替糖-磷酸酯骨架作为重复结构单元，合成了以肽键连接的寡核苷酸模拟物，称为肽核酸(Peptide nucleic acid, PNA)。尽管PNA在结构上相对寡核苷酸有了显著的改变，但PNA与互补核酸之间的结合仍遵循碱基互补配对原则，甚至比天然核苷酸具有更高的亲和性，有较强的抗核酸酶和蛋白水解酶降解的能力。科研人员设计合成了各种结构的PNA，以优化其生物学稳定性和利用度、靶结合特性以及药代动力学特性，并将PNA应用于诊断和治疗等方面，从而开创了一个新的研究领域。各种各样的构建模块被用于合成PNA及其类似物，包括骨架结构、在N- (2-氨基乙基)甘氨酸上连接手...
【技术保护点】
公斤级合成PNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)1升三口瓶装入500毫升乙二胺，冰浴冷却至10度，将75克氯乙酸分批加入控制温度在10度以下，每批加完后，观察完全消耗掉之后再加下一批，加料完毕后，室温过夜反应，将乙二胺旋干，回收乙二胺可以循环使用，用油泵将乙二胺尽可能去除干净，用DMSO重结晶得到白色粉末状晶体，为N?(2?氨乙基)甘氨酸；步骤2)将50克N?(2?氨乙基)甘氨酸溶于850毫升二氯甲烷和50毫升DMF的混合溶液中，加入134毫升(1.05mol)三甲基氯硅烷，反应混合物室温搅拌40分钟，然后冷却至5度，将134克Fmoc?OSu加入上面混合物中，在...
【技术特征摘要】
1.公斤级合成PNA的方法，其特征在于，包括以下步骤: 步骤I) I升三口瓶装入500毫升乙二胺，冰浴冷却至10度，将75克氯乙酸分批加入控制温度在10度以下，每批加完后，观察完全消耗掉之后再加下一批，加料完毕后，室温过夜反应，将乙二胺旋干，回收乙二胺可以循环使用，用油泵将乙二胺尽可能去除干净，用DMSO重结晶得到白色粉末状晶体，为N-(2-氨乙基)甘氨酸； 步骤2)将50克N-(2-氨乙基)甘氨酸溶于850毫升二氯甲烷和50毫升DMF的混合溶液中，加入134毫升(1.05mol)三甲基氯硅烷，反应混合物室温搅拌40分钟，然后冷却至5度，将134克Fmoc-OSu加入上面混合物中，在5度下滴加NMM186毫升，30分钟滴完，在此温度下搅拌2小时，然后加入100毫升甲醇，再搅拌20分钟，加入I升乙酸乙酯，20分钟后过滤固体，用乙酸乙酯洗涤，产品粉末旋干，产品水中打浆洗涤，过滤水洗，干燥得到纯品，为N-(2-Fmoc-氨乙基)甘氨酸； 步骤3)将12克N-(2-Fmoc-氨乙基)甘氨酸溶于100毫升的无水甲醇中，7.72毫升二氯亚砜在冰浴下滴入，滴完后此温度下继续反应15分钟，然后回流2小时，除掉溶剂，用9/1的乙醚和甲醇溶解，O度析晶，过滤，乙醚洗涤，干燥，得到纯品，为N-(2-Fmoc-氨乙基)甘氨酸甲酯盐酸盐； 步骤4)将389克干燥的腺嘌呤悬浮于6升的DMF中，加入40克的氢化钠，反应液搅拌，有氢气溢出，搅拌15分钟后，再加入42克氢化钠，搅拌I小时后,有大量固体析出，搅拌困难，再加入1.5升的 DMF，继续搅拌3小时，351毫升的溴乙酸乙酯在半个小时内滴加完毕，此过程中有冰浴保持温度在20-30度范围内，然后室温搅拌过夜，蒸除容积，加入3升水，搅拌一小时，过滤固体，水洗三次，固体悬浮于2升乙醇中，搅拌回流45分钟，冷到室温，搅拌过夜，抽滤，得固体，乙醇洗涤，干燥，得纯品，为9-乙酸乙酯腺嘌呤；步骤5)将433克9-乙酸乙酯腺嘌呤和478克羰基二咪唑悬浮于4升的D...
【专利技术属性】
技术研发人员：凌静，刘金永，
申请(专利权)人：苏州维泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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