基于农杆菌介导的冬芽注射的桑树转基因方法技术

本发明专利技术公开了一种基于农杆菌介导的冬芽注射的桑树转基因方法，是将含目的基因重组载体的农杆菌工程菌转化液直接微量注射至桑树将要萌发的冬芽中，通过农杆菌侵染冬芽顶端分生组织分生细胞和冬芽腋芽分生细胞获得成功转化的芽分生细胞，所得芽分生细胞分化生长获得转基因的桑枝条和芽，再通过桑树的嫁接无性繁殖或桑雌果和雄花的杂交有性繁殖技术获得转基因嫁接桑苗或获得转基因桑种，进而大量获得桑树转基因苗木和种子。该方法免去了诸如组织培养的繁琐步骤以及无菌的操作环境等要求，直接在植株上进行，在自然环境下即可完成，成本低廉，操作简单，技术要领掌握容易、可重复性好，转化效率较高，能够快速获得适宜当地野外自然条件的转基因植株、苗木及种子，并且适用于多种桑树品种，是一种新型、高效、实用的桑树转基因方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物基因工程领域，涉及一种农杆菌介导的桑树转基因方法。
技术介绍
木本植物大多为多年生植物，相对于农作物等一、二年生草本植物而言，一般具有生命周期长、成熟开花晚、遗传背景复杂等特点，其遗传转化方面的研宄一直相对滞后。近年来，随着农杆菌介导的植物遗传转化的快速发展，研宄者们已经相继在杨树L.)、朿Ij 槐pseudoacacia Linn.)、苹果pumi I a)、紙{Amygda I u s persicaL.)、柑橘(CYtras reticulata Blanc0.)等木本植物中成功建立了遗传转化体系。这些木本植物的遗传转化都是利用其叶、茎等组织易于培养和再生的特点，通过与农杆菌共培养，诱导再生出丛生芽后，筛选获得阳性丛生芽，再进一步培养成转基因株系。桑树是一种多年生木本植物，具有很强的环境适应能力、耐修剪和种苗易繁育等优良林木树种特点，具有改善空气质量、保水固土防沙等优良生态功能，不仅其叶是家蚕唯一食料来源，其果、叶、枝、皮还皆为良药，所含的氨基酸和抗氧化物质十分丰富。因此，桑树生物资源的多用途开发价值和潜力巨大，其多元化开发研宄对推动以获取桑叶养蚕为本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于农杆菌介导的冬芽注射的桑树转基因方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将含有目的基因的农杆菌工程菌接种到含有筛选压的液体培养基中进行扩大培养，当菌液OD600值达到0.8～1.2时分离菌体，用悬浮培养基重悬浮，再加入乙酰丁香酮，获得农杆菌工程菌转化液；所述悬浮培养基为含有渗透剂和表面活性剂的1/2MS培养基；（2）选取待转化桑树品种枝条上将要萌发且个体体型较大的冬芽，将冬芽生长点刺伤后注入农杆菌工程菌转化液至溢出为止，用脱脂棉包裹注射后的冬芽；重复此步骤向选取冬芽连续注射农杆菌工程菌转化液5～7次，每天1次；（3）对注射后冬芽长出的叶片进行转基因鉴定，筛选出阳性枝条；（4）筛选出的阳性枝条...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵爱春，郭庆，刘长英，余茂德，向仲怀，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;85