【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种农杆菌介导转化番茄的方法，属于遗传工程
，具体涉及番茄种子整体侵染转化的方法。
技术介绍
番茄是一种世界性种植的最重要的鲜食和加工原料。它的基因组较小，是一种理想的模式植物。另外，番茄还具有自花授粉易于纯合、生长周期短、在温室内可周年生长等优点，因而其遗传转化研究备受关注。自从1986年McCormick等首次用农杆菌介导的方法获得转基因番茄植株以来，番茄的遗传转化研究不断发展，但转化效率有很大差异。影响农杆菌介导番茄遗传转化的因素很多，如番茄基因型、侵染时间、分化培养基等，其中基因型对植物生长调节剂的专一性，使得需要对每个番茄基因型的转化过程分别进行研究，以寻求不同基因型植株最适合的转化方法，即由于再生受基因型限制，从而使转化变得较困难；外植体大小对番茄的再生也有重要影响，理想的外植体大小为叶片0.5cm2，外植体的放置方向有近轴面向上和背面向上两种方式，但基本原则是使外植体的伤口与培养基有较好的接触，以利于外植体愈伤组织的诱导和芽的分化；基因型、分化培养基都是基于再生体系而形成的限制，从而使番茄的遗传转化变得更困难。番茄是植物基因工程...
【技术保护点】
一种番茄遗传转化的方法，该方法是采用番茄种子整体侵染的方法实现的，步骤包括：①?测成熟番茄种子的生理吸胀曲线，②?含有目标基因的发根农杆菌培养，③?番茄种子的消毒灭菌，④?结合番茄种子的生理吸胀曲线，将经消毒灭菌的成熟番茄种子转入到OD600值为0.8?1.3的发根农杆菌菌液中振荡侵染7?9小时，⑤?在25℃黑暗条件下共培养3天，⑥?抗性植株的筛选，⑦?抗性植株的生根及培育，⑧?转化植株炼苗及移栽。
【技术特征摘要】
1.一种番茄遗传转化的方法，该方法是采用番茄种子整体侵染的方法实现的，步骤包括:①测成熟番茄种子的生理吸胀曲线，②含有目标基因的发根农杆菌培养，③番茄种子的消毒灭菌，④结合番茄种子的生理吸胀曲线，将经消毒灭菌的成熟番茄种子转入到0D_值为0.8-1.3的发根农杆菌菌液中振荡侵染7-9小时，⑤在25°C黑暗条件下共培养3天，⑥抗性植株的筛选，⑦抗性植株的生根及培育，⑧转化植株炼苗及移栽。2.根据权利要求1所述的一种番爺遗传转化的方法，其特征在于:步骤①所述测成熟番茄种子的生理吸胀曲线的方法是:取8份等量的成熟番茄种子，每隔2小时取I份浸泡到水中，分别浸泡0、3、5、7、9、11、13、15小时，记录番茄种子的吸胀停滞点为7-9小时；步骤②所述含有目标基因的发根农杆菌培养的方法是:将发根农杆菌A4在LB固体培养基平板上接种活化2次，挑取该菌株的单菌落接种到5 ml含有50 Ug πιΓ1卡那霉素的LB液体培养基中，在温度26 °C、振荡转速160-200 rpm的条件下，培养5_8小时，然后取I ml转接于50 ml含有50 Ug.πιΓ1卡那霉素和110 umol.L—1乙酰丁香酮的LB液体培养基中，在温度26 °C、振荡转速160-200 rpm的条件下，培养12-16小时后，取50 ml菌液加入到离心管中，置于低温冷冻离心机中，在温度25 °C、转速3500 rpm条件下离心10分钟，弃上清液，得菌体沉淀，用含6 mg.Γ1 6-BA和110 umol -T1乙酰丁香酮的MS液体培养基重悬上述菌体沉淀至0D_值为0.8-1.3备用；步骤③所述番茄种子灭菌的方法是:挑选饱满的番茄种子，蒸馏水浸泡1.5-2小时，Cl2灭菌20分钟，无菌水冲洗5-6次，准备侵染用；步骤④所述结合番茄种子的生理吸胀曲线，侵染番茄种子7-9小时的方法是:结合番茄种子的生理吸胀曲线，将经消毒灭菌的成熟番茄种子转入到装有步骤②制备的发根农杆菌菌液的无菌三角瓶中，农杆菌菌液量...
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