基于腺相关病毒的山羊β-乳球蛋白基因打靶质粒的构建及其打靶方法技术

本发明专利技术公开了一种基于腺相关病毒为载体的山羊β-乳球蛋白基因打靶质粒及其构建方法。本发明专利技术还公开了所述山羊β-乳球蛋白基因打靶质粒的打靶方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，具体地说，是关于一种基于腺相关病毒的山羊￠-乳球蛋白基因打靶质粒的构建及其打靶方法。
技术介绍
按照人类的意愿对基因组进行定向靶向修饰一直是许多科学家的梦想。在内源的基因组上特异地删除或加入需要的序列，一方面可以构建各种动物模型，用于生物学基础研究和疾病机理研究，另一方面可以生产动物反应器，用于廉价生产人们需要而又很难从其他途径得到的生物组分。传统的基因打靶定向修饰依赖于细·胞内自然发生的同源染色体随机交换，然而，这种方法效率非常低，通常只有10_7。因此，这种打靶方法只有在小鼠的胚胎干细胞(ES细胞)中得到应用，但无法应用于体细胞和其他物种的干细胞中。腺相关病毒(AAV)属于细小病毒科的依赖性病毒属，是最小和最简单的动物病毒，也是一种具有极端寄生性的卫星病毒。AAV通常需要腺病毒、疱疹病毒等辅助病毒的帮助，才能在其生活周期的繁殖相进行自我复制。1998年，Russell等报道了用AAV作载体进行基因打靶的一系列实验。包括AAV被用于修复人宫颈癌HeLa细胞中neo基因的复合突变，以及在HT-1080人骨肉瘤细胞和正常人成纤维细胞中介导单拷贝X连锁HPR本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于腺相关病毒为载体的山羊β?乳球蛋白基因打靶质粒，其特征在于，所述质粒具有如下的序列：5’AAV，左臂，人乳铁蛋白cDNA，loxp?ef1a?neo?pA?loxp，核糖体插入序列(IRES)，右臂3’。

【技术特征摘要】
1.一种基于腺相关病毒为载体的山羊￠-乳球蛋白基因打靶质粒，其特征在于，所述质粒具有如下的序列:5’ AAV,左臂，人乳铁蛋白cDNA, loxp-ef la-neo-pA-loxp,核糖体插入序列(IRES)，右臂3’。2.按权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述质粒的载体是将pAAV-MCS质粒的反向重复序列旁的Not I位点通过PCR的方法更改为BamH I位点获得。3.按权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述质粒除载体外的插入片段的基因顺序为:5’左臂，人乳铁蛋白cDNA, loxp-ef la-neo-pA-loxp,核糖体插入序列(IRES),右臂3’。4.按权利要求3所述的左臂，其特征在于，所述左臂的序列为山羊基因组中￠-...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖磊，赵金龙，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：