【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种杨树遗传转化方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取南林895杨幼嫩茎段和边缘有伤口的叶片,置于T培养基上诱导培养出愈伤组织;并经过T1培养基多次继代,筛选出状态良好的愈伤组织;其中,所述T培养基为MS+?2,4?D?2~3mg/L+蔗糖20g/L,pH5.8,琼脂7.5g/L,121℃,灭菌16min;所述T1培养基为MS+2,4?D?2mg/L+NAA?0.2mg/L+KT?0.1mg/L+蔗糖30g/L,pH5.8,琼脂7.5g/L,121℃,灭菌16min;(2)将筛选出的愈伤组织进行悬浮培养,悬浮培养基为T2;其中,T2培养基为MS+2,4?D2mg/L?+NAA0.2mg/L+KT0.1mg/L+水解乳蛋白500mg/L+蔗糖30g/L,pH5.8,琼脂7.5g/L,121℃,灭菌16min;(3)从平板中挑取含有待遗传转化目的基因的农杆菌单菌落,接种到附加卡那霉素的LB液体培养基中,28℃、220rmp振荡培养24h,先做菌液PCR鉴定目的基因,再取已经PCR检测的阳性菌液1mL转接到50mL含相应抗生素的LB培养基中,培养12?18h,5000rpm、4℃下离心10 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:诸葛强,郑小姣,潘惠新,尹佟明,孙伟博,杨贞,刘铃,
申请(专利权)人:南京林业大学,
类型:发明
国别省市:
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