一种发根农杆菌介导的转基因灯盏花毛状根转化方法技术

本发明专利技术属于植物生物技术中的植物基因工程技术领域，具体而言，涉及一种发根农杆菌介导的转基因灯盏花毛状根遗传转化的方法。本发明专利技术将预培养后的灯盏花无菌苗叶片外植体浸入携带重组质粒的C58C1发根农杆菌菌液中，经侵染、共培养及除菌处理后，将毛状根培养在含潮霉素B(Hyb)的筛选培养基上进行筛选，利用PCR扩增方法进一步鉴定携带目的基因的转基因发根后，液体培养基培养。采用本发明专利技术提供的技术方案，可将目的基因导入灯盏花，与聚乙二醇等化学方法的遗传转化相比，减少了原生质体分离和培养的环节；与基因枪等物理方法的遗传转化相比，不需要昂贵的仪器设备，且操作技术简单。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物生物技术中的植物基因工程
，具体而言，设及一种发根 农杆菌介导的转基因灯盏花毛状根遗传转化的方法。
技术介绍
植物细胞的遗传转化是植物基因工程的一个关键环节。自Abel等（1986)将烟草 花叶病毒灯MV)衣壳蛋白cDNA导入烟草细胞，获得抗TMV病毒的转基因烟草植株后，先后 发展了许多植物遗传转化方法和技术。 灯盏花Elrigeron breviscapus (Vant. )Hand-Mazz.又名灯盏细辛、短亭飞蓬，是为 菊科飞蓬属多年生草本植物。其主要有效成分为灯盏花素，即灯盏乙素和少量灯盏甲素的 混合物。灯盏花素具有舒张血管、改善微循环、抑制血小板及红细胞聚集，治疗冠屯、病、屯、绞 痛、肾衰和高血脂症等疾病等多种作用。但是作为云南最有发展前景的药物之一，却面临着 种质退化的严峻挑战。因此，从处于代谢节点处的关键基因着手，改善灯盏花的种质，提高 灯盏花素的含量成为亟待解决的问题。目前尚未有灯盏花遗传转化体系建立的报道。 自 1907 年Smith和Townsend发现发根农杆菌（Agrobacteriumrhizogenes)會b 诱导植物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种发根农杆菌介导的转基因灯盏花毛状根转化方法，其特征在于该方法包括以下步骤：a.从灯盏花无菌苗上剪取0.5‑1cm2大小的叶盘，接种到预培养培养基上，25℃暗培养2天，作为遗传转化的受体；所述的预培养培养基为：B5培养基+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，pH 5.8‑6.0；b.挑取含有携带目的基因的PHB‑Flag表达载体的C58C1发根农杆菌单菌落，接种到1ml含40mg/L利福平及卡那霉素的YEB培养基，于28℃，200rpm振荡培养12‑14h后，从中取200μL菌液接种到30ml上述YEB培养基中，于28℃下，200rpm振荡培养至OD600为0.6±0.1；常温下，5000rp...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张磊，黄鑫，陈瑞兵，刘江华，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31