【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种苜蓿遗传转化的方法，属于遗传工程
，具体涉及一种苜蓿种子整体侵染转化的方法。
技术介绍
草原与土地、森林、海洋等一样，是重要的战略资源。是我国国土的主体和陆地生态系统的主体，是我国面积最大的绿色生态屏障，具有防风固沙、涵养水源、保持水土、净化空气以及维护生物多样性等重要生态功能，对减少地表水土冲刷和江河泥沙淤积，降低水灾隐患具有不可替代的作用。发展草业是维护国家生态安全、建设环境友好型社会的战略举措，是建设现代农业、增加农牧民收入的重要途径；有利于增加畜产品的供给，减少对粮食的依赖，实现“藏粮于草”，扩大人们的食物来源，改善食物结构，提高生活质量和水平。发展草业是加快草原地区发展、构建和谐社会的迫切需要。紫花苜蓿以“牧草之王”著称，不仅产草量高，草质优良，而且富含粗蛋白、维生素和无机盐，蛋白质中氨基酸成分齐全，动物必需氨基酸含量丰富。干物质中粗蛋白质含量为18.8%，接近于豆饼的一半，比玉米高I倍左右，适口性好，可青饲、青贮或晒制干草。苜蓿青干草可常年供家畜饲用，优质的苜蓿干草保持色泽青绿，气味芳香，质地柔软，叶片不脱落，适口性好。幼嫩的...
【技术保护点】
一种苜蓿遗传转化的方法，该方法是采用苜蓿种子整体侵染的方法实现的，步骤包括：①?测成熟苜蓿种子的生理吸胀曲线，②?含有目标基因的根癌农杆菌培养，③?苜蓿种子消毒灭菌，④?结合苜蓿种子的生理吸胀曲线，将经灭菌的成熟苜蓿种子转入到OD600值为0.8?1.3的根癌农杆菌菌液中振荡侵染8?10小时，⑤?在25℃黑暗条件下共培养3天，⑥?抗性植株的筛选，⑦?抗性植株的生根及扩繁，⑧?转化植株炼苗及移栽。
【技术特征摘要】
1.一种苜蓿遗传转化的方法，该方法是采用苜蓿种子整体侵染的方法实现的，步骤包括:①测成熟苜蓿种子的生理吸胀曲线，②含有目标基因的根癌农杆菌培养，③苜蓿种子消毒灭菌，④结合苜蓿种子的生理吸胀曲线，将经灭菌的成熟苜蓿种子转入到0D_值为0.8-1.3的根癌农杆菌菌液中振荡侵染8-10小时，⑤在25°C黑暗条件下共培养3天，⑥抗性植株的筛选，⑦抗性植株的生根及扩繁，⑧转化植株炼苗及移栽。2.根据权利要求1所述的一种苜蓿遗传转化的方法，其特征在于:步骤①所述测成熟苜蓿种子的生理吸胀曲线的方法是:取8份等量的成熟苜蓿种子，每隔2小时取I份浸泡到水中，分别浸泡0、2、4、6、8、10、12、14小时，记录苜蓿种子不发生损伤的吸胀停滞点为8-10小时； 步骤②所述含有目标基因的根癌农杆菌培养的方法是:将根癌农杆菌接种于LB固体培养基平板上活化2次，之后挑取该菌株的单菌落接种到5 ml含有20 Ug πιΓ1利福平和50 Ug πιΓ1卡那霉素的LB液体培养基中，在温度26°C、振荡转速160-200 rpm的条件下，培养5-8小时，然后取I ml转接于50 ml含有20 Ug.πιΓ1利福平、50 Ug.πιΓ1卡那霉素和110 umol.Γ1乙酰丁香酮的LB液体培养基中，在温度26°C、振荡转速160-200 rpm的条件下，培养12-16小时后，取50 ml菌液加入到离心管中，置于低温冷冻离心机中，3500rpm条件下离心10分钟,弃上清液,得菌体沉淀,用含6 mg.L—1 6-BA和110 umol.L—1乙酰丁香酮的MS液体培养基重悬上述菌体沉淀至0D_值为0.8-1.3备用；步骤④所述结合苜蓿种子的生理吸胀曲线，侵染苜蓿种子8-10小时的方法是:结合苜蓿种子的生理吸胀曲线，将经消毒灭菌的成熟苜蓿种子转入到装有步骤②制备好的根癌农杆菌菌液的无菌三角瓶中，农杆菌菌液量以刚浸没苜蓿种子为准，用封口膜封住瓶口，置于摇床中，在温度26°C, 166 rpm...
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