用于表达、传递及纯化目标多肽的重组载体分子制造技术

本发明专利技术是用于表达、传递及纯化目标多肽的重组载体分子。提供具有来自热稳定酶的氨基酸序列的重组载体分子和用于表达、回收和传递在活体外或活体内不同体系(细菌、酵母、DNA、细胞培养物，诸如哺乳动物、植物、昆虫细胞培养物、原生质体和全植株)中产生的外源序列(肽和多肽)的方法。还使用来自地衣多糖酶B(Lic?B)的序列制备了重组载体分子且将其用作载体蛋白的一部分来表达、回收和传递所讨论的各种目标多肽。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是针对蛋白质表达、纯化及分子生物学领域。特定而言，本专利技术是针对载体蛋白表达，其中使用热稳定酶的成 熟多肽作为载体分子以供产生、回收及传递目标多肽。载体分子可用于在包括植物及哺乳动物细胞培养物的不同表达体系及宿主中产生外源序列。
技术介绍
疫苗是防止并甚至消除传染性疾病最有效的方法。尽管有大量基于全病原体的有效疫苗，但是研制基于部分病原体(亚单位疫苗)的更安全有效而且更经济的疫苗是很重要的。过去二十年中已经研究出若干疫苗抗原表达(细菌、酵母、哺乳动物细胞培养物及植物)及传递(DNA、活病毒载体、纯化蛋白、植物病毒粒子)的方法。所有这些方法对研发和检验新近研制出的候选疫苗具有显著影响。然而，需要改进表达和传递体系以产生更有效而更安全并具有更小副作用的疫苗。未来疫苗所希望的某些特点为:(a)高效(刺激免疫体系的两个臂)，(b)具有已知和受控基因组成，(C)具有体系时效性，(d)适于表达小型肽及大型多肽两者，(e)适于在不同体系(细菌、酵母、哺乳动物细胞培养物、活病毒载体、DNA载体、转基因植物和瞬时表达载体)中表达，及(f)能够形成诸如凝聚体(aggregate)或类病毒粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组多肽，其包含经修饰的地衣多糖酶B(lichenase?B)多肽，所述地衣多糖酶B多肽包含与SEQ?ID?NO：3的氨基酸14?231位或SEQ?ID?NO：6的氨基酸8?226位具有至少90％序列相似性的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
2003.05.22 US 60/472,4951.一种重组多肽,其包含经修饰的地衣多糖酶B(lichenase B)多肽，所述地衣多糖酶B多肽包含与SEQ ID NO:3的氨基酸14-231位或SEQ ID NO:6的氨基酸8-226位具有至少90%序列相似性的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的重组多肽，其中所述经修饰的地衣多糖酶B多肽由SEQID NO:1或5编码。3.如权利要求1所述的重组多肽，其中所述经修饰的地衣多糖酶B多肽包含与SEQIDNO:3的氨基酸14-231位或SEQ ID NO:6的氨基酸8-226位具有至少95%序列相似性的氨基酸序列。4.如权利要求1所述的重组多肽,其中所述经修饰的地衣多糖酶B多肽包含由SEQIDNO:3或SEQ ID NO:6所示的序列。5.如权利要求1所述的重组多肽，其中所述经修饰的地衣多糖酶B多肽具有SEQIDNO:3的氨基酸14-231位氨基酸序列或SEQ ID NO:6的氨基酸8-226位氨基酸序列。6.如权利要求1所述的重组多肽，其还包含一个与所述经修饰的地衣多糖酶B多肽融合的异源多肽序列以生成融合蛋白。7.如权利要求6所述的重组多肽，其中所述经修饰的地衣多糖酶B多肽与两个或更多个含抗原决定部位的异源多肽片段融合。8.如权利要求6所述的重组多肽，其中所述异源多肽序列包含来自于生长因子、细胞分裂素、配体、受体、抑止子、抗原、抗原决定部位、T细胞抗原决定部位、B细胞抗原决定部位、抗体、水解酶、绿色荧光蛋白、干扰素、白细胞介素、病原体相关蛋白或毒素的一个序列。9.如权利要求6所述的重组多肽，其中所述异源多肽序列包含一个疫苗抗原。10.如权利要求1所述的重组多肽，其还包含一用于分离或纯化或其两者的标签。11.如权利要求10所述的重组多肽，其中所述标签是His6。12.如权利要求6所述的重组多肽，其还包含一酶切割位点。13.如权利要求12所述的重组多肽，其中所述切割位点是位于所述异源多肽和所述经修饰的地衣多糖酶B多肽之间。14.如权利要求1所述的重组多肽，其还包含一个标签和一个切割位点，其中所述切割位点位置与所述标签相邻。15.如权利要求1所述的重组多肽，其还包含一联结子。16.—种编码如权利要求1-15中任一权利要求所述的重组多肽的核酸。17.—种包含如权利要求16所述的核酸的表达载体。18.如权利要求17所述的表达载体，其中所述载体是植物病毒载体。19.一种包含如权利要求17所述的表达载体的宿主细胞。20....

【专利技术属性】
技术研发人员：维达季·尤西波夫，瓦季姆·梅特，康斯坦丁·穆西丘克，
申请(专利权)人：美国弗劳恩霍夫股份有限公司，
类型：发明
国别省市：